動物疫病監(jiān)測采樣技術(shù)

動物疫病監(jiān)測采樣技術(shù)第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三主要內(nèi)容動物疫病監(jiān)測的概念及其意義檢測樣品存在的問題樣品的種類高品質(zhì)樣品的特征如何得到高質(zhì)量的樣品第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三動物疫病監(jiān)測定義：調(diào)查動物群體中某種疫病或病原的存在情況。通過監(jiān)測可以了解動物疫病的流行現(xiàn)狀、危害程度、風(fēng)險(xiǎn)因子和發(fā)展趨勢，早期識別疫病的爆發(fā)和流行。根據(jù)信息來源分為：問卷調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測。實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測的關(guān)鍵:樣品和檢測技術(shù)。第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)病原檢測：病原本身檢測，病原特有蛋白檢測，病原特有核酸檢測，動物試驗(yàn)抗體檢測：瓊擴(kuò)，試管凝集，平板凝集，血凝和血凝抑制，中和試驗(yàn)，各種ELISA等。在檢測技術(shù)過關(guān)的情況下，監(jiān)測結(jié)果是否具有代表性，是否能夠真實(shí)反映出疫病的真實(shí)情況都與監(jiān)測樣品的采集有重要關(guān)系。

第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三如何做好采樣工作送檢樣品中的問題合格樣品如何得到合格樣品采樣中應(yīng)注意問題第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三一、樣品存在的問題樣品的真實(shí)性（假樣品，一個(gè)樣品分開）樣品的質(zhì)量（溶血，腐敗，反復(fù)凍融）采樣單填寫的信息不全（畜禽日齡，免疫情況等）組織樣品采集的太大，不專業(yè)。樣品編號不能追溯回去。第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三二、樣品的種類血液樣品：血清，全血抗凝血，血漿組織樣品：心肝脾肺腎腦，淋巴結(jié)，扁桃體糞便樣品：新鮮，濕潤的生殖道和精液樣品皮膚樣品：皮屑分泌液和滲出液樣品：舌面或蹄部的水泡液第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三血液樣品血液：最常用的樣品，可以做血清學(xué)試驗(yàn)的樣品，也可以作為病原學(xué)試驗(yàn)的樣品。全血（抗凝血）：抗凝劑有肝素，阿氏液，枸櫞酸鈉和4%EDTA，或者用玻璃珠，脫纖維蛋白。血清：不加抗凝劑的血液，在室溫靜置2~4h（或37℃1h），待血液完全凝固后，析出上清即為血清。血漿：抗凝血混勻后，靜置，上清即為血漿。第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三檢測樣品的分類細(xì)菌學(xué)檢測樣品：采集發(fā)病典型或剛死亡的整體動物送實(shí)驗(yàn)室為最好。無菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。病毒學(xué)檢測樣品：病毒檢測應(yīng)在動物病初、體溫升高期間采集。以組織臟器、血液、糞便等樣品為主。冷藏或冷凍，保存液中加抗生素。血清學(xué)檢測樣品：靜脈采血3ml左右，注射器內(nèi)留一定空間，靜置過程或已凝固的血液應(yīng)低溫冷凍，以免溶血。短時(shí)間內(nèi)，可在4度左右保存；如時(shí)間較長應(yīng)凍結(jié)保存，注意不能反復(fù)凍融.病理學(xué)檢測樣品：保證樣品新鮮，應(yīng)選擇病變最典型最明顯的部位，且連同部分健康組織一并采集。浸泡于酒精或福爾馬林溶液中，冷藏保存和運(yùn)輸。第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三幾種重要疫病的采樣時(shí)機(jī)禽流感、新城疫：發(fā)病初期采全血，泄殖腔\咽喉棉拭子；后期采集新鮮糞便；剖剪后的氣管，肺臟，腎臟等口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌物和咽喉棉拭子豬瘟，豬偽狂犬，藍(lán)耳?。喝?，血清，組織病料：肺臟，脾臟，淋巴結(jié)，扁桃體，流產(chǎn)胎衣等，新鮮精液或冷凍精液豬流感：在發(fā)熱期采集鼻咽棉拭子和肺組織病料。第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三三、高品質(zhì)樣品的特征樣品標(biāo)記明確樣品新鮮采樣單填寫規(guī)范樣本\樣品數(shù)量適當(dāng)?shù)?1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三四、如何得到高質(zhì)量的樣品高質(zhì)量樣品采樣前準(zhǔn)備采樣的時(shí)效性樣本的數(shù)量樣品的標(biāo)記樣品的保存和運(yùn)輸?shù)?2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三1、采樣前的準(zhǔn)備-器具采樣工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，鑷子，酒精燈，酒精棉，棉簽，保定動物專用工具樣品存放用具：塑料離心管（1.5，2，5ml），自封口樣品袋，試管架，塑料樣品盒，膠布，封口膜，冰袋。防護(hù)用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔離衣等。記錄用具：不干膠標(biāo)簽、圓珠筆、油性記號筆、采樣單、記錄本等第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三2、采樣前準(zhǔn)備—采樣技術(shù)血液樣品：牛、馬、羊從頸靜脈或尾靜脈采血；豬從前腔靜脈采血，用量少時(shí)也可從耳靜脈抽取；家禽從翅靜脈抽取。棉拭子樣品：泄殖腔，咽喉，鼻腔水泡皮及水泡液：O/P液：保定，左手拉出舌頭或從嘴的一側(cè)按住舌頭，右手緩慢放入探杯。組織樣品：解剖，潔凈取樣。第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三血液樣品的分離方法抗凝血：采血前在試管或注射器內(nèi)按比例加抗凝劑，運(yùn)輸時(shí)必須減少震蕩以免溶血。非抗凝血：分離血清血清析出好的因素：容器：玻璃試管優(yōu)于塑料離心管；斜面：與空氣接觸面要大。溫度：最佳溫度是體溫；時(shí)間：室溫靜置最短2小時(shí)；離心：轉(zhuǎn)速要低，2000轉(zhuǎn)。膠凍狀血清的成因：采血前剛剛喂食（沒有空腹）；凝血時(shí)間不夠；脂肪血（營養(yǎng)過剩）第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三糞便、棉拭子和O/P液樣品的采集泄殖腔拭子的采集：將棉拭子插入泄殖腔約1.5~2cm,旋轉(zhuǎn)后沾上糞便。咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：將滅菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，輕輕擦拭并慢慢旋轉(zhuǎn)將拭子拔出，將棉拭子放入緩沖液內(nèi)。O/P液是從動物食道/咽喉刮取的黏膜樣品，用特制的食道探環(huán)刮取黏膜，放入樣品保存液中。第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三水泡液及水泡皮的采集用75%酒精消毒水泡表皮，用滅菌生理鹽水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的PBS緩沖液中；然后用剪刀將水泡皮剪下，放入含抗生素的PBS緩沖液中。第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三3、采樣的準(zhǔn)確性和時(shí)效性代表性：應(yīng)該考慮到整個(gè)監(jiān)測區(qū)域的地理分布，選取有代表性的點(diǎn)。如動物品種分布、日齡、飼養(yǎng)密度、地勢特點(diǎn)、交通特點(diǎn)、動物遷徙習(xí)性等因素。如禽流感采樣時(shí)，疫區(qū)交接處，野鳥遷徙途徑，水禽家禽混合飼養(yǎng)處等。時(shí)效性：如抗體監(jiān)測，免疫后14天左右才可以采集；監(jiān)測病原時(shí)，注意排毒時(shí)間和病原的易嗜細(xì)胞和組織，在監(jiān)測時(shí)要根據(jù)不同時(shí)期，采集不同部位的組織進(jìn)行檢測。如口蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上皮細(xì)胞擴(kuò)增，然后進(jìn)入血液，通過分泌物、水泡排毒。第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三樣本\樣品的數(shù)量樣本：總體中的一部分代表；樣品：檢測的原始材料。概率抽樣（隨機(jī)抽樣）：是按照隨機(jī)原則進(jìn)行抽樣，不加主觀因素，組成總體的每個(gè)單位都有被抽中的概率（非零概率）比例抽樣：按養(yǎng)殖規(guī)模成比例抽樣。多階段抽樣：全市分區(qū)，每個(gè)區(qū)隨機(jī)選縣，每個(gè)縣選鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)選養(yǎng)殖場。樣本量，符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，決定因素：疫病在群體中的發(fā)生率，可信水平，檢測方法的敏感性和特異性。樣品的量要足夠檢測使用。第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三4.1樣品的包裝和編號單個(gè)樣品的包裝動物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有PBS的糞便等液體樣品用用1.5ml，2ml，5ml帶蓋的塑料離心管；組織病料等固體樣品用自封口樣品袋，或放入1.5ml及2ml塑料離心管；每次送樣的同一種樣品進(jìn)行編號，每個(gè)樣品都要有唯一編號，標(biāo)識清楚，不易丟失。每組樣品的包裝以鎮(zhèn)或每個(gè)采樣點(diǎn)為單位分組，每組一個(gè)大包裝，用自封口樣品袋包裝，并貼有標(biāo)簽，注明樣品名、樣品編號、采樣日期等。第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三4.2樣品的記錄單個(gè)樣品的小塑料離心管外用油性記號筆標(biāo)記每組樣品自封袋外用鋼筆填寫樣品標(biāo)簽和封條編號與采樣單一致，具有唯一性和可追溯性。填寫采樣單：被采樣畜主的聯(lián)系方式和采樣人的聯(lián)系方式；被采樣動物的健康狀況和免疫狀況；被采樣動物的聯(lián)系方式（畜種，日齡，標(biāo)識號等）；樣品運(yùn)輸方式；日期，簽名（采樣人，畜主）每類樣品要求填寫一份采樣單。第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三5、樣品追溯樣品編號和填寫采樣單目的就是對檢測結(jié)果的追溯?！秳游锓酪叻ā芬?guī)定動物免疫抗體監(jiān)測、動物疫病病原監(jiān)測、動物疫病應(yīng)急流行病學(xué)調(diào)查等均實(shí)行可追溯制度。追溯內(nèi)容：家禽來源、飼養(yǎng)周期、防疫情況、免疫程序、疫苗及獸藥的使用情況?？贵w監(jiān)測要求追溯到每棟，每舍。病原學(xué)監(jiān)測必須追溯到每只，每頭。第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三6.1樣品的保存血清：4-8℃冷藏，不超過2周；抗凝血：4-8℃冷藏，不超過1周；病毒檢驗(yàn)材料：短時(shí)間可冷藏，否則須-20℃或-70℃以下保存，無條件的可置滅菌50%甘油-PBS液中冷藏，不宜反復(fù)凍融。細(xì)菌檢驗(yàn)病料：冷藏，不宜冷凍，可置滅菌的30%甘油-PBS液/鹽水中冷藏。所有凍存樣品忌反復(fù)凍融第23頁，共24頁，2023年，2月20日，星期三6.2樣品的運(yùn)輸關(guān)鍵是：容器（密閉）溫度（低溫）時(shí)間（越快越好）容器：密封容器，防止?jié)B漏，造成環(huán)境污染或疫情擴(kuò)散。溫度：樣品應(yīng)在低溫下保存和運(yùn)輸（放置冰塊）。拭子樣品和組織樣品應(yīng)作暫時(shí)的冷藏或冷凍處理，然后運(yùn)