實(shí)驗(yàn)一特殊顯微鏡的工作原理和使用

放大倍數(shù)和數(shù)值孔徑10/0.25，40/0.65，100/1.3標(biāo)準(zhǔn)機(jī)械筒長和蓋玻片厚度160/0.17160/0或160/160/-∞/0或∞/-油浸物鏡：oil、oel、Hi等水浸物鏡：W或Water甘油浸物鏡：Glyz和Glye復(fù)消色差物鏡：APO半復(fù)消色差物鏡：FL平場物鏡：PL現(xiàn)在是1頁\一共有47頁\編輯于星期六特殊顯微鏡是與明視場普通顯微鏡相對而言，在成像原理、結(jié)構(gòu)和用途上存在差異的顯微鏡。這里介紹：1、暗視場顯微鏡2、相差顯微鏡3、熒光顯微鏡

現(xiàn)在是2頁\一共有47頁\編輯于星期六一、暗視場顯微鏡應(yīng)用：微小粒子、細(xì)菌形態(tài)、細(xì)菌記數(shù)，透明標(biāo)本觀察等?，F(xiàn)在是3頁\一共有47頁\編輯于星期六(一)原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)在日常生活中，室內(nèi)飛揚(yáng)的微?；覊m是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束光線從門縫斜射進(jìn)來，灰塵便粒?？梢娏耍@是光學(xué)上的丁達(dá)爾現(xiàn)象。暗視場顯微鏡就是利用此原理設(shè)計(jì)的。丁達(dá)爾現(xiàn)象現(xiàn)在是4頁\一共有47頁\編輯于星期六暗視場顯微鏡是在普通光學(xué)顯微鏡中去除明視場聚光器，換上一個(gè)暗視場聚光器而成。它的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)主要是使用中央遮光板或暗視場聚光器，常用的是拋物面聚光器，使光源的中央光束被阻擋,不能由下而上地通過標(biāo)本進(jìn)入物鏡。從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標(biāo)本上?，F(xiàn)在是5頁\一共有47頁\編輯于星期六明場普通顯微鏡成像光路圖暗場照明光路圖現(xiàn)在是6頁\一共有47頁\編輯于星期六成像特點(diǎn)及優(yōu)缺點(diǎn)在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像,并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運(yùn)動，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，只能呈現(xiàn)出物體的輪廓而且比實(shí)物要大。但被檢物體為非均質(zhì)時(shí)，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時(shí)進(jìn)入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運(yùn)動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運(yùn)動等?，F(xiàn)在是7頁\一共有47頁\編輯于星期六(二)制作中央遮光板

普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時(shí)，可用厚黑紙片制作一個(gè)中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。(1)．將顯微鏡聚光器調(diào)到最高位置，用低倍鏡對好焦距。

(2)．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光闌的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。

(3)．用厚黑紙剪制中央擋光板。外圈直徑與濾光片框架相同，中央部分的大小與調(diào)節(jié)好的光闌孔徑一樣(可用半透明的小紙片，放在通光孔處聚光鏡鏡面上，紙上顯示的光斑即為光闌的孔徑，再用圓規(guī)量取大小)。

(4)．將中央擋光板放在濾光片框架上，開大光闌進(jìn)行樣品觀察。如需使用高倍鏡作暗視野觀察，應(yīng)按高倍鏡對焦后的視野大小重新制作中央擋光板。現(xiàn)在是8頁\一共有47頁\編輯于星期六要求與注意事項(xiàng)(1)制作標(biāo)本時(shí)所用的載玻片和蓋玻片均應(yīng)清潔干凈，必須使用薄玻片(載玻片厚度約1.O～1.1mm，蓋玻片厚度約0.1mm)，否則會影響暗視野集光器斜射光焦點(diǎn)的調(diào)節(jié)，如載玻片太厚，焦點(diǎn)只能落在載玻片內(nèi)，就不能看到物像。標(biāo)本也不能過厚。(2)采用的光源宜強(qiáng)，一般均用強(qiáng)光燈照明。光線暗則物像不清晰。(3)調(diào)節(jié)光源：使光線集中在暗視野集光器上。先用低倍鏡觀察，移動暗視野集光器，使其中央的一個(gè)圓圈恰好處在視野的中央。如暗視野集光器已準(zhǔn)確固定好，則可免去這一步驟。(4)先在暗視野的集光器上加香柏油一滴，然后將標(biāo)本放在載物臺上，把暗視野集光器向上移，使其上的柏木油與標(biāo)本片的底面接觸，中間不能有氣泡存在。(5)高倍觀察：在標(biāo)本蓋玻片上再加香柏油一滴，降下鏡筒，使油鏡浸在香柏油內(nèi)，再用粗、細(xì)螺旋調(diào)節(jié)物鏡的焦距，有時(shí)還需稍微升降暗視野集光器以調(diào)節(jié)斜射光焦點(diǎn)，使其正好落在標(biāo)本上，并且調(diào)節(jié)油鏡頭的光圈，相互配合，直到物像清楚為止，即可開始檢查。也可用低倍或高倍物鏡進(jìn)行鏡檢，這就不必在蓋玻片上加香柏油。現(xiàn)在是9頁\一共有47頁\編輯于星期六普通顯微鏡暗視場顯微鏡相差顯微鏡人口腔上皮細(xì)胞在不同顯微鏡下的圖像現(xiàn)在是10頁\一共有47頁\編輯于星期六（二）相差顯微鏡現(xiàn)在是11頁\一共有47頁\編輯于星期六原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)光波有振幅（亮度）、波長（顏色）及相位(指在某一時(shí)間上光的波動所能達(dá)到的位置)的不同。當(dāng)光波遇到物體時(shí)，其波長(顏色)和振幅(亮度)發(fā)生變化，于是就能看到物體，當(dāng)光波通過透明的物體時(shí)，雖然物體的內(nèi)部不同結(jié)構(gòu)會有厚度和折光率不同的差異，而波長和振幅則仍然是不會發(fā)生改變的。因此，就不易看清這些不同的結(jié)構(gòu)。用普通光學(xué)顯微鏡觀察一些活的微生物或其他細(xì)胞等透明物體時(shí)，也就不易分清其內(nèi)部的細(xì)微結(jié)構(gòu)。現(xiàn)在是12頁\一共有47頁\編輯于星期六但是，光線通過厚度不同的透明物體時(shí)，其相位卻會發(fā)生改變，形成相差。不過，相差不表現(xiàn)為明暗和顏色的差異，這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。我們可以利用光學(xué)的相干干涉原理，可以把相差改變?yōu)檎穹睿@樣就能使透明的、厚度和性質(zhì)不均勻的結(jié)構(gòu)表現(xiàn)明暗的不同，能夠較清楚地予以區(qū)別。如果這兩條光波射到光屏的同一點(diǎn)上，而且一條光波比另一條光波遲滯了半個(gè)波長，即兩條光波因位相相反而互相干涉抵消則光線消失，或者相對振幅相互影響而光線減弱。如果一條光波雖然遲滯了一個(gè)波長,但兩條光波位相相同,則因波的疊加而光線增強(qiáng)-明相差+暗相差現(xiàn)在是13頁\一共有47頁\編輯于星期六相差顯微鏡，能夠通過其復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變成振幅差，即明暗差，可以被我們的感覺器官所感知。同時(shí)它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細(xì)胞或未染色標(biāo)本?，F(xiàn)在是14頁\一共有47頁\編輯于星期六相差顯微鏡的構(gòu)造特點(diǎn)相差顯微鏡的構(gòu)造以普通顯微鏡為基礎(chǔ)，與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡(通常標(biāo)有PH的標(biāo)記)代替普通物鏡，并帶有一個(gè)調(diào)節(jié)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。相差環(huán)則是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，放置在光源通路上，使光線只能由環(huán)狀部分通過，環(huán)狀光圈的大小可由集光鏡的數(shù)值口徑(N.A)來調(diào)節(jié)。環(huán)狀光圈的大小由不同大小的環(huán)狀孔控制。環(huán)狀光闌的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來。相差環(huán)現(xiàn)在是15頁\一共有47頁\編輯于星期六相差物鏡是在物鏡的后焦點(diǎn)處加一環(huán)狀相板。相板由光學(xué)玻璃制成，安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜，具有改變相位的作用。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。放大倍數(shù)不同的物鏡，其相板也不同。現(xiàn)在是16頁\一共有47頁\編輯于星期六調(diào)軸望遠(yuǎn)鏡：是用來進(jìn)行合鈾調(diào)節(jié)的。使用不同的相差物鏡時(shí)，應(yīng)配合相應(yīng)的環(huán)狀光圈，并用合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡觀察環(huán)狀光圈和相板，調(diào)節(jié)至環(huán)狀光圈的亮環(huán)與相板的暗環(huán)完全重合。這樣，光線通過標(biāo)本后，就必須經(jīng)過相板而發(fā)生相位的改變，造成明暗差異的影像。要使得聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上，必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合對齊，才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。環(huán)狀光圈、相差物鏡配合與調(diào)節(jié)好之后，其他操作方法與普通光學(xué)顯微鏡相同?，F(xiàn)在是17頁\一共有47頁\編輯于星期六使用方法（1）相差裝置的調(diào)換安裝卸下普通顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍(lán)色光，使波長范圍小的單色光線進(jìn)行照明，并有吸熱作用，能使相差觀察獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。

（2）調(diào)焦打開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將“0”對準(zhǔn)標(biāo)示孔，使普通聚光器部分進(jìn)入光路。先使用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進(jìn)行對光和調(diào)焦。旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)，如相差物鏡為40X時(shí)應(yīng)用40X標(biāo)示孔的光闌?，F(xiàn)在是18頁\一共有47頁\編輯于星期六（3）合鈾調(diào)整拔出目鏡，插入合鈾望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡向內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其上升，當(dāng)對準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)，此時(shí)可將望遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與暗環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合。（4）觀察換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌?，F(xiàn)在是19頁\一共有47頁\編輯于星期六用途相差顯微鏡是利用樣品中質(zhì)點(diǎn)折射率的不同或質(zhì)點(diǎn)厚度的不等，產(chǎn)生光線的相位差，使新鮮標(biāo)本不必染色就可以看到，而且能夠觀察到活細(xì)胞內(nèi)線粒體及染色體等精細(xì)結(jié)構(gòu)，還可以應(yīng)用于霉菌、細(xì)菌、病毒等更微小活體的研究，進(jìn)行標(biāo)本形態(tài)、數(shù)量、活動及分裂、繁殖等生物學(xué)行為觀察，并可進(jìn)行量度與比較。現(xiàn)在是20頁\一共有47頁\編輯于星期六用途：觀察未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本現(xiàn)在是21頁\一共有47頁\編輯于星期六用途特點(diǎn):鑒定活體細(xì)胞最實(shí)用、最經(jīng)濟(jì)的方法缺點(diǎn):需要光強(qiáng)高切片不能太厚(5~10um)蓋片、載片需符合標(biāo)準(zhǔn)最好配用單色濾光鏡熒光效果不如明場物鏡現(xiàn)在是22頁\一共有47頁\編輯于星期六三、熒光顯微鏡現(xiàn)在是23頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光概念熒光：物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)釋放出的光，是非溫度輻射光——冷光?？煞譃椋夯瘜W(xué)熒光（氧化還原反應(yīng)發(fā)出的熒光）、光化熒光（光源激發(fā)而產(chǎn)生的熒光）、生物熒光、放射熒光。熒光顯微鏡應(yīng)用的是光化熒光。熒光現(xiàn)象：熒光物質(zhì)吸收長波光（320-400nm）的能量，以較長波長的可見光形式發(fā)射出去，這種現(xiàn)象就是熒光現(xiàn)象。現(xiàn)在是24頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光的性質(zhì)：1、吸收光，必需有激發(fā)光源2、熒光波長＞激發(fā)波長（損失熱能）3、熒光強(qiáng)度小于激發(fā)光的強(qiáng)度4、有不同程度的衰減5、熒光強(qiáng)度取決于激發(fā)光強(qiáng)度、被檢物濃度、熒光效率現(xiàn)在是25頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光的產(chǎn)生一次熒光：又叫自發(fā)熒光或固有熒光，經(jīng)過紫外光照射直接發(fā)出熒光。二次熒光：又叫繼發(fā)熒光，被觀察物體經(jīng)過熒光染料處理之后，經(jīng)過紫外光照射才能發(fā)出熒光。熒光染料種類很多：現(xiàn)在是26頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光顯微鏡原理熒光顯微鏡利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如波長短的紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。這樣在強(qiáng)烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認(rèn)，敏感性高，主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究?，F(xiàn)在是27頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光顯微鏡結(jié)構(gòu)特點(diǎn)熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的?，F(xiàn)在是28頁\一共有47頁\編輯于星期六光源現(xiàn)在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)水銀完全蒸發(fā)時(shí)，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。200W超高壓汞燈的平均壽命，在每次使用2h的情況下約為200h，開動一次工作時(shí)間愈短，則壽命愈短，如開一次只工作20min，則壽命降低50%。因此，使用時(shí)盡量減少啟動次數(shù)。燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉，以免水銀蒸發(fā)不完全而損壞電極，一般需要等15min。超高壓汞燈（100W或200W）光源的電路和包括變壓、鎮(zhèn)流、啟動幾個(gè)部分。在燈室上有調(diào)節(jié)燈泡發(fā)光中心的系統(tǒng)，燈泡球部后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡，前面安裝有集光透鏡。現(xiàn)在是29頁\一共有47頁\編輯于星期六濾色系統(tǒng)熒光光源的采用超高壓汞燈，它可發(fā)出各種波長的光，但每種熒光物質(zhì)都有一個(gè)產(chǎn)生最強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長，所以需加用激發(fā)濾片（一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片），僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標(biāo)本上，而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后，在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性，一般都比激發(fā)光弱，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有二：

一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛?二是選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位，由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號，各廠家名稱常不統(tǒng)一現(xiàn)在是30頁\一共有47頁\編輯于星期六各種濾色鏡現(xiàn)在是31頁\一共有47頁\編輯于星期六落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡，與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面，即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個(gè)雙色束分離器，它與光鈾呈45度角，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡，反回到雙色束分離器，使激發(fā)光和熒光分開，殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。現(xiàn)在是32頁\一共有47頁\編輯于星期六分色后成像光路圖現(xiàn)在是33頁\一共有47頁\編輯于星期六使用方法1．打開燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱幾分鐘才能達(dá)到最亮點(diǎn)。2．透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的插塊。3．用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個(gè)照明光斑的中央。4．放置標(biāo)本片，調(diào)焦后即可觀察。使用中應(yīng)注意：末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷；用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須用無熒光的特殊油鏡；高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開，需經(jīng)5分鐘后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。5.觀察在示教臺上的熒光顯微鏡下（用藍(lán)紫光濾光片），可見經(jīng)0．01％的丫啶橙熒光染料染色的細(xì)胞，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。現(xiàn)在是34頁\一共有47頁\編輯于星期六使用熒光顯微鏡的注意事項(xiàng)（1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。（2）應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛完全適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。（3）防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。（4）檢查時(shí)間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過2～3h。（5）熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。（6）標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。長時(shí)間的激發(fā)光照射標(biāo)本，會使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射時(shí)間。暫時(shí)不觀察時(shí)可用擋光板遮蓋激發(fā)光。（7）標(biāo)本觀察時(shí)候應(yīng)采用無熒光油，應(yīng)避免眼睛直視紫外光源。（8）電源應(yīng)安裝穩(wěn)壓器，電壓不穩(wěn)會降低熒光燈的壽命?，F(xiàn)在是35頁\一共有47頁\編輯于星期六熒光顯微鏡的應(yīng)用范圍生物體內(nèi)的各種組織、細(xì)胞、細(xì)胞器、微生物、病毒等，對激發(fā)光的敏感度不同，使用時(shí)應(yīng)選擇不同的激發(fā)濾色鏡來得到最佳的激發(fā)光。激發(fā)方式激發(fā)波長應(yīng)用范圍U激發(fā)334病理切片，細(xì)菌、FITC染料、V激發(fā)365.405.435自發(fā)熒光、一般熒光抗體、四環(huán)素染色物B激發(fā)405.435.490FITC染料、吖啶橙染色、染色體、紅細(xì)胞、癌細(xì)胞、蛔蟲G激發(fā)546浮爾根染色、DNA現(xiàn)在是36頁\一共有47頁\編輯于星期六各種標(biāo)記熒光素的特性現(xiàn)在是37頁\一共有47頁\編輯于星期六優(yōu)點(diǎn)：檢出能力高對細(xì)胞的刺激小能進(jìn)行多重染色用途：物體構(gòu)造的觀察熒光的有無、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別發(fā)熒光量的測定對物質(zhì)定性、定量分析熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)和用途現(xiàn)在是38頁\一共有47頁\編輯于星期六

WU

WIBDUAL

BANDWIBAWIGWIBDAPI+FITCFITC+PI雙重染色標(biāo)本的單色和雙色觀察現(xiàn)在是39頁\一共有47頁\編輯于星期六FITC+TexasRed+DAPI多重染色標(biāo)本的多色觀察現(xiàn)在是40頁\一共有47頁\編輯于星期六原位雜交技術(shù)現(xiàn)在是41頁\一共有47頁\編輯于星期六六、倒置顯微鏡倒置顯微鏡的組成與普通顯微鏡相同,不同的是光源在載物臺上,物鏡與照明系統(tǒng)在載物臺下,與其它顯微鏡的結(jié)構(gòu)位置相反,故稱倒置顯微鏡.一般