抗原抗體反應與其應用

1一、抗原抗體反應的基本原理二、抗原抗體反應的類型三、免疫標記技術的應用內容第一頁，共30頁。2一、抗原抗體反應的基本原理第二頁，共30頁。3

抗原與相應抗體的特異性結合反應稱為抗原抗體反應。

抗原抗體反應AgAb（）（）如同鑰匙和鎖的關系第三頁，共30頁。4這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。體內體液免疫反應1.中和作用:中和毒素等2.溶菌、殺菌、促進吞噬3.免疫損傷:抗體與組織或細胞反應沉淀（Precipitation）凝集（Agglutination）細胞溶解（celllysis）補體結合（Complementfixation）體外抗體存在于血清中,常用血清作試驗,因此又名血清學反應第四頁，共30頁。555

抗原抗體反應的原理1、抗原抗體結合力（4種）2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉化疏水膠體抗原抗體反應的原理

電荷引力（靜電引力）

范德華引力

氫鍵結合力疏水作用力第五頁，共30頁。61、抗原抗體結合力

--靜電引力（electrostaticforces）

靜電引力或庫侖引力（Cou-lombicforces）是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基（—NH3+）與羧基基團（—COO-）間相互吸引的能力，之間的引力，距離越近引力越大。第六頁，共30頁。71、抗原抗體結合力

--范德華引力（VanderWaalsforces）分子間（或原子間)相互接近，分子極化產生引力，其作用取決于分子空間構型，如：凹槽與凸起互補，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。第七頁，共30頁。81、抗原抗體結合力

--氫鍵結合力（hydrogenbond

）

是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結合力較強于范德華引力，能量大于范德華引力。第八頁，共30頁。91、抗原抗體結合力

--疏水作用力（hydrophobicinteractions）

水溶液中兩個疏水基團相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強，占總結合力的50％。第九頁，共30頁。10靜電引力：異性相吸（electrostaticforces），離子鍵（Ionicbond）范德華引力:作用最?。╲anderWaalsinteractions）氫鍵:最具特異性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）疏水作用力>氫鍵結合力>靜電引力>范德華引力1、抗原抗體結合力第十頁，共30頁。112、抗原抗體親和力和親合力

是指抗體分子上一個抗原結合點與對應的抗原決定簇之間相適應而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結合力。親和力（affinity)第十一頁，共30頁。12親和力是指反應系統(tǒng)中復雜抗原與相應抗體之間的結合能力。與抗體結合價、抗體的親和性、抗原有效表位數(shù)目等相關。親合力(avidity)2、抗原抗體親和力和親合力第十二頁，共30頁。3、親水膠體轉化為疏水膠體

抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質。在通常的血清學反應條件下均帶有負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體，因此蛋白質不會自行凝集出現(xiàn)沉淀。當抗原與抗體結合后，表面電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉化為疏水膠體。此時在電解質(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進一步靠攏、沉淀，形成可見的抗原抗體復合物。13

可見反應

(沉淀)抗原抗體復合物

(疏水膠體)電解質

抗原(親水膠體)

抗體(親水膠體)+第十三頁，共30頁。14二、抗原抗體反應的類型第十四頁，共30頁。15

抗原抗體反應的類型反應類型抗原抗體補體沉淀反應可溶無標記無凝集反應顆粒無標記無補體參與反應細胞無標記有中和反應毒素等無標記無免疫標記標記標記無或第十五頁，共30頁。16反應類型實驗技術結果判斷

沉淀反應液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術觀察掃描沉淀峰、沉淀弧凝集反應直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象抗球蛋白試驗觀察凝集現(xiàn)象

補體參與反應補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結合試驗觀察測定溶血現(xiàn)象

抗原抗體反應的類型第十六頁，共30頁。17反應類型實驗技術結果判斷中和反應病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性免疫標記熒光免疫技術檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術檢測放射性強度酶免疫技術檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術檢測發(fā)光強度金免疫技術檢測金顆粒沉淀

抗原抗體反應的類型第十七頁，共30頁。18三、免疫標記技術的應用第十八頁，共30頁。19免疫標記技術的應用免疫標記技術是用熒光素、放射性同位素、酶等標記抗體或抗原等所進行的抗原抗體反應。特點：敏感度高特異性強快速容易觀察能進行定性、定量、定位檢測等第十九頁，共30頁。201、熒光免疫技術

將結合有熒光素的熒光抗體進行抗原抗體反應的技術。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（FITC)和羅丹明（RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結合，在藍紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。固相吸附抗原或抗體Ab光或Ag光Ab－Ag光

或

Ag－Ab光光激發(fā)發(fā)光第二十頁，共30頁。21①自身抗體檢測抗核抗體(均質型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點型)歐蒙熒光免疫技術的應用第二十一頁，共30頁。22熒光免疫技術的應用②病原體檢測呼吸道合胞病毒流感病毒A/B型副流感病毒③免疫病理檢測④細胞表面抗原和受體檢測⑤特殊應用：流式細胞分析第二十二頁，共30頁。232、放射免疫技術及其應用用放射性同位素標記技術來檢測抗原抗體反應的高靈敏度方法。反應特點：靈敏，精確；不穩(wěn)定；安全性差標記Ag或Ab標記物純化抗原抗體反應抗原抗體復合物沉淀測定其放射活性現(xiàn)臨床實驗室應用較少廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床診斷領域中各種微量蛋白質、激素、小分子藥物和腫瘤標志物的定量分析等第二十三頁，共30頁。243、酶免疫技術

將待測抗原或抗體吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反應板），與酶標記的抗體或抗原反應后，加入底物反應（顯色或發(fā)光）的分析方法。酶標板吸附抗原或抗體洗滌加入酶標抗體或抗原Ag-Ab酶或Ab-Ag酶加入酶作用底物顯色反應第二十四頁，共30頁。25方法（1）直接法（可檢測抗原或抗體）：酶標板吸附抗原或抗體洗滌Ag－Ab酶或Ab－Ag酶顯色反應Ab酶或Ag酶底物第二十五頁，共30頁。26（2）間接法（有兩種抗體參與，一抗做反應橋梁）1Ab2Ab酶酶標板吸附抗原Ag－1Ab洗滌Ag－1Ab－2Ab酶底物顯色反應一抗二抗第二十六頁，共30頁。27酶標板吸附抗體AgAb-Ag洗滌Ab酶Ab-Ag-Ab酶底物顯色反應（3）夾心法（不同抗體將抗原夾在中間反應）①直接夾心法②間接夾心法酶標板吸附抗體AgAb－Ag1AbAb－Ag－1Ab洗滌2Ab酶Ab－Ag－1Ab－2Ab酶底物顯色反應第二十七頁，共30頁。28酶聯(lián)免疫吸附實驗——夾心法第二十八頁，共30頁。29ELISA應用的范圍很廣，而且正在不斷地擴大。臨床實驗室主要應用于：1、傳染病的診斷，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗