動(dòng)物細(xì)胞工程北京中學(xué)內(nèi)部演示文稿

動(dòng)物細(xì)胞工程北京中學(xué)內(nèi)部演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五優(yōu)選動(dòng)物細(xì)胞工程北京中學(xué)內(nèi)部現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)手段

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：動(dòng)物細(xì)胞工程的技術(shù)基礎(chǔ)

動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的環(huán)境中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。理論基礎(chǔ)：動(dòng)物細(xì)胞可以在體外增殖現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程1.取胚胎或幼齡動(dòng)物活組織或器官，如孵育13d或16d的雞蛋。2.胰蛋白酶使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，配成懸浮液在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，這個(gè)過(guò)程叫原代培養(yǎng)。3.原代培養(yǎng)的細(xì)胞分瓶培養(yǎng)叫傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)10代后大部分死亡，少數(shù)能傳到40~50代。其中大部分細(xì)胞又不再分裂而衰老死亡，但少數(shù)細(xì)胞遺傳物質(zhì)改變，并帶有癌變特點(diǎn)，能在培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖?，F(xiàn)在是6頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的兩個(gè)現(xiàn)象細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞貼附在瓶壁上生長(zhǎng)。接觸性抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖。現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五細(xì)胞貼壁過(guò)程現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中,隨著細(xì)胞分裂,數(shù)量不斷增加,最后形成一個(gè)單層,此時(shí)細(xì)胞間相互接觸,細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止。接觸抑制現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（二）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境原因：1)離體的動(dòng)物細(xì)胞失去了機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)，非常容易被微生物感染；2)細(xì)胞在代謝過(guò)程中積累的產(chǎn)物不能及時(shí)排出，容易對(duì)自身造成毒害。措施：1)對(duì)培養(yǎng)液、操作工具、培養(yǎng)環(huán)境做無(wú)菌處理，在培養(yǎng)液中加適量抗生素；2）定期更換培養(yǎng)液。現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五2、適宜的營(yíng)養(yǎng)物——培養(yǎng)液培養(yǎng)液的成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子、維生素、微量元素、動(dòng)物血清等?，F(xiàn)在是11頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五適用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物的典型培養(yǎng)基成分氨基酸精氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸維生素生物素、膽堿、葉酸、煙酰胺、泛酸、硫胺素、維生素B6、核黃素鹽類NaCl、KCl、NaH2PO4、NaHCO3、CaCl2、MgCl2其它葡萄糖、青霉素、鏈霉素、酚紅、全血清現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五3、溫度和pH：溫度：36.5℃

+/-0.5℃

pH值：。4、氣體環(huán)境：氧氣（細(xì)胞代謝必需）二氧化碳（維持pH），95%空氣加5%CO2混合氣體的培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)問(wèn)題培養(yǎng)的細(xì)胞為什么要取自動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是否體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性？為什么？組織細(xì)胞分散用胰蛋白酶，說(shuō)明細(xì)胞間的連接物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是什么？為什么要用胰蛋白酶，能用胃蛋白酶嗎？胰蛋白酶的處理時(shí)間能否隨機(jī)？為什么？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基與植物組織培養(yǎng)基有什么不同？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基為什么要加動(dòng)物血清？需要加什么動(dòng)物血清？為什么？現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五胰蛋白酶會(huì)消化細(xì)胞嗎？胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白質(zhì)為，長(zhǎng)時(shí)間作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用；作用時(shí)間太短，細(xì)胞不容易脫落，因此必須控制好作用時(shí)間。實(shí)際應(yīng)用中的處理：做預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸清效果最好時(shí)的胰蛋白酶的用量和作用時(shí)間。傳代代數(shù)與細(xì)胞的世代是一個(gè)概念嗎？不是一個(gè)概念。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所說(shuō)的“第10代細(xì)胞”僅指該細(xì)胞已經(jīng)傳代10次；細(xì)胞傳一代后，一般能倍增3-6次，經(jīng)過(guò)三個(gè)階段，即潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到平臺(tái)期時(shí)，需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。CO2培養(yǎng)箱的作用時(shí)什么？細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)箱一般稱為CO2培養(yǎng)箱，氣體環(huán)境95%空氣和5%CO2。作用是維持培養(yǎng)液的Ph。培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中加入NaHCO3，來(lái)調(diào)節(jié)PH，NaHCO3有釋放CO2的傾向，培養(yǎng)箱中的CO2可以抑制反應(yīng)，所以培養(yǎng)箱中的CO2濃度與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡。如果將CO2改為O2是不行的，氧氣是氧化劑，濃度高會(huì)損傷細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)還常常加入一些抗氧化劑等?，F(xiàn)在是15頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（三）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品，如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體。培養(yǎng)基因工程中使用的受體細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞用于體外檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷物質(zhì)的毒性。如檢測(cè)致畸、致癌物質(zhì)。培養(yǎng)各種正常的或病變的細(xì)胞，用于生理、病例、藥理等方面研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。如為皮膚大面積燒傷病人培養(yǎng)皮膚細(xì)胞進(jìn)行皮膚移植?，F(xiàn)在是16頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五ESC典型的不對(duì)稱分裂,具慢周期性和高增殖性.ESC的標(biāo)記蛋白是角蛋白K19.

組織工程皮膚是一個(gè)極熱門的話題.如體外培養(yǎng)表皮和真皮,用以修補(bǔ)皮膚損傷.

表皮干細(xì)胞.ESC現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五人耳小白鼠現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五組織工程鼻軟骨現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五組織工程耳軟骨現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五熒光標(biāo)記的小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五二、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（一）動(dòng)物細(xì)胞融合概念：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，也叫動(dòng)物細(xì)胞雜交。融合后形成的具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞?，F(xiàn)在是22頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五1、動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程具有不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合（先質(zhì)后核）融合后的雜交細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五問(wèn)題為什么滅活的病毒可作為誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑？不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞相互凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。不滅活的病毒會(huì)感染細(xì)胞，不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五仙臺(tái)病毒用作融合劑的病毒必須先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活，以使其感染活性散失，同時(shí)保留融合活性。用滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)融合的效率高，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適用，并且能在雞胚中大量培養(yǎng)。但是仙臺(tái)病毒不穩(wěn)定，保存中融合活性易降低，且制備麻煩，所以實(shí)際常用聚乙二醇誘導(dǎo)融合或電場(chǎng)誘導(dǎo)融合?，F(xiàn)在是25頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五

細(xì)胞融合過(guò)程中兩個(gè)細(xì)胞膜的變化現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五顯微鏡下的細(xì)胞融合過(guò)程

現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五物理方法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)方法：PEG生物方法：滅活的病毒（如仙臺(tái)病毒）誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五形成雜交細(xì)胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五2、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義和應(yīng)用

意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。

應(yīng)用：用于研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等，特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體。現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（二）單克隆抗體技術(shù)抗體是怎樣產(chǎn)生的？問(wèn)題

每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只合成和分泌一種特異性抗體?，F(xiàn)在是31頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五產(chǎn)量低、純度低，特異性差、靈敏度低?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法的不足：思考：如何大量獲取某一種特定抗體？現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五科勒GeorgesJ.F.K?hler德國(guó)巴塞爾免疫研究所

1946年--1995年米爾斯坦CésarMilstein英國(guó)英國(guó)醫(yī)學(xué)研究委員會(huì)

分子生物實(shí)驗(yàn)室1927年--榮獲1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)1975年發(fā)明單克隆抗體技術(shù)現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五

設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖單克隆抗體既能分泌特異性抗體，又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五單克隆抗體制備過(guò)程現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五雜交瘤細(xì)胞1雜交瘤細(xì)胞2雜交瘤細(xì)胞3Mab1Mab2Mab3抗原現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五單克隆抗體制備提取單克隆抗體B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)分泌特異性抗體大量增殖滅活仙臺(tái)病毒或PEG現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五BBBB瘤瘤瘤瘤１、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞思考：雜交瘤細(xì)胞２、制備過(guò)程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞合成DNA有兩條途徑：一為主要途徑，利用糖和氨基酸合成核苷酸，氨基碟呤可阻斷該途徑；二為補(bǔ)救途徑，通過(guò)磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）利用次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷合成核苷酸。骨髓瘤細(xì)胞缺乏HGPRT和TK，只能通過(guò)一途徑合成核苷酸而增殖。淋巴細(xì)胞具備兩條途徑，但不能無(wú)限增殖。使用選擇培養(yǎng)基---HAT培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤（Hypoxathine）、胸腺嘧啶核苷(Thymidine)、氨基喋呤（Aminopterin）。在HAT培養(yǎng)基中，小鼠瘤細(xì)胞因不能合成核苷酸而死亡，B淋巴細(xì)胞壽命有限也自然死亡，只有雜交瘤細(xì)胞從B細(xì)胞獲得HGPRT或TK基因,表達(dá)得到HGPRT或TK，利用二途徑合成核苷酸而無(wú)限增殖，能在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖。所以最后存活下來(lái)的一定是雜交瘤細(xì)胞?，F(xiàn)在是39頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五第二次篩選出一個(gè)只產(chǎn)生特異抗體的雜交瘤細(xì)胞。陽(yáng)性克隆篩選：用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢驗(yàn)特異性抗體單克隆抗體的擴(kuò)大生產(chǎn)：（1）腹腔積液型（2）細(xì)胞生物反應(yīng)器現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五單克隆抗體的概念單:

單個(gè)細(xì)胞克隆:

無(wú)性繁殖抗體:

化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)單克隆抗體的概念：是指單個(gè)雜交瘤細(xì)胞無(wú)性繁殖（克?。┬纬傻募?xì)胞系產(chǎn)生的抗體。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高、能大量制備現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五①診斷疾?。ㄗR(shí)別作用，如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）

單克隆抗體的應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速②用于治療疾病和運(yùn)載藥物（主要用于癌癥治療，也可運(yùn)載藥物，如“生物導(dǎo)彈”）（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）（位置準(zhǔn)確、療效高、副作用?。┈F(xiàn)在是42頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五人的單克隆抗體生產(chǎn)存在許多問(wèn)題：①致敏問(wèn)題人們努力尋求的抗體往往是針對(duì)有毒抗原的，無(wú)法直接用這樣的抗原去刺激某人體，并試圖獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。②雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定目前世界上已建立一些人骨髓瘤細(xì)胞株，它們和人的淋巴細(xì)胞融合后也能產(chǎn)生抗體，然而未能獲得像小鼠骨髓瘤系那樣理想的株系。產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞存在也不夠穩(wěn)定，抗體效價(jià)也不夠理想。③抗體的生產(chǎn)問(wèn)題已建株的細(xì)胞在體外培養(yǎng)較困難，若能在體內(nèi)培養(yǎng)則較容易，這對(duì)于動(dòng)物可以，然而用人的腹腔液培養(yǎng)就不可能。④轉(zhuǎn)化細(xì)胞不穩(wěn)定用病毒轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞細(xì)胞也可建立細(xì)胞株系，但傳代后只有小部分細(xì)胞分泌特異抗體，且細(xì)胞隨傳代遞減，很難建立起長(zhǎng)期穩(wěn)定的細(xì)胞株。人—鼠細(xì)胞雜交也可以，但隨著細(xì)胞的分裂，人的染色體會(huì)大量丟失?，F(xiàn)在是43頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五問(wèn)題我們能否利用類似植物組織培養(yǎng)獲得完整植物體的方法培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，使其發(fā)育成一個(gè)完整的個(gè)體？

不能，高度分化的植物細(xì)胞仍保持著全能性，而動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨細(xì)胞分化程度的提高逐漸受到限制，分化潛能逐漸變?nèi)?。所以目前還不能利用類似植物組織培養(yǎng)的方法獲得完整的動(dòng)物體?，F(xiàn)在是44頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五多莉與威爾莫特現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五三、動(dòng)物體細(xì)胞核移植和克隆動(dòng)物概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞(供體細(xì)胞)的細(xì)胞核，移入另一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞(受體細(xì)胞)中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。理論基礎(chǔ)：動(dòng)物細(xì)胞(核)的全能性克隆動(dòng)物：用核移植方法培育的動(dòng)物?，F(xiàn)在是46頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（一）哺乳動(dòng)物核移植的類型

胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植容易困難現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五（二）體細(xì)胞核移植的過(guò)程（以高產(chǎn)奶牛為例）體細(xì)胞培養(yǎng)取出核甲牛乙牛MⅡ卵母細(xì)胞去除核去核卵母細(xì)胞重組卵細(xì)胞核植入卵裂早期胚胎代孕母牛丙移植體細(xì)胞群克隆牛細(xì)胞核移植胚胎移植物理或化學(xué)方法激活現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五顯微操作儀現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五細(xì)胞核的吸取現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五1切開(kāi)卵母細(xì)胞透明帶2擠出卵母細(xì)胞細(xì)胞核3注入供體細(xì)胞核4電融合儀融合培養(yǎng)12345現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五

受體細(xì)胞為減數(shù)分裂第二次分裂中期（MⅡ）的卵母細(xì)胞。重組細(xì)胞需通過(guò)物理或化學(xué)方法激活，從而完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。體細(xì)胞核移植的技術(shù)操作過(guò)程主要包括核供體細(xì)胞和核受體細(xì)胞的處理和制備、核移植、構(gòu)建重組胚胎、胚胎移植等步驟?，F(xiàn)在是52頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五問(wèn)題用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，這是為什么？

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)也可能會(huì)發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞?，F(xiàn)在是53頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五問(wèn)題利用體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？

克隆動(dòng)物DNA主要來(lái)自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA是來(lái)自于受體卵母細(xì)胞。所以用體細(xì)胞核移植方法克隆的動(dòng)物并不是供核動(dòng)物完全相同的復(fù)制?，F(xiàn)在是54頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五現(xiàn)在是55頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五克隆技術(shù)的設(shè)想是由德國(guó)胚胎學(xué)家于1938年首次提出的，1952年，科學(xué)家首先用青蛙開(kāi)展克隆實(shí)驗(yàn)，之后不斷有人利用各種動(dòng)物進(jìn)行克隆技術(shù)研究。

自從1996年世界第一只體細(xì)胞克隆動(dòng)物小羊“多利”誕生后，各種克隆動(dòng)物如雨后春筍般地紛紛問(wèn)世。

蛙：青蛙是第一種被用于克隆實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。1952年，科學(xué)家首次通過(guò)從發(fā)育到后期的胚胎中提取細(xì)胞核進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)，但失敗了。1970年，英國(guó)生物學(xué)家用同樣方法嘗試克隆，結(jié)果青蛙卵發(fā)育成了蝌蚪，但它在開(kāi)始進(jìn)食以后就死亡。

鼠：第一只體細(xì)胞克隆鼠名叫“卡繆麗娜”，1997年10月3日出生。目前日本、英國(guó)、美國(guó)和意大利等國(guó)的科學(xué)家已經(jīng)獲得了“克隆的克隆”的第二及第三代克隆鼠。世界克隆動(dòng)物誕生記現(xiàn)在是56頁(yè)\一共有62頁(yè)\編輯于星期五牛：能都和加賀是最早的兩頭體細(xì)胞克隆牛，1998年7月5日出生在日本。盡管這兩頭牛早產(chǎn)近40天，但發(fā)育正常。

猴：在目前所有克隆動(dòng)物中，猴子在基因上與人類最接近。2000年1月，美國(guó)科學(xué)家宣稱第一次成功地克隆出靈長(zhǎng)類動(dòng)物———一只名為“泰特拉”的克隆猴。

豬：體細(xì)胞克隆羊與克隆鼠誕生后，科學(xué)家就計(jì)劃克隆豬。首批體細(xì)胞克隆豬共5只，出生于2000年3月5日。

貓：2002年初，世界上第一只體細(xì)胞克隆貓誕生了，名為CC。CC的皮毛顏