分子生物學(xué)基因組轉(zhuǎn)錄組蛋白組

MolecularGeneticsandGenomicsFallSemester,2010主講教師：薛樹林

聯(lián)系電話：84396024地址：

金陵研究院316E-mail:植物應(yīng)用基因組學(xué)與生物信息中心現(xiàn)在是1頁\一共有81頁\編輯于星期四1.出勤及回答問題情況：

30%

（

隨機提問形式）2.期末考試：

70%

（閉卷）考核方式對于選修《基因組學(xué)》課程的同學(xué)，采取寫一篇課程論文的考核方式（70%）。2學(xué)分，周五3-5節(jié)，教學(xué)樓B301現(xiàn)在是2頁\一共有81頁\編輯于星期四ReferencesGenomes2,Genomes3byBrownTAGeneVIII,GeneIXbyB.LewinJournalsonPlantMolecularGenetics《現(xiàn)代分子生物學(xué)》，朱玉賢，李毅

著《基因組學(xué)》楊金水著《分子克隆實驗指南》（第3版），薩姆布魯克（美）主編現(xiàn)在是3頁\一共有81頁\編輯于星期四Chapter1:Genomes,TranscriptomesandProteomesChapter2:StudyingDNAChapter3:MappingGenomesChapter4:SequencingandAnnotationofGenomesChapter5:EukaryoticNuclearGenomesChapter6:GenomesofProkaryotesandEukaryotic OrganellesChapter7:GenomeExpressionChapter8:GenomeEvolutionOutlineofthiscourse現(xiàn)在是4頁\一共有81頁\編輯于星期四Chapter1:

Genomes,TranscriptomesandProteomes現(xiàn)在是5頁\一共有81頁\編輯于星期四基因組（Genome）：由德國漢堡大學(xué)威克勒教授于1920年首創(chuàng)，指生物的整套染色體所含有的全部DNA或RNA序列?；蚪M是地球上每一物種具有的生物學(xué)信息的存儲庫?；蚪M學(xué)（Genomics）：由羅德里克于1986年首創(chuàng)，指研究生物的整個基因組，涉及基因組作圖、測序和功能分析的一門學(xué)科。1.概述現(xiàn)在是6頁\一共有81頁\編輯于星期四32億個nt,2n=46,35,000個基因16,569bp,環(huán)形分子，多拷貝,37個基因現(xiàn)在是7頁\一共有81頁\編輯于星期四基因組所包含的生物信息的利用需要酶及其他參與基因組表達過程中一系列復(fù)雜生化反應(yīng)的蛋白質(zhì)的協(xié)同活性。基因組表達的最初產(chǎn)物是轉(zhuǎn)錄組，即那些含有細胞在特定時間所需生物信息、編碼蛋白質(zhì)的基因衍生而來的RNA分子的集合。轉(zhuǎn)錄組由轉(zhuǎn)錄過程來維持?；蚪M表達的第二個產(chǎn)物是蛋白質(zhì)組，即細胞中那些決定細胞能夠進行生化反應(yīng)的所有蛋白質(zhì)組分。這是通過翻譯過程來完成的。現(xiàn)在是8頁\一共有81頁\編輯于星期四細胞的蛋白質(zhì)庫現(xiàn)在是9頁\一共有81頁\編輯于星期四DNA由JohannFriedrichMiescher在1869年發(fā)現(xiàn),這位瑞士生物學(xué)家當(dāng)時在德國蒂賓根（Tubingen）工作。2.DNA現(xiàn)在是10頁\一共有81頁\編輯于星期四2.1GenesaremadeofDNA奧地利神父孟德爾1865年根據(jù)7個碗豆性狀的實驗提出了遺傳因子假說，認為每個性狀由遺傳因子控制，并提出了遺傳因子的分離與自由組合兩大遺傳規(guī)律?，F(xiàn)在是11頁\一共有81頁\編輯于星期四證明基因由核酸

(DNA或RNA)

組成的3個著名實驗：①肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化試驗；②噬菌體感染實驗；③煙草花葉病毒的感染實驗。現(xiàn)在是12頁\一共有81頁\編輯于星期四A.1928年，荷蘭細菌學(xué)家格里菲斯（Griffith）的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗

Griffith在研究肺炎球菌時發(fā)現(xiàn)肺炎球菌有很多不同菌株，其中有一種菌株它的球菌有毒性，能引起小鼠得敗血病。這些有毒的球菌外面有保護作用的多糖膠狀莢膜，使它們可以不被宿主的正常保護機構(gòu)所破壞；當(dāng)它們生長在培養(yǎng)基上時，每一個細菌長成一個明亮的光滑菌落，叫光滑型（S）菌株；另外一些菌株無莢膜，菌落粗糙，沒有毒性，不會引起疾病，叫R型菌株。現(xiàn)在是13頁\一共有81頁\編輯于星期四(1)(2)(3)(4)現(xiàn)在是14頁\一共有81頁\編輯于星期四這表明無毒性的R型活細菌在與被加熱殺死的S型細菌混合后，轉(zhuǎn)化成了有毒性的S型活細菌。這些轉(zhuǎn)化成的S型細菌的后代也是有毒性的S型細菌，可見這種性狀的轉(zhuǎn)化是可以遺傳的。1944年，艾弗里從S型活細菌中提取了DNA，蛋白質(zhì)和多糖等物質(zhì)，然后分別加入到培養(yǎng)R型細菌的培養(yǎng)基中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有加入DNA時，

R型細菌才能轉(zhuǎn)化成S型細菌。通過上述研究表明，DNA是使R型細菌產(chǎn)生轉(zhuǎn)化的物質(zhì)，所以DNA是遺傳物質(zhì)?，F(xiàn)在是15頁\一共有81頁\編輯于星期四B.噬菌體感染實驗

噬菌體T2有一個蛋白質(zhì)的外殼，DNA裹在其中。當(dāng)噬菌體T2感染大腸桿菌時，它的尾部吸附在菌體上。然后，菌體內(nèi)形成大量噬菌體，菌體裂解后，釋放出幾十個乃至幾百個與原來感染細菌一樣的噬菌體T2。構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸中，甲硫氨酸和半胱氨酸含有硫，DNA中不含S，所以S只存在于T2噬菌體的蛋白質(zhì)。相反，P主要存在于DNA中，至少占T2噬菌體含磷量的99％。AlfedHershey和MarthaChase(1952)將宿主菌細胞分別放在含35S或含32P的培養(yǎng)基中。宿主細胞在生長過程中就被35S或32P標(biāo)記上了。然后用噬菌體去感染分別被S或P標(biāo)記的細菌，并在這些細菌中復(fù)制增殖。宿主菌裂解釋放出很多子代噬菌體，這些子代噬菌體也被標(biāo)記上35S或32P。現(xiàn)在是16頁\一共有81頁\編輯于星期四接著，用分別被35S或32p標(biāo)記的噬菌體去感染沒有被放射性同位素標(biāo)記的宿主菌，然后測定宿主菌細胞帶有的同位素。被35S標(biāo)記的噬菌體所感染的宿主菌細胞內(nèi)很少有35S，而大多數(shù)35S出現(xiàn)在宿主菌細胞的外面。也就是說，35S標(biāo)記的噬菌體蛋白質(zhì)外殼在感染宿主菌細胞后，并未進入宿主菌細胞內(nèi)部而是留在細胞外面。被32p標(biāo)記的噬菌體感染宿主菌細胞后，測定宿主菌的同位素，發(fā)現(xiàn)32p主要集中在宿主菌細胞內(nèi)。所以噬菌體感染宿主菌細胞時進入細胞內(nèi)的主要是DNA。由此可以得出結(jié)論：噬菌體注入宿主菌細胞內(nèi)的物質(zhì)是DNA，釋放出來的是跟原先感染細菌細胞一樣的噬菌體。可見在噬菌體的生活史中，只有DNA是聯(lián)系親代和子代的物質(zhì)?，F(xiàn)在是17頁\一共有81頁\編輯于星期四現(xiàn)在是18頁\一共有81頁\編輯于星期四C.煙草花葉病毒的感染實驗對病毒的研究逐漸深入以后，發(fā)現(xiàn)一些植物的病毒僅含有RNA沒有DNA。當(dāng)用煙草花葉病毒（TMV）的RNA和蛋白質(zhì)分別進行感染試驗，發(fā)現(xiàn)只有RNA才能誘發(fā)感染。RNA也是遺傳物質(zhì)現(xiàn)在是19頁\一共有81頁\編輯于星期四RNA蛋白質(zhì)RNA酶處理現(xiàn)在是20頁\一共有81頁\編輯于星期四2.2ThestructureofDNA核苷酸A.Nucleotidesandpolynucleotides2’-脫氧核糖現(xiàn)在是21頁\一共有81頁\編輯于星期四多聚核苷酸3’,5’-磷酸二酯鍵現(xiàn)在是22頁\一共有81頁\編輯于星期四DNA多聚核苷酸合成的聚合反應(yīng)現(xiàn)在是23頁\一共有81頁\編輯于星期四2.2ThestructureofDNAB.Themodelofdoublehelix

DNA晶體X射線衍射圖譜為揭示DNA分子的二級結(jié)構(gòu)提供了重要實驗證據(jù)威爾金斯弗蘭克林現(xiàn)在是24頁\一共有81頁\編輯于星期四a.WatsonandCrick(1953)提出的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型：DNA分子通常以右手雙螺旋形式存在，兩條核苷酸鏈反向平行，且互為互補鏈。戊糖－磷酸骨架在分子的外鍘，在分子表面形成大溝和小溝，堿基堆積于螺旋內(nèi)部.堿基間通過氫鍵相互連接，A和T以2個氫鍵配對，G和C以3個氫鍵配對.螺旋中相鄰堿基間相隔0.34nm，每10個堿基對螺旋上升一圈，螺距為3.4nm，直徑為2.37nm?，F(xiàn)在是25頁\一共有81頁\編輯于星期四Width2.37nm3.4nm現(xiàn)在是26頁\一共有81頁\編輯于星期四4314256現(xiàn)在是27頁\一共有81頁\編輯于星期四盡管氫鍵使得雙鏈中的堿基間的配對具有特異性（只有互補的兩條鏈之間才能形成DNA雙鏈），但其對于雙螺旋的總體上的穩(wěn)定性并無太大貢獻。核酸分子的穩(wěn)定性的根源在于堿基對之間的疏水堆積力。作為芳香族化合物，堿基的平面使其不能在自由溶液中與水分子形成氫鍵，即它們是疏水的。疏水效應(yīng)使雙鏈DNA成為能量上最為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。盡管這種堆積作用在RNA中也存在，但其在雙鏈DNA中達到了最大化。b.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定力：堿基間形成的氫鍵相鄰堿基間的疏水堆積力堿基相互作用的范德華力現(xiàn)在是28頁\一共有81頁\編輯于星期四c.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的類型:三種形態(tài)的DNA：A-DNA,B-DNA,Z-DNA兩類：右手螺旋和左手螺旋ABZ現(xiàn)在是29頁\一共有81頁\編輯于星期四ABZMiMaMaMiMiMa較寬，結(jié)構(gòu)更緊密，是RNA及RNA與DNA雜合體的主要螺旋形式單一交替的嘧啶－嘌呤序列如5’-CGCGCG-3’不是體內(nèi)核酸的主要形式所有DNA的穩(wěn)定形式111210現(xiàn)在是30頁\一共有81頁\編輯于星期四DNA雙螺旋不同構(gòu)象的特征螺旋直徑螺距現(xiàn)在是31頁\一共有81頁\編輯于星期四3.RNAandtheTranscriptome基因組表達的最初產(chǎn)物是轉(zhuǎn)錄組，即那些含有細胞在特定時間所需生物信息、編碼蛋白質(zhì)的基因衍生而來的RNA分子的集合。轉(zhuǎn)錄組中的RNA分子以及其他來自非編碼基因的RNA都由轉(zhuǎn)錄過程產(chǎn)生?，F(xiàn)在是32頁\一共有81頁\編輯于星期四3.1ThestructureofRNA核糖A,C,G,U穩(wěn)定性差主要以單鏈形式存在2’,3’-環(huán)磷酸二酯現(xiàn)在是33頁\一共有81頁\編輯于星期四依賴模板的RNA合成DNA-dependentRNApolymerases現(xiàn)在是34頁\一共有81頁\編輯于星期四3.2

細胞內(nèi)的RNA組分一個典型的細菌細胞含有

0.05–0.10pg的RNA，約占其總質(zhì)量的6%。一個哺乳動物細胞，比細菌大得多，含有20–30pgRNA，但是只占細胞總質(zhì)量的1%?，F(xiàn)在是35頁\一共有81頁\編輯于星期四細胞內(nèi)的RNA組分核小RNA核仁小RNA微小RNA短干擾RNA構(gòu)成轉(zhuǎn)錄組所有生物僅真核生物現(xiàn)在是36頁\一共有81頁\編輯于星期四核小RNA(SnRNA)：發(fā)現(xiàn)于真核生物細胞核中，與前體mRNA剪接成成熟mRNA的過程相關(guān)。核仁小RNA（snoRNA）：發(fā)現(xiàn)于真核細胞核的核仁區(qū)，在rRNA分子的加工過程中起到核心作用（比如在某個核苷酸位點上加上一個甲基）。微小RNA（miRNA）和短干擾RNA（siRNA）：是調(diào)控個別基因表達的小RNA?，F(xiàn)在是37頁\一共有81頁\編輯于星期四3.3ProcessingofprecursorRNA末端修飾剪接剪切化學(xué)修飾pre-rRNApre-tRNARNAediting新的化學(xué)基團現(xiàn)在是38頁\一共有81頁\編輯于星期四3.4Thetranscriptome轉(zhuǎn)錄組雖然不到細胞總RNA的4%，卻是細胞中最重要的組分，因為它包含了基因組表達的下一個階段中所要使用的編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組從不從頭合成（denovo），一個細胞通過細胞分裂誕生時就接收了其上一代的部分轉(zhuǎn)錄組，并維持一生。各蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄過程并不是導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄組的合成，而是通過替換被降解的mRNA來維持轉(zhuǎn)錄組，并通過開閉不同的基因的表達來改變轉(zhuǎn)錄組的組成?，F(xiàn)在是39頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5

轉(zhuǎn)錄組研究的方法A.通過序列分析研究轉(zhuǎn)錄組研究轉(zhuǎn)錄組最直接的方法是將其中的mRNA轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA，并對所有cDNA克隆進行測序，再與基因組序列進行比較分析。還可以借助第二、三代測序技術(shù)直接對RNA進行測序?，F(xiàn)在是40頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5

轉(zhuǎn)錄組研究的方法A.通過序列分析研究轉(zhuǎn)錄組基因表達系列分析（Serialanalysisofgeneexpresion,SAGE）SAGE技術(shù)不是研究完整的cDNA，它產(chǎn)生長度12bp的短序列，每一條都代表了轉(zhuǎn)錄組中存在的一種mRNA。技術(shù)基礎(chǔ)：412=16,777,216bp，真核mRNA平均1500bp，412相當(dāng)于11,000個轉(zhuǎn)錄物，這比最復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組中存在轉(zhuǎn)錄物數(shù)目還多，因此12bp序列能夠代表某一種mRNA。現(xiàn)在是41頁\一共有81頁\編輯于星期四BsmF1是一種不常見的限制性內(nèi)切酶，它不在其識別序列內(nèi)部，而是在識別位點下游10-14個nt處切割。SAGE纖維素微粒4bp頻繁切割洗脫去除連接一個含有BsmF1識別序列的寡聚核苷酸現(xiàn)在是42頁\一共有81頁\編輯于星期四切下來的片段被收集起來，頭尾相連以產(chǎn)生一個串聯(lián)體，進行測序分析。串聯(lián)體中的各個標(biāo)簽序列信息被讀取并與基因組中的基因序列比對，從而可以分析哪些基因被轉(zhuǎn)錄，表達水平如何。SAGE現(xiàn)在是43頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5

轉(zhuǎn)錄組研究的方法B.通過微陣列或芯片分析來研究轉(zhuǎn)錄組探針：原位合成并固化的寡聚核苷酸PCR產(chǎn)物cDNA優(yōu)點：可用于快速評估兩個或多個轉(zhuǎn)錄組間的差異。109拷貝，過量構(gòu)成轉(zhuǎn)錄組的mRNA總體被反轉(zhuǎn)錄成一個cDNA的混合物，然后被標(biāo)記，用于和芯片或微陣列雜交?，F(xiàn)在是44頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5

轉(zhuǎn)錄組研究的方法B.通過微陣列或芯片分析來研究轉(zhuǎn)錄組與基因中不同位置匹配的寡聚核苷酸鏈（包含20種左右）探針標(biāo)記效率雜交效率玻璃片，尼龍膜玻璃片，硅片現(xiàn)在是45頁\一共有81頁\編輯于星期四用不同的熒光來標(biāo)記cDNA樣品，微陣列與兩個樣品同時雜交，可以減少由于試驗誤差引起的差異?，F(xiàn)在是46頁\一共有81頁\編輯于星期四4.ProteinsandtheProteome基因組表達的第二個產(chǎn)物是蛋白質(zhì)組，即細胞中那些決定細胞能夠進行生化反應(yīng)的所有蛋白質(zhì)組分。這些蛋白質(zhì)是通過翻譯那些組成轉(zhuǎn)錄組的mRNA分子而合成的。Molcellproteomics:8.8Proteomics:4.4現(xiàn)在是47頁\一共有81頁\編輯于星期四4.1Proteinstructure蛋白質(zhì)和DNA分子一樣，是一個線性的無分支的多聚體。蛋白質(zhì)中的單體亞單位稱為氨基酸。氨基酸形成的多聚體或多肽在長度上很少超過2000個單位。氨基酸的一般結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是48頁\一共有81頁\編輯于星期四A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructurea.primarystructure氨基酸通過肽鍵連接成一條多肽鏈。NCCN現(xiàn)在是49頁\一共有81頁\編輯于星期四A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructureb.secondarystructure指多肽采取的不同構(gòu)象，由不同氨基酸之間形成的氫鍵所穩(wěn)定。螺旋；片層現(xiàn)在是50頁\一共有81頁\編輯于星期四A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructureb.tertiarystructure是將多肽鏈的二級結(jié)構(gòu)組分折疊成為三維構(gòu)型而形成的。它被各種化學(xué)力所穩(wěn)定：氨基酸殘基間的氫鍵；帶電荷的氨基酸R基團間的靜電相互作用；疏水相互作用；半胱氨酸殘基間的二硫鍵現(xiàn)在是51頁\一共有81頁\編輯于星期四現(xiàn)在是52頁\一共有81頁\編輯于星期四A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructured.quaternarystructure兩條或更多已形成三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈組合在一起形成一個多亞基蛋白質(zhì)。不是所有蛋白質(zhì)都有四級結(jié)構(gòu)；穩(wěn)定力包括：二硫鍵（穩(wěn)定）；

氫鍵，

疏水作用（松散）Nature,27NOV,2008現(xiàn)在是53頁\一共有81頁\編輯于星期四B.蛋白質(zhì)的多樣性取決于氨基酸的多樣性4.1Proteinstructure組成蛋白質(zhì)的氨基酸在化學(xué)性質(zhì)上有多樣性，因此蛋白質(zhì)的功能也是多種多樣的。氨基酸的多樣性源于R基團?，F(xiàn)在是54頁\一共有81頁\編輯于星期四氨基酸的R基團非極性（疏水）極性（親水）帶負電荷p19帶正電荷現(xiàn)在是55頁\一共有81頁\編輯于星期四現(xiàn)在是56頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2Theproteome蛋白質(zhì)組包括了在特定時間存在于細胞中的所有蛋白質(zhì)。一個典型的哺乳動物細胞，如肝細胞中，含有10000～20000種不同的蛋白質(zhì)，共有約

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個蛋白質(zhì)分子，重約0.5ng，占細胞總重量的18-20%。各種蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)差別很大，最少的每個細胞中不足20000個，最多的可達1億個。每個細胞中拷貝數(shù)大于50000的蛋白質(zhì)被認為含量較豐富，通常哺乳動物細胞中約有2000種蛋白質(zhì)屬于此類，它們大多屬于管家蛋白?，F(xiàn)在是57頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2TheproteomeA.ThelinkbetweenthetranscriptomeandtheproteomeGeneticcode現(xiàn)在是58頁\一共有81頁\編輯于星期四四個標(biāo)點密碼子現(xiàn)在是59頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2TheproteomeB.Thegeneticcodeisnotuniversal標(biāo)準(zhǔn)遺傳密碼的偏差示例色氨酸精氨酸線粒體基因組現(xiàn)在是60頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2TheproteomeB.蛋白質(zhì)組和細胞生化功能之間的聯(lián)系基因組編碼的生物學(xué)信息最終由蛋白質(zhì)表現(xiàn)。蛋白質(zhì)能夠執(zhí)行各種生物學(xué)功能：生物催化作用（酶）；結(jié)構(gòu)（細胞骨架由蛋白質(zhì)決定）；運動（收縮蛋白）；運輸（血紅蛋白運輸血液中的氧）；調(diào)節(jié)細胞進程（信號蛋白、活化調(diào)節(jié)因子）；保護細胞個體（抗體）；儲藏功能（麥醇溶蛋白）?，F(xiàn)在是61頁\一共有81頁\編輯于星期四4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法A.蛋白譜（表達蛋白質(zhì)組學(xué)）用來研究一個蛋白質(zhì)組組成的特定技術(shù)。蛋白譜基于兩項技術(shù)：蛋白電泳和質(zhì)譜a.雙向電泳：分子量等電點：蛋白質(zhì)的凈電荷為零時溶液的PH值。等電聚焦等電點現(xiàn)在是62頁\一共有81頁\編輯于星期四雙向凝膠電泳結(jié)果尋找差異表達點現(xiàn)在是63頁\一共有81頁\編輯于星期四b.MALDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜)4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法A.蛋白譜用于鑒定蛋白組中的蛋白質(zhì)，最多可以分析出50個氨基酸長度的多肽，因此一個蛋白質(zhì)可以通過胰酶將其消化后進行測定。一旦多肽片段被離子化，多肽的質(zhì)量/電荷比就可以通過它在質(zhì)譜儀中從電離源到檢測器的“飛行時間”來確定。通過質(zhì)荷比能夠確認多肽片段的分子質(zhì)量。計算機中含有一個由所研究的物種基因組編碼的每一個蛋白質(zhì)經(jīng)胰酶消化后各個片段的預(yù)計相對分子質(zhì)量的數(shù)據(jù)庫，計算機通過比較數(shù)據(jù)庫與檢測到的多肽片段的分子質(zhì)量來確認最可能的初始蛋白質(zhì)?，F(xiàn)在是64頁\一共有81頁\編輯于星期四質(zhì)量/電荷比多肽通過來自激光的脈沖能量被電離化柱腔現(xiàn)在是65頁\一共有81頁\編輯于星期四質(zhì)量/電荷比波譜數(shù)據(jù)計算機通過比較數(shù)據(jù)庫與檢測到的多肽質(zhì)量來確認最可能的初始蛋白質(zhì)。現(xiàn)在是66頁\一共有81頁\編輯于星期四4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法B.蛋白質(zhì)印跡法（Western雜交）Western雜交是將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測定融為一體的特異性蛋白質(zhì)的檢測方法。其原理是：生物中含有一定量的目標(biāo)蛋白。先從生物細胞中提取總蛋白或目標(biāo)蛋白，將蛋白質(zhì)樣品溶解于含有去污劑和還原劑的溶液中，經(jīng)SDS電泳將蛋白質(zhì)按分子量大小分離，再把分離的各蛋白質(zhì)條帶原位轉(zhuǎn)移到固相膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上，接著將膜浸泡在高濃度的蛋白質(zhì)溶液中溫育，以封閉其非特異性位點?，F(xiàn)在是67頁\一共有81頁\編輯于星期四4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法B.蛋白質(zhì)印跡法（Western雜交）然后加入特異性抗體（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）與一抗結(jié)合后，再加入能與一抗專一性結(jié)合的帶標(biāo)記的二抗（通常一抗用兔來源的抗體時，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗體），最后通過二抗上帶標(biāo)記化合物（一般為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶，或用同位素或生物素標(biāo)記）的特異性反應(yīng)進行檢測。根據(jù)檢測結(jié)果，從而可得知被檢生物細胞內(nèi)目的蛋白的表達與否、表達量及分子量等情況。現(xiàn)在是68頁\一共有81頁\編輯于星期四Westernblotting電泳印跡現(xiàn)在是69頁\一共有81頁\編輯于星期四4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法C.鑒定與某一蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)通過鑒定有相互作用的成對或成組的蛋白質(zhì)能夠獲得基因組活性相關(guān)的重要數(shù)據(jù)。構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用圖譜被視為是連接蛋白質(zhì)組學(xué)與細胞生物化學(xué)過程的一個重要步驟?，F(xiàn)在是70頁\一共有81頁\編輯于星期四4.3

蛋白質(zhì)組研究的方法C.鑒定與某一蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)a.噬菌體展示該技術(shù)采用了一種基于噬菌體或某種絲狀噬菌體的獨特的克隆載體。待測基因被插入