微生物檢驗(yàn)第八章非發(fā)酵陰桿

革蘭陰性桿菌OX+葡萄糖O/F葡萄糖O/F不動(dòng)桿菌屬窄食單胞菌屬不利用洛非不動(dòng)桿菌FO腸桿菌科假單胞菌屬無(wú)色桿菌屬金色桿菌屬不利用產(chǎn)堿桿菌布魯菌屬產(chǎn)堿假單胞無(wú)色桿菌FO氣單胞鄰單胞弧菌屬－第一頁(yè)，共64頁(yè)。共有的幾個(gè)特點(diǎn)非發(fā)酵菌大多數(shù)為條件致病菌

主要引起抵抗力低下病人的機(jī)會(huì)感染，如敗血癥、呼吸道感染、尿路感染、傷口感染等?，F(xiàn)已成為引起醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌。第二頁(yè)，共64頁(yè)。

對(duì)抗生素有天然的抗藥性

非發(fā)酵菌對(duì)抗生素常呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象。如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、黃桿菌等對(duì)絕大多數(shù)抗生素耐藥，銅綠假單胞菌對(duì)氨芐青霉素耐藥率達(dá)100%，甚至對(duì)第三代頭子孢菌素也呈現(xiàn)耐藥，而且耐藥率在逐年增加。第三頁(yè)，共64頁(yè)。不發(fā)酵革蘭陰性桿菌分類假單胞菌屬(Pseudomonas)產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes)不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)莫拉菌屬(Moraxella)無(wú)色桿菌屬(Achromobacter)金氏桿菌屬(Kingella)黃桿菌屬(Flavobacterium)艾肯菌屬(Eikenella)土壤桿菌屬(Agrobacterium)黃單胞菌屬(Xanthomonas)叢毛單胞菌屬(Comamonas)第四頁(yè)，共64頁(yè)。常見(jiàn)非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定試驗(yàn)假單胞菌屬無(wú)色桿菌屬黃桿菌屬不動(dòng)桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬叢毛菌屬莫拉菌屬氧化酶+++/--+++/-O/F試驗(yàn)O/-OOO/----動(dòng)力+/-+/-+/--++-注：+：90%以上陽(yáng)性；-10%以下的陽(yáng)性；+/-：約70%為陽(yáng)性；O：為氧化。第五頁(yè)，共64頁(yè)。

非發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無(wú)色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動(dòng)力+OXOX－不動(dòng)桿菌屬+葡萄糖產(chǎn)酸黃色素莫拉氏菌屬黃桿菌屬－－－++端鞭毛－+－++產(chǎn)堿桿菌屬尿素－+常見(jiàn)非發(fā)酵菌的鑒定雙岐索引第六頁(yè)，共64頁(yè)。假單菌屬按rRNA同源性分為5群及未確定rRNA同源群有關(guān)的種。一群需氧、不發(fā)酵葡萄糖、無(wú)芽胞，有鞭毛、氧化酶陽(yáng)性的革蘭陰性桿菌。多為條件致病菌。第一節(jié)假單胞菌屬第七頁(yè)，共64頁(yè)。臨床常見(jiàn)假單胞菌分群rRNA11.熒光假單胞菌DNA同源群

銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌2.斯氏假單胞菌DNA同源群斯氏假單胞菌曼多辛假單胞菌3.產(chǎn)堿假單胞菌DNA同源群產(chǎn)堿假單胞菌假產(chǎn)堿假單胞菌第八頁(yè)，共64頁(yè)。2.臨床意義分布廣泛：水、土壤、空氣。人類感染的非發(fā)酵菌中，假單胞菌屬占70%-80%，銅綠假單胞菌占55%-65%。常見(jiàn)的有嗜麥芽窄食單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌等。這些細(xì)菌在醫(yī)院內(nèi)感染中亦常見(jiàn)。第九頁(yè)，共64頁(yè)。3.微生物特性革蘭陰性、無(wú)芽胞、專性需氧有端鞭毛或叢鞭毛生長(zhǎng)溫度范圍廣，最適生長(zhǎng)溫度為35℃產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿紅素、熒光素、膿褐素。對(duì)理化因素耐受性較強(qiáng)，對(duì)多種抗生素耐藥。

第十頁(yè)，共64頁(yè)。藥敏試驗(yàn)藥物選擇按CLSI(NCCLS)推薦，分為4組：A組:頭孢他啶，慶大霉素，美洛西林，替卡西林，哌拉西林。B組:頭孢吡肟，頭孢哌酮，氨曲南，亞胺培南，阿米卡星，妥布霉素，環(huán)丙沙星。C組:頭孢噻肟，頭孢曲松，氯霉素D組或U組：羧芐西林，頭孢唑肟，四環(huán)素，諾氟沙星，氧氟沙星，磺胺甲基異惡唑。第十一頁(yè)，共64頁(yè)。在自然界分布較為廣泛，適應(yīng)能力強(qiáng)。常引起感染：皮膚、呼吸道、泌尿道、燒傷感染等。慢性肺部感染極為常見(jiàn)。菌血癥、心內(nèi)膜炎、肺囊性纖維變。眼部感染導(dǎo)致角膜穿孔而失明。二、銅綠假單胞菌第十二頁(yè)，共64頁(yè)。銅綠假單胞菌的毒力因子

粘附素：粘附結(jié)構(gòu)成分多糖似莢膜物質(zhì)

毒素內(nèi)毒素：LPS毒力因子外毒素：A阻止真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成S干擾吞噬殺菌作用綠膿素：具有氧化還原活性，催化超氧化物和過(guò)氧化氫產(chǎn)生有毒基團(tuán)酶類彈性蛋白酶:絲氨酸蛋白酶（Las-A）降解彈性鋅金屬蛋白酶（Las-B）蛋白磷脂酶C:分解脂質(zhì)和卵磷脂，損傷組織細(xì)胞第十三頁(yè)，共64頁(yè)。2.生物學(xué)特性形態(tài)與染色

為無(wú)芽胞細(xì)長(zhǎng)的革蘭氏陰性桿菌，菌體長(zhǎng)短不一，短的呈球桿狀，長(zhǎng)的為絲狀。成對(duì)排列或形成短鏈。無(wú)莢膜，在菌體一端有1根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。革蘭氏染色陰性，無(wú)抗酸性。第十四頁(yè)，共64頁(yè)。第十五頁(yè)，共64頁(yè)。第十六頁(yè)，共64頁(yè)。第十七頁(yè)，共64頁(yè)。培養(yǎng)特性專性需氧菌。生長(zhǎng)溫度范圍為20-42℃;最適溫度為35℃，致病性菌可在42℃生長(zhǎng)，但在4℃不生長(zhǎng)，這可與熒光假單胞菌等進(jìn)行鑒別。本菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)無(wú)特殊要求，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，在選擇培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂、SS瓊脂培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)。

第十八頁(yè)，共64頁(yè)。在普通瓊脂平板上經(jīng)18-24小時(shí)培養(yǎng)，可形成圓形、邊緣不整齊、扁平稍隆起、光滑溫潤(rùn)且常呈融合狀態(tài)的菌落。瓊脂被染成藍(lán)綠色或黃綠色。在血瓊脂平板上經(jīng)35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，可形成大而扁平、濕潤(rùn)、有金屬光澤、有特殊氣味之灰綠色、藍(lán)綠色的菌落，并形成透明溶血環(huán)。第十九頁(yè)，共64頁(yè)。生化特性氧化酶陽(yáng)性，能氧化分解葡萄糖、木糖產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，但產(chǎn)生紅膿素或黑膿素的菌株，以及粘液型菌落的菌株可能不分解糖類。本菌能液化明膠，分解尿素，能利用枸櫞酸鹽，不產(chǎn)生吲哚，能還原硝酸鹽為亞硝鹽酸，或產(chǎn)生氮?dú)?。第二十?yè)，共64頁(yè)。（1）分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本可接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基。鑒定根據(jù)鏡下特征、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)等。

3.微生物檢驗(yàn)（檢驗(yàn)程序）第二十一頁(yè)，共64頁(yè)。血平板上毛玻璃樣，金屬光澤，生姜味可產(chǎn)生多種色素：熒光素與綠膿素第二十二頁(yè)，共64頁(yè)。（2）抗原檢測(cè)：血清學(xué)分型、噬菌體分型。（3）核酸檢測(cè)：DNA內(nèi)切酶分析、質(zhì)粒指紋圖譜分析、PCR指紋圖譜分析、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析（PFGE）、基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA鑒定技術(shù)等。第二十三頁(yè)，共64頁(yè)。檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告與分析診斷要與臨床表現(xiàn)、標(biāo)本來(lái)源相結(jié)合。初代敏感的菌株在治療3~4天后可能發(fā)生耐藥。因此治療過(guò)程中，3~4天后重復(fù)藥敏測(cè)試。粒細(xì)胞減少的的病人銅綠假單胞菌感染，要用最大劑量的抗菌藥物。產(chǎn)粘液型銅綠假單胞菌所致感染治療十分困難，應(yīng)特別提示臨床。第二十四頁(yè)，共64頁(yè)。產(chǎn)酶：金屬酶，OXA酶。外膜蛋白的改變（為主要機(jī)制）：膜孔蛋白突變，阻止藥物由外膜進(jìn)入胞內(nèi)。主動(dòng)外排泵機(jī)制：對(duì)碳青霉烯類、喹諾酮類。銅綠假單胞菌耐藥機(jī)制第二十五頁(yè)，共64頁(yè)。兩菌均人獸共患病原菌。（馬、驢、騾、貓、狗等）人類感染是經(jīng)傷口、粘膜、呼吸道。急性患者可有高熱、衰竭等全身癥狀。肺鼻疽病、皮膚鼻疽病、內(nèi)臟膿腫、菌血癥、膿毒血癥。臨床意義第二十六頁(yè)，共64頁(yè)。生物學(xué)特性

革蘭陰性桿菌無(wú)芽胞、無(wú)莢膜偽馬勒鼻伯克霍爾德菌一端有叢鞭毛(1~4根)，4℃不能生長(zhǎng)馬勒鼻伯克霍爾德菌無(wú)鞭毛無(wú)動(dòng)力，42℃不生長(zhǎng)不產(chǎn)生綠膿素、熒光素。第二十七頁(yè)，共64頁(yè)。微生物檢驗(yàn)分離培養(yǎng)與鑒定需氧菌生長(zhǎng)溫度35℃普通培養(yǎng)基、血瓊脂、麥康凱生化鑒定熒光直接法染色鏡檢，可快速診斷第二十八頁(yè)，共64頁(yè)?？纱嬖谟谡Ｈ似つw、呼吸道、泌尿道。自然界分布廣泛水、土壤、灰塵等。重要的條件致病菌。在非發(fā)酵菌的感染中，鮑曼不動(dòng)桿菌僅次于銅綠假單胞菌，位列第二。近年呈明顯上升趨勢(shì)，尤其是泛耐藥菌株的出現(xiàn)。第二節(jié)不動(dòng)桿菌屬

第二十九頁(yè)，共64頁(yè)。生物學(xué)特性革蘭陰性桿菌，多為球桿狀或球狀，常見(jiàn)成對(duì)排列染成陽(yáng)性或陰陽(yáng)不定，誤認(rèn)為球菌。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。專性需氧菌。生長(zhǎng)溫度為35℃普通培養(yǎng)基，麥康凱、血平板均生長(zhǎng)。氧化酶陰性，動(dòng)力陰性，硝酸鹽試驗(yàn)陰性。第三十頁(yè)，共64頁(yè)。第三十一頁(yè)，共64頁(yè)。第三十二頁(yè)，共64頁(yè)。第三十三頁(yè)，共64頁(yè)。第三十四頁(yè)，共64頁(yè)。第三十五頁(yè)，共64頁(yè)。第三十六頁(yè)，共64頁(yè)。微生物檢驗(yàn)（檢驗(yàn)程序）血平板：菌落圓形、灰白色、光滑、邊緣整齊、直徑2~3mm，而洛菲不動(dòng)桿菌菌落小，直徑為1~1.5mm。第三十七頁(yè)，共64頁(yè)。

單憑生化反應(yīng)鑒定十分困難，簡(jiǎn)易方法根據(jù)分解糖與否分為兩大類。能氧化分解葡萄糖、不溶血：鮑曼不動(dòng)桿菌。不氧化分解葡萄糖：溶血：溶血不動(dòng)桿菌。不溶血：洛菲不動(dòng)桿菌。臨床絕大多數(shù)是鮑曼不動(dòng)桿菌，其余少見(jiàn)。第三十八頁(yè)，共64頁(yè)。藥物敏感試驗(yàn)及結(jié)果解釋根據(jù)CLSI規(guī)定不動(dòng)桿菌可以用Kirby-Bauer法做藥敏試驗(yàn)。不動(dòng)桿菌耐藥性強(qiáng)。對(duì)全部氨基青霉素、一、二代頭孢菌素和一代喹諾酮類抗生素天然耐藥?？蛇x用：SXT、TZP、CIP、LEV、DO、CT、MNO等。亞胺培南敏感性好，但容易快速形成耐藥。替加環(huán)素（老虎素）第三十九頁(yè)，共64頁(yè)。嗜麥芽窄食單胞菌是重要的條件致病菌。呼吸道、泌尿道、傷口等部位感染，菌血癥及心內(nèi)膜炎。很常見(jiàn)：在不發(fā)酵菌引起的感染中，僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌，居臨床分離陽(yáng)性率的第三位。第三節(jié)嗜麥芽窄食單胞菌第四十頁(yè)，共64頁(yè)。生物學(xué)特性革蘭陰性，端鞭毛，(1~8)根有動(dòng)力、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜生長(zhǎng)溫度為35℃，4℃不生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)要求低，在血瓊脂、普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好。菌落中等大小、圓形、光滑、濕潤(rùn)、產(chǎn)生不溶血的黃色色素或草綠色。有淡淡的氨味。第四十一頁(yè)，共64頁(yè)。第四十二頁(yè)，共64頁(yè)。第四十三頁(yè)，共64頁(yè)。在血平板上孵育48小時(shí)以上，菌落中心有變透明的趨勢(shì)，稱之為“貓眼”現(xiàn)象第四十四頁(yè)，共64頁(yè)。生化鑒定：

氧化酶陰性

有動(dòng)力液化明膠水解七葉苷賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性

氧化分解麥芽糖氧化分解葡萄糖第四十五頁(yè)，共64頁(yè)。氧化酶試驗(yàn)陰性、有動(dòng)力的非發(fā)酵菌的生物學(xué)特性菌屬麥芽糖賴氨酸甘露醇膽汁七葉苷嗜麥芽窄食單胞菌++－－洋蔥伯克霍爾德++++/－唐菖蒲伯克霍爾德菌－－+－棲稻黃色單胞菌+－+－淺黃金色單胞菌+－++少動(dòng)鞘氨醇單胞菌+－－+第四十六頁(yè)，共64頁(yè)。藥物敏感試驗(yàn)及結(jié)果解釋治療首選磺胺類：TMP/SMZ；喹諾酮類：環(huán)丙氟派酸；替卡西林/棒酸亞胺培南(泰能)天然耐藥。藥敏試驗(yàn)紙片法僅有三種抗生素：左氧氟沙星、米諾環(huán)素、復(fù)方磺胺有折點(diǎn)。其他藥敏試驗(yàn)應(yīng)選用肉湯、瓊脂稀釋法作MIC，或采用E-TEST的方法。第四十七頁(yè)，共64頁(yè)。軍團(tuán)菌屬(Legionella)屬于軍團(tuán)菌科，常見(jiàn)的與人類疾病有關(guān)的軍團(tuán)菌：嗜肺軍團(tuán)菌（Legionellapneumophila）米克戴德軍團(tuán)菌（L.micdadei）長(zhǎng)灘軍團(tuán)菌（L.longbeachae）杜莫夫軍團(tuán)菌（L.dumoffii）波茲曼軍團(tuán)菌（L.bozemanii）

第四節(jié)軍團(tuán)菌屬第四十八頁(yè)，共64頁(yè)。臨床意義供水系統(tǒng)、中央空調(diào)、溶洞、霧化吸入等引起肺炎型和非肺炎型感染。肺炎型（重癥）：嗜肺軍團(tuán)菌（LP），LP1、LP6所致。呼吸道癥狀、多臟器損害、頭痛、畏寒、發(fā)熱、消化道神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，致死率高。非肺炎型：病情較輕的自限性疾病。醫(yī)院感染可高達(dá)23%。慢性心、肺、腎病變、艾滋病或接受免疫抑制劑者易發(fā)本病，且死亡率高達(dá)45%。第四十九頁(yè)，共64頁(yè)。生物學(xué)特性革蘭陰性桿菌菌體呈線狀無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，有端鞭毛或側(cè)鞭毛嚴(yán)格需氧觸酶陽(yáng)性可液化明膠不分解糖類部份菌株氧化酶陽(yáng)性第五十頁(yè)，共64頁(yè)。微生物檢驗(yàn)臨床標(biāo)本：痰、氣管分泌物、胸水和血液為主。病理組織標(biāo)本：必須制成懸液，再進(jìn)行涂片和分離培養(yǎng)。環(huán)境污染標(biāo)本：應(yīng)先濃縮再接種。第五十一頁(yè)，共64頁(yè)。微生物檢驗(yàn)

分離培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，生長(zhǎng)緩慢生長(zhǎng)溫度為35℃最適pH6.7~7.0初次分離必須采用(BCYE)3~5天可形成1~2mm直徑的光澤菌落第五十二頁(yè)，共64頁(yè)。軍團(tuán)菌感染診斷試驗(yàn)比較試驗(yàn)敏感性(%)特異性(%)評(píng)注培養(yǎng)70100參考方法直接免疫熒光25～70>95不推薦常規(guī)應(yīng)用間接免疫熒光70～90>99只用于嗜肺軍團(tuán)菌血清群1酶標(biāo)記免疫70～90>99乳膠凝集55～9085～99血清學(xué)（間接免疫熒光）70～80>95輔助培養(yǎng)

第五十三頁(yè)，共64頁(yè)。藥敏試驗(yàn)及結(jié)果解釋軍團(tuán)菌的最終鑒定根據(jù)其生物學(xué)特性進(jìn)行綜合分析，包括形態(tài)、生化形狀、分子生物學(xué)檢驗(yàn)（PCR、16srRNA）、抗體檢測(cè)等。臨床首選藥物為紅霉素。可用利福平、氨曲南。氨基糖苷類、青霉素、頭孢菌素對(duì)本細(xì)菌無(wú)效。體外實(shí)驗(yàn)不作為臨床常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。第五十四頁(yè)，共64頁(yè)。第七節(jié)莫拉菌屬

引起眼結(jié)膜炎、氣管炎、肺炎、腦膜炎、腦膿腫、心包炎、心內(nèi)膜炎及泌尿生殖系統(tǒng)炎癥等。第五十五頁(yè)，共64頁(yè)。微生物特性革蘭陰性球桿菌、球菌。不易著色。呈雙短鏈狀排列，具有多形性。

分離培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)要求較高生長(zhǎng)溫度32~35℃血瓊脂平板上生長(zhǎng)良好針尖大小的圓形凸起、光滑、半透明、邊緣整齊不溶血的菌落。第五十六頁(yè)，共64頁(yè)。第五十七頁(yè)，共64頁(yè)。第五十八頁(yè)，共64頁(yè)。微生物檢驗(yàn)鑒定：氧化酶陽(yáng)性觸酶陽(yáng)性無(wú)動(dòng)力不分解任何糖類吲哚試驗(yàn)陰性第五十九頁(yè)，共64頁(yè)。藥物敏感試驗(yàn)及結(jié)果解釋對(duì)青霉素類敏感。對(duì)頭孢類、四環(huán)素類、喹諾酮類、氨基糖甙類藥物均為敏感。腦炎或腦膜炎、腦膿腫應(yīng)注意藥物通過(guò)血腦屏障的問(wèn)題。第六十頁(yè)，共64頁(yè)。非發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無(wú)色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動(dòng)力+OX