亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與低誕生體重關(guān)系

亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與低誕生體重關(guān)系吳滌李靜楊艷芳 關(guān)明杰 王琨秦榮【摘要】目的探討亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性與新生兒低誕生體重的關(guān)系。方式采納病例對照研究方式，搜集108例正常體重兒和57例低誕生體重兒和母親的流行病學(xué)資料及母親的靜脈血標(biāo)本，用PCRRFLP方式分析母親MTHFR基因型，采納Iogistic回歸法分析母親MTHFR基因型與新生兒誕生體重的關(guān)系。結(jié)果調(diào)整要緊混雜因素后，未發(fā)覺MTHFRCT/TT基因型與低誕生體重之間存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(OR=，95%CI：～)。結(jié)論母親MTHFR基因多態(tài)性與低誕生體重不存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)?！娟P(guān)鍵詞】 亞甲基四氫葉酸還原酶 ;多態(tài)性;基因;低誕生體重【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheassociationbetweengeneticpolymorophismsofthemethylenetetrahydrofolatereductasegene(MTHFR)inmotherandlowbirthweightintheAcasecontroldesignwasused.Fiftysevennewbornswithlowbirthweightwererecruitedasthecasegroups,and108newbornwithnormalbirthweightasthecontrol group.Aface to facequestionnaire wasadministeredtocollectdemographicandrelevantinformation.Bloodsampleswerecollectedfrommothersofbothgroups.PCRRFLPmethodwasappliedtoexamineMTHFRpolymorphisms.LogisticregressionwasusedtoanalyzetheassociationbetweengeneticpolymorphismsofMTHFRgeneinthemotherandlowbirthweightinthenewborn,whilecontrollingforpotentialconfoundingfactors.ResultsAfteradjustmentforthemainconfoundingfactors,nostatisticalassociationwasnotfoundbetweenMTHFRCT/TTgenotypeandlowbirthweight(OR=,95%CI:.ConclusionNostatisticalassociationbetweengeneticpolymorphismsofMTHFRgeneandlowbirthweightwasnotedinthispopulation.【Keywords】MethylenetetrahydrofolatePolymorphism;Gene;Lowbirthweight

reductase;低誕生體重作為早產(chǎn)、宮內(nèi)發(fā)育遲緩、或二者兼有的表現(xiàn)結(jié)果，是新生兒死亡的要緊因素之一 ,中國低誕生體重兒發(fā)生率為活產(chǎn)嬰兒的 %[1]。低誕生體重的發(fā)生存在專門大的個體不同，但人們對致使這些不同的因素卻知之甚少。許多環(huán)境因素被證明與低誕生體重有關(guān)，但這些環(huán)境因素僅能說明極小的一部份不同。大量證聽說明 ,低誕生體重的發(fā)生是由遺傳和環(huán)境因素一起作用的結(jié)果。 有研究報導(dǎo),先本性蛋氨酸 同型半胱氨酸(methionine homocysteine，MetHcy)代謝異樣引發(fā)的血管病變可致使胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩 [2]。亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)為同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代謝途徑的關(guān)鍵酶，MTHFR基因突變可使酶活性下降，造成血中Hcy增高。本研究通過檢測母親MTHFR基因多態(tài)性，探討該基因突變與新生兒誕生體重的關(guān)系，為低誕生體重發(fā)生機制研究提供科學(xué)依據(jù)。對象與方式一、對象2003～2006年在包鋼集團第三職工醫(yī)院住院臨盆的108例正常體重兒(正常組)和57例低誕生體重兒(低誕生體重組)及其母親。低誕生體重兒的入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)孕周>28周，體重<2500g;(2)正常臨盆，剔除意外情形引發(fā)的早產(chǎn)兒;(3)剔除雙胎或多胎、先天畸形兒。正常體重兒入選標(biāo)準(zhǔn)：選擇同一醫(yī)院誕生的孕周≥ 28周、體重≥2500g、誕生時刻相差 <7d 、單胎正常活產(chǎn)嬰兒;2組剔除懷胎期有歸并癥及并發(fā)癥妊婦和新生兒。二、方式問卷調(diào)查：項目課題組成員依照文獻檢索結(jié)果，考慮阻礙誕生體重的相關(guān)因素設(shè)計調(diào)查問卷。采納統(tǒng)一問卷調(diào)查表，由經(jīng)培訓(xùn)的調(diào)查員對每一個妊婦進行面對面詢問調(diào)查，取得詳細(xì)社會人口學(xué)資料，同時詢問母親懷孕期間情緒、緊張程度、多夢、失眠狀況、家人關(guān)照程度及懷孕期間天天利用運算機時刻、看電視時刻等自我感覺和行為因素。依照產(chǎn)房病例記錄新生兒誕生孕周、誕生體重。母親體重和血壓為孕前健康體檢時所檢測結(jié)果。血樣搜集及DNA提?。河肊DTA抗凝管經(jīng)無菌操作取母親外周血2ml,4 ℃保留,24h 內(nèi)按標(biāo)準(zhǔn)法[3] 提取基因組DNA。3.基因型檢測:(1)MTHFR(C677T)。聚合酶鏈?zhǔn)椒从?polymerasechainreaction,PCR)擴增引物5’CAAAGGCCACCCCGAAGC3’5’AGGACGGTGCGGTGAGAGTG3’(引物由上海生物工程公司合成)。μlPCR反映體系中含有10×Buffer(Mg2+15mmol/L)μl,dNTP(mmol/L)μl,上游引物(5μmol/L)μl,下游引物(5μmol/L)μl,基因組DNAμl,TaqDNA聚合酶(2MU/L)μl,滅菌雙蒸水μl。反映條件為94℃、5min，94℃、45s，62℃、40s，72℃、45s，擴增35個循環(huán)，最后72℃延伸7min。PCR擴增產(chǎn)物245bpDNA片段。(2)限制性內(nèi)切酶消化。PCR擴增產(chǎn)物10μl,酶切緩沖液2μl,無菌去離子水7.5μl,HinfI限制性內(nèi)切酶5U,37℃水浴酶切6h,2%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色(TaqDNA聚合酶、dNTPMixture、Marker、購自大連TaKaRa寶生物公司，瓊脂糖等試劑購自上海生物工程公司 )。CC基因型顯示245bp片段;CT基因型顯示245bp、175bp、70bp3條片段;TT基因型顯示175bp和70bp2條片段。統(tǒng)計學(xué)處置：用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采納χ2查驗，計量資料采納t查驗。依照等位基因的頻率，用χ2查驗對MTHFR基因型散布進行遺傳平穩(wěn)查驗。用多因素Iogistic回歸分析母親MTHFR基因型與新生兒誕生體重的關(guān)系，并調(diào)整身高、體重、文化程度、健康狀況、收縮壓、舒張壓、臨盆孕周、情緒、失眠、多夢、緊張、利用運算機時刻、看電視時刻及家人關(guān)照程度14個對誕生體重可能產(chǎn)生阻礙的因素。結(jié)果一、2組母親及新生兒生理因素比較低誕生體重組母親收縮壓、舒張壓、心率、第一次月經(jīng)年齡(簡稱月經(jīng)首齡)高于正常組，睡眠時刻擅長正常組，臨盆孕周和新生兒體重低于正常組，不同均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<，見表1。表12組母親及新生兒生理因素比較二、2組母親社會和行為因素比較低誕生體重組初中以下文化程度比例高于正常組，天天看電視時刻少于1h者高于正常組，心情愉快的比例低于正常組，有時失眠的比例高于正常組，不同有統(tǒng)計學(xué)意義(P<。三、母親MTHFR基因多態(tài)性與低誕生體重關(guān)系MTHFR基因型散布，108例正常體重組母親中，MTHFR基因CC型為%(52/108)，CT/TT型為%(56/108)，57例低誕生體重兒母親中，MTHFR基因

CC型為

%(26/57)

，CT/TT型為

%(31/57)

，2

組組成比不同無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=,P>,組母親社會和行為因素比較 [

符合Hardy例(%)]

Weinberg

平穩(wěn)。表

22四、母親MTHFR基因多態(tài)性與低誕生體重關(guān)系單因素分析，57例低誕生體重兒母親與 108例正常體重組母親MTHFR基因第677位點CT/TT基因型與CC基因型相較，未發(fā)覺MTHFR基因CT/TT基因型與新生兒低誕生體重發(fā)生危險之間存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P=，OR=，95%CI：～;將單因素分析有統(tǒng)計學(xué)意義的變量進入多因素Logistic回歸模型中，以誕生體重作為因變量，MTHFR(C677T)CT/TT基因型作為自變量，調(diào)整母切身高、體重、文化程度、健康狀況、收縮壓、舒張壓、臨盆孕周、情緒、失眠、多夢、緊張、利用運算機時刻、看電視時刻及家人關(guān)照程度14個變量后，未發(fā)覺MTHFR基因CT/TT基因型與新生兒低誕生體重發(fā)生危險之間存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P=，OR=，95%CI：～。討論臨盆代表胎兒在宮內(nèi)生長發(fā)育的終點，它受母親、胎盤、胎兒和一系列生物和環(huán)境因素的阻礙。以往對低誕生體重的遺傳阻礙因素研究相對較少。有證聽說明，誕生體重受遺傳和環(huán)境因素的阻礙。在同胞之間誕生體重的相關(guān)系數(shù)為至(中位數(shù)約為[4]。有人觀看到低誕生體重存在著代與代之間的遺傳，說明遺傳因素在低誕生體重的發(fā)生中起必然作用。 MTHFR基因定位于染色體上[5]，可將體內(nèi)5,10亞甲基四氫葉酸還原為5甲基四氫葉酸,成為體內(nèi)葉酸的要緊活性形式。目前以為MTHFR基因第4外顯子的C677T堿基突變最為常見,該位點突變使高度保守的丙氨酸轉(zhuǎn)變成纈氨酸,使MTHFR活性降低50%,并產(chǎn)生不可耐熱性,從而引發(fā)Hcy在血漿中的蓄積致使高Hcy血癥[6]。Cris等[7]研究顯示，在8～9孕周,當(dāng)Hcy為15μmol/L時,自然流產(chǎn)的發(fā)生率增加7倍;Hcy為10μmol/L時,胎死宮內(nèi)的危險性增加2倍。高Hcy致使絨毛膜血管形成缺點,致使流產(chǎn)容易發(fā)生。懷胎期高Hcy可增加母親血栓形成的危險性,引發(fā)胎盤血栓栓塞,從而引發(fā)流產(chǎn)。高Hcy使細(xì)胞處于高氧化應(yīng)激狀態(tài)從而具有胚胎毒性作用,致使胚胎發(fā)育異樣或遲緩，引發(fā)新生兒誕生體重減輕。陳大方等[8]研究結(jié)果顯示，嬰兒MTHFRCT和TT基因型不但增加早產(chǎn)發(fā)生的危險性,而且能夠增加低誕生體重發(fā)生的危險。但母親MTHFR基因?qū)υ绠a(chǎn)和低誕生體重的阻礙均沒有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究所得結(jié)果與之一致。鐘秋安等[9]研究取得相同結(jié)果，顯示母親MTHFR基因突變型、對低誕生體重阻礙無統(tǒng)計學(xué)意義(P>,但MTHFR基因突變型與CBS基因突變型對低誕生體重的阻礙存在交互作用。其能增加子代低誕生體重發(fā)生的危險。盡管高Hcy血癥亦會在胎兒血液循環(huán)中有所表現(xiàn),從而能引發(fā)胎兒心血管發(fā)育異樣、神經(jīng)管發(fā)育異樣、早產(chǎn)等結(jié)果,這可能會致使胎兒誕生體重的降低。但本研究結(jié)果未顯示MTHFR基因多態(tài)性與誕生體重之間的統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)，可能與本研究搜集的樣本數(shù)量小而致使查驗把握度不足有關(guān)，進而阻礙分析結(jié)果。同時因本研究搜集樣本數(shù)量有限，在分析MTHFR基因型時將雜合突變CT基因型與純合突變TT基因型歸并進行。爾后將進一步擴大樣本量，探討二者之間的關(guān)系及基因與環(huán)境的交互作用對誕生體重的阻礙。為低誕生體重的病理發(fā)生機制提供科學(xué)依據(jù)。【參考文獻】1林良明，劉玉琳，張新利，等 .中國低誕生體重兒抽樣調(diào)查結(jié)果[J]. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2002，36(3)：149 153.何平,孟會,張建平.MTHFR基因C677T位點多態(tài)性與胎兒生長受限的相關(guān)性[J]. 中國婦幼保健，2007，22(35)：5032 5034.3J.薩姆布魯克，.佛里奇，T.曼尼阿蒂斯. 分子克隆實驗指南[M].第2版. 北京：科技出版社，1992.465 467.4WangXB，ZuckermanB，CoffmanGA,etal. Aggregationoflowbirth weightamongwhitesandblacksintheUnitedStates[J].NewEngJMed,1995,333:1744 1749.5Fodinger M,HorlWH,SunderG.Molecular biol ogyof5,10methylenetet rahydrofolate reductase[J] .J Nephrol,2