微生物的生長繁殖

微生物的生長繁殖第1頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四生長和繁殖統(tǒng)稱為發(fā)育，發(fā)育是一個復雜的生命活動。當微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)后，通過合成代謝作用，合成新的細胞成分，使菌體的重量增加(主要是原生質(zhì)和其他組成成分有規(guī)律地增加)，菌體體積長大，這種現(xiàn)象稱為生長。細胞的生長是有限度的，當細胞增長到一定程度時就開始分裂，這種菌體數(shù)量增多的現(xiàn)象稱為繁殖。生長是繁殖的基礎(chǔ)，繁殖是生長的結(jié)果。生長和繁殖雖有區(qū)別，但關(guān)系十分密切。微生物群體在生長過程中，個體的細胞體積和重量變化不易被察覺，所以，常以細胞數(shù)量的增加或以細胞群體重量的增加作為生長繁殖的指標。第2頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四3生長：生物個體物質(zhì)有規(guī)律地、不可逆增加，導致個體體積擴大的生物學過程。繁殖：生物個體生長到一定階段，通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體，即引起生命個體數(shù)量增加的生物學過程。

第3頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四4第4頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四5微生物生長：在一定時間和條件下細胞數(shù)量的增加（微生物群體生長），在微生物學中提到的“生長”，一般均指群體生長，這一點與研究大生物時有所不同。微生物生長：單位時間里微生物數(shù)量或生物量的變化。

第5頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四第一節(jié)微生物純培養(yǎng)的生長

微生物學中將在實驗室條件下，從一個細胞或一種細胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng)。相對應的稱為不純培養(yǎng)物。純培養(yǎng)的分離方法稀釋倒平皿法將待分離的材料作一系列稀釋(如1:10、1:100、1:1000、1:10000…)，取不同稀釋液各少許與已熔化并冷卻至45℃的瓊脂培養(yǎng)基相混合，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，保溫培養(yǎng)一定時間，第6頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長即有菌落出現(xiàn)。如果稀釋得當，平皿中出現(xiàn)分散的單個菌落便可能是由一個細菌繁殖所形成。挑取此單個菌落或再重復以上操作數(shù)次，可得到純培養(yǎng)。第7頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長劃線法

將熔化的瓊脂培養(yǎng)基傾入無菌培養(yǎng)皿中，冷凝后，用接種環(huán)蘸取少許待分離材料，在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，如，可作平行劃線、扇形劃線或其他形式連續(xù)劃線，隨著接種環(huán)在培養(yǎng)基上的移動，細菌得以分散，經(jīng)保溫培養(yǎng)即形成菌落。在劃線的開始部分，細菌分散度小，形成菌落往往連在一起。但由于連續(xù)劃線，細菌逐漸減少，劃到最后?？尚纬蓡为毠铝⒌木?。第8頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長這種單獨的菌落可能是由單個細胞形成的，因而獲得純培養(yǎng)。用其他工具如形玻棒代替接種環(huán)在瓊脂培養(yǎng)基表面涂布，亦可得到同樣結(jié)果。第9頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長單細胞挑取法單細胞挑取法是從待分離材料中只挑取一個細胞來培養(yǎng)?？捎靡慌_顯微挑取器，裝置于顯微鏡上，把一滴細菌懸浮液置于載玻片上，用裝于顯微挑取器上的極細的毛細吸管，在顯微鏡下對準一個單獨的細菌細胞挑取，再接種于培養(yǎng)基上培養(yǎng)而得純培養(yǎng)。第10頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長利用選擇培養(yǎng)基分離法不同的細菌需要不同的營養(yǎng)物。因此，可以把培養(yǎng)基配制成適合于某種細菌生長而限制其他細菌生長的環(huán)境。這樣的選擇培養(yǎng)基可用來分離培養(yǎng)純種。也可以將待分離的樣品先進行適當處理，以排除不需要的微生物。例如，想分離得到芽孢細菌，可在倒平皿前將樣品在高溫處理一段時間，以破壞所有的或大部分的非芽孢細菌，這樣分離得到的菌落將是芽孢形成菌。第11頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)分離方法的比較方法應用范圍稀釋倒平皿法即可定性，又可定量，用途廣泛劃線法方法簡便，多用于分離細菌單細胞挑取法局限于高度專業(yè)化的研究利用選擇培養(yǎng)基分離法適用于分離某些生理類型較特殊的微生物第12頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四13第二節(jié)微生物的生長和測定方法1、測生長量：

（1）直接法：測體積、稱干重等方法

（2）間接法：

第13頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四A測定細胞物質(zhì)的重量采用干重法，用離心或過濾的方法將菌體從菌懸液中分離出來，洗凈，烘干，稱重，求得單位容積菌懸液中細胞的干重。這是測定細胞重量較為直接而可靠的方法，但只適用于菌體濃度較高的樣品，而且要求樣品中不含菌體以外的其他干物質(zhì)。在活性污泥法中常采用干重法來測定活性污泥的重量，以近似代表活性污泥中微生物的量，這一指標稱為活性污泥濃度(符號為MLSS)，它表示每升活性污泥混合液中活性污泥的毫克數(shù)。這種測定結(jié)果既包括活菌和死菌量，又包括有機顆粒和無機鹽類的重量，因而，這一指標隨非生物物質(zhì)含量的增加，可靠性降低。第14頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四15B比濁法：可用分光光度法對無色的微生物懸浮液進行測定或用帶有側(cè)臂的三角燒瓶作原位測定。第15頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四16C生理指標法：如測含氮量：一般細菌的含氮量為其干重的14%，酵母菌為7.5%，霉菌為6.5%，含氮量乘以6.25即為粗蛋白含量。測含碳量以及測磷、DNA、RNA、ATP、DAP（二氨基庚二酸）、幾丁質(zhì)或N－乙酰胞壁酸等含量的；產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、耗氧、粘度和產(chǎn)熱等指標，有時也應用于生長量的測定。

第16頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物純培養(yǎng)的生長DNA含量測定法

由于DNA在細胞生長中起重要作用，所以，測定DNA的含量也是研究微生物生長的一種重要的化學測定方法。DNA的測定不但可以反映細胞物質(zhì)的重量，并且由于每個細菌細胞中DNA含量對于某類群微生物來說較恒定(平均為8.4×10-5ｍｇ)，所以，通過測定細菌的DNA還可推算出細菌細胞的數(shù)量。此外，還可采用測定ATP的方法，但由于細胞內(nèi)ATP含量隨發(fā)育階段的不同而變化較大，因而，用于反映微生物量不如DNA佳。第17頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四182、計繁殖數(shù)：細菌酵母菌放線菌和霉菌孢子數(shù)

（1）直接法：指用計數(shù)板（例如血球計數(shù)板）在光學顯微鏡下直接觀察細胞并進行計數(shù)的方法。第18頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四19A平板菌落計數(shù)法：（2）間接法（菌落計數(shù)法）

：第19頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四20采用培養(yǎng)平板計數(shù)法要求：每一活微生物單細胞在培養(yǎng)平板上培養(yǎng)后，形成一個單菌落，在科研中一般用菌落形成單位（colonyformingunits，CFU）來表示，而不是直接表示為細胞數(shù)。技術(shù)要求高，煩瑣。第20頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四第二節(jié)微生物純培養(yǎng)的生長規(guī)律細菌純培養(yǎng)的生長曲線

研究細菌純培養(yǎng)的生長曲線是采用分批培養(yǎng)，或稱為間歇培養(yǎng)(batchculture)。分批培養(yǎng)就是在一定體積的液體培養(yǎng)基中接種少量細菌并保持一定的條件(如溫度、pH、溶解氧等)進行培養(yǎng)，結(jié)果出現(xiàn)了細菌數(shù)量由少到多，并達到高峰，又由多變少的變化規(guī)律。測定生長曲線時，將少量經(jīng)純培養(yǎng)的細菌接種到經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，定時取樣測定細菌數(shù)量。以細菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標，生長時間為橫坐標，可得圖所示的曲線。第21頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四22一、單細胞微生物的典型生長曲線

純種單細胞微生物接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中，定時測定菌體數(shù)量，以活菌數(shù)對數(shù)為縱坐標，以時間為橫坐標繪圖所得到的曲線，稱為生長曲線。

整個典型生長曲線可分為四個時期：延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。

第22頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四第23頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四241、遲緩期

表現(xiàn)：不立即繁殖，菌數(shù)幾乎不變，細胞形態(tài)變大。

特點：生長速率常數(shù)為0，分裂遲緩，合成代謝活躍，體積增長快，細胞內(nèi)RNA含量增高，對外界不良環(huán)境敏感，合成各種新的酶系和中間代謝產(chǎn)物。影響延滯期長短的因素：菌種接種齡接種量培養(yǎng)基成分第24頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四25(1)通過遺傳學方法改變種的遺傳特性使遲緩期縮短；(2)利用對數(shù)生長期的細胞作為種子；(3)盡量使接種前后所使用的培養(yǎng)基組成不要相差太大；(4)適當擴大接種量在生產(chǎn)實踐中縮短遲緩期的常用手段：第25頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物的生長曲線對數(shù)期(logphase)

遲緩期末，細胞開始出現(xiàn)分裂，培養(yǎng)液中的菌數(shù)增加，進入對數(shù)期。在此時期，以細菌數(shù)的對數(shù)與培養(yǎng)時間做圖則成一直線。對數(shù)期細菌按幾何級數(shù)增加，1→2→4→8→…，即20→21→22→23→…2n。每分裂一次為一個世代，每經(jīng)過一個世代，群體數(shù)目增加一倍?？梢?，細菌的群體生長是按指數(shù)速率進行的，因而亦稱做指數(shù)增長。細菌群體的這種指數(shù)增長可用以下方程式表示第26頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四微生物的生長曲線細菌群體的這種指數(shù)增長可用以下方程式表示：Ｘ2=Ｘ1·2ｎ式中：Ｘ1、Ｘ2——分別為時間ｔ1和ｔ2時刻的細胞數(shù)；ｎ——世代數(shù)。世代時間是由遺傳性決定的，不同菌種對數(shù)期的世代時間不同，同一菌種的世代時間受培養(yǎng)基組成及物理環(huán)境的影響也不同。對數(shù)期細菌的生長速度達到高潮，世代時間最短，細胞的代謝活性比較穩(wěn)定，酶的活力也高。這個時期的細胞是作為研究工作的理想材料。第27頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四282、指數(shù)期：在生長曲線中，細胞數(shù)以幾何級數(shù)增長的時期。

表現(xiàn)：代謝活性最強，幾何級數(shù)增加，代時最短，生長速率最大。

特點：細菌數(shù)目增加與原生質(zhì)總量增加，與菌液濁度增加呈正相關(guān)性。

代時：單個細胞完成一次分裂所需時間，亦即增加一代所需時間。

倍增時間：原生質(zhì)增加一倍所需的時間

第28頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四29影響微生物增代時間（代時）的因素：1）菌種，不同的微生物及微生物的不同菌株代時不同；2）營養(yǎng)成分，在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中生長代時短；3）營養(yǎng)物濃度，在一定范圍內(nèi)，生長速率與營養(yǎng)物濃度呈正比；凡是處于較低濃度范圍內(nèi)，可影響生長速率的營養(yǎng)物成分，就稱為生長限制因子。4）溫度，在一定范圍，生長速率與培養(yǎng)溫度呈正相關(guān)。

第29頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四30大腸桿菌在不同溫度下的代時溫度（℃）代時（min）溫度（℃）代時（min）101520253086012090402935404547.52217.52077第30頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四313、穩(wěn)定期

表現(xiàn)：新增殖細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等，活菌數(shù)動態(tài)平衡。特點：生長速率又趨于0，細胞總數(shù)最高。合成各類次生代謝物。原因：養(yǎng)分減少；營養(yǎng)物比例失調(diào)，有毒代謝物產(chǎn)生，培養(yǎng)環(huán)境條件中pH和氧化還原電位等對細菌生長不利。第31頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四32應用意義：1）發(fā)酵生產(chǎn)形成的重要時期（維生素、氨基酸等），生產(chǎn)上應盡量延長此期，提高產(chǎn)量，措施如下：補充營養(yǎng)物質(zhì)（補料）調(diào)pH調(diào)整溫度2）穩(wěn)定期細胞數(shù)目及產(chǎn)物積累達到最高。第32頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四334、衰亡期

表現(xiàn)：出現(xiàn)“負生長”，有些細胞開始自溶。

衰亡期特點：細菌代謝活性降低，細菌衰老并出現(xiàn)自溶，產(chǎn)生或釋放出一些產(chǎn)物，如氨基酸、轉(zhuǎn)化酶、外肽酶或抗生素等。細胞呈現(xiàn)多種形態(tài)，有時產(chǎn)生畸形，細胞大小懸殊，有些革蘭氏染色反應陽性菌變成陰性反應等。第33頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四34二、微生物的連續(xù)培養(yǎng)

連續(xù)培養(yǎng)（continuousculture）：指在微生物的整個培養(yǎng)期間，通過一定的方式使微生物能以恒定的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法。又稱開放培養(yǎng)，是相對單批培養(yǎng)、封閉培養(yǎng)而言的。

單批培養(yǎng)（batchculture）或封閉培養(yǎng)（closedculture）：指將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中，經(jīng)過培養(yǎng)生長，最后一次收獲。典型生長曲線。第34頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四35

單批培養(yǎng)（封閉培養(yǎng)）：培養(yǎng)基一次加入，不予補充，不再更換。

連續(xù)培養(yǎng)：在培養(yǎng)過程中不斷的補充營養(yǎng)物質(zhì)和以同樣的速率移出培養(yǎng)物才能實現(xiàn)微生物連續(xù)培養(yǎng)。

第35頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四36連續(xù)培養(yǎng)器按控制方式分按培養(yǎng)器的級數(shù)分按細胞狀態(tài)分按用途分內(nèi)控制（控制菌體密度）：恒濁器外控制（控制培養(yǎng)液流速、以控制生長速率）：恒化器單級連續(xù)培養(yǎng)器多級連續(xù)培養(yǎng)器一般連續(xù)培養(yǎng)器固定化細胞連續(xù)培養(yǎng)器實驗室科研用：連續(xù)培養(yǎng)器發(fā)酵生產(chǎn)用：連續(xù)發(fā)酵罐連續(xù)培養(yǎng)器的類型第36頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四37概念：是一種根據(jù)培養(yǎng)器內(nèi)微生物的生長密度，并借光電控制系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液流速，以取得菌體密度高、生長速度恒定的微生物細胞的連續(xù)培養(yǎng)器。原理：通過調(diào)節(jié)新鮮培養(yǎng)基流入的速度和培養(yǎng)物流出的速度來維持菌濃度不變,即濁度不變。主要采用恒濁器，當濁度高時，使新鮮培養(yǎng)基的流速加快，濁度降低，則減慢培養(yǎng)基的流速。特點：基質(zhì)過量，微生物始終以最高速率進行生長，并可在允許范圍內(nèi)控制不同的菌體密度；但工藝復雜，煩瑣。1、連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)——恒濁培養(yǎng)使用范圍：用于生產(chǎn)大量菌體、生產(chǎn)與菌體生長相平行的某些代謝產(chǎn)物，如乳酸、乙醇等。第37頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四38恒濁連續(xù)培養(yǎng)測定所培養(yǎng)微生物的光密度值自動調(diào)節(jié)新鮮培養(yǎng)基流入和培養(yǎng)物流出培養(yǎng)室的流速使培養(yǎng)物維持在某一恒定濁度當培養(yǎng)室中的濁度超過預期數(shù)值時，流速加快，使?jié)岫冉档?；當培養(yǎng)室中的濁度低于預期數(shù)值時，流速減慢，使?jié)岫壬?；恒濁培養(yǎng)器的工作精度是由光電控制系統(tǒng)的靈敏度來決定的如果所用培養(yǎng)基中有過量的必需營養(yǎng)物，就可以使菌體維持最高的生長速率。第38頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四39一般用于菌體以及與菌體生長平行的代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的發(fā)酵工業(yè)使用范圍：用于生產(chǎn)大量菌體、生產(chǎn)與菌體生長相平行的某些代謝產(chǎn)物，如乳酸、乙醇等。第39頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四402、連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)——恒化連續(xù)培養(yǎng)概念：以恒定流速使營養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定而保持細菌生長速率恒定的方法。原理：通過控制某一種營養(yǎng)物濃度（如碳、氮源、生長因子等），使其始終成為生長限制因子，而達到控制培養(yǎng)液流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長速率條件下進行生長繁殖。特點：維持營養(yǎng)成分的亞適量，控制微生物生長速率。菌體生長速率恒定，菌體均一、密度穩(wěn)定，產(chǎn)量低于最高菌體產(chǎn)量。應用范圍：實驗室科學研究第40頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四41恒化連續(xù)培養(yǎng)：使培養(yǎng)液流速保持不變，并使微生物始終在低于其最高生長速率下進行生長繁殖。第41頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四42裝置控制對象培養(yǎng)基培養(yǎng)基流速生長速率產(chǎn)物應用范圍恒濁器菌體密度（內(nèi)控制）無限制生長因子不恒定最高大量菌體或與菌體形成相平行的產(chǎn)物生產(chǎn)為主恒化器培養(yǎng)基流速（外控制）有限制生長因子恒定低于最高不同生長速率的菌體實驗室為主恒濁器與恒化器的比較第42頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四43連續(xù)發(fā)酵與單批發(fā)酵相比的優(yōu)點：①可人為控制微生物的生長速率；②生長參數(shù)看進行外部測定，易于實現(xiàn)生產(chǎn)流程的自動化；③縮短培養(yǎng)時間

第43頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四44三、微生物的同步生長細菌的同步生長

同步培養(yǎng)：使群體中的細胞處于比較一致的，生長發(fā)育均處于同一階段上，即大多數(shù)細胞能同時進行生長或分裂的培養(yǎng)方法。

同步生長：以同步培養(yǎng)方法使細胞群體中各個體處于分裂步調(diào)一致的生長狀態(tài)。第44頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四45通過同步培養(yǎng)方法獲得的細胞被稱為同步細胞或同步培養(yǎng)物。由于細胞的個體差異，同步生長往往只能維持2-3個世代，隨后又逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殡S機生長。

第45頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四（一）篩選法1.過濾法2.區(qū)帶密度梯度離心法3.膜洗脫法第46頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四（二）誘導法1.溫度調(diào)整法2.營養(yǎng)條件調(diào)整法3.用穩(wěn)定期的培養(yǎng)物接種法第47頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四活性污泥增長曲線在廢水生物處理中，為了描述活性污泥中微生物的生長，常采用間歇培養(yǎng)法獲得圖所示的曲線?；钚晕勰嘀械奈⑸锓N類繁多，不僅包括細菌，而且還含有原生動物和后生動物等微生物，因此，不是純培養(yǎng)的生長曲線，但曲線形式與純培養(yǎng)的類似?；钚晕勰嘣鲩L曲線可以分為三個時期：對數(shù)生長期、減速生長期和內(nèi)源呼吸期。四、微生物的生長曲線第48頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四對數(shù)生長期

此期，微生物處在營養(yǎng)物質(zhì)過剩的環(huán)境中，微生物以最大的速率氧化分解廢水中的有機物，并合成新的細胞物質(zhì)，因此，微生物迅速增長。這一時期相當于純培養(yǎng)生長曲線中的對數(shù)期。在此期間，活性污泥微生物具有很高的能量水平，因而不能形成良好的活性污泥絮凝體。

微生物的生長曲線第49頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四在對數(shù)生長期，活性污泥微生物的增長速率一般可用下式表示：式中：X——ｔ時刻揮發(fā)性活性污泥濃度(MLVSS)，(也可由活性污泥濃度MLVSS代替)；K1——揮發(fā)性活性污泥的增長速度常數(shù)。微生物的生長曲線第50頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四減速生長期此期營養(yǎng)物質(zhì)不再過剩，而且成為微生物進一步生長的限制因素?？茖W實驗表明，此時有機底物的去除率與存在的有機底物濃度成正比。式中：S——某一時間ｔ時的有機底物濃度；K2——有機底物降解常數(shù)。微生物的生長曲線第51頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四內(nèi)源呼吸期此時營養(yǎng)物質(zhì)近乎耗盡，所以活性污泥微生物靠內(nèi)源呼吸維持生命活動，并使活性污泥量減少。由于能量水平低，絮凝體形成速率增加，吸附有機物的能力顯著，但污泥活性降低。值得提出的是活性污泥內(nèi)源呼吸過程不只出現(xiàn)在內(nèi)源呼吸期，在前兩期中都不同程度地存在，只是在內(nèi)源呼吸期表現(xiàn)得更為明顯。微生物的生長曲線第52頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四內(nèi)源呼吸期活性污泥的增長量可表示為：式中：Ｋ3—揮發(fā)性活性污泥內(nèi)源呼吸速度常數(shù)。在實際中常將活性污泥控制在減速生長末期和內(nèi)源呼吸初期。而高負荷活性污泥處理法是利用微生物生長的對數(shù)期；延時曝氣法是利用微生物生長的衰亡期，因有機物濃度低，故延長曝氣時間，以增大進水流量達到提高有機負荷的目的。微生物的生長曲線第53頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四54第四節(jié)有害微生物的控制*

一、基本概念：

控制（有害）微生物的生長速率或消滅不需要的微生物，在實際應用中具有重要的意義。第54頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四551、滅菌(Sterilization)：用理化因素殺死包括芽孢在內(nèi)的所有微生物。

2．消毒(Disinfection)：殺死或滅活病原微生物（營養(yǎng)體細胞）。

3．防腐(Antisepsis)：防止或抑制霉腐微生物在食品等物質(zhì)上的生長。方法：低溫缺氧干燥高滲高酸度高醇度加防腐劑

4．化療(Chemotherapy)：利用高度選擇毒力的化學物質(zhì)殺死或抑制宿主體內(nèi)的病原微生物生長繁殖，借以治療該宿主傳染病的措施。第55頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四56二、物理殺菌因素溫度輻射作用過濾滲透壓干燥超聲波等高溫使蛋白質(zhì)、核酸等重要生物大分子發(fā)生變性、破壞，以及破壞細胞膜上的類脂成分，導致微生物死亡。第56頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四57第三節(jié)微生物生長繁殖的控制二、控制微生物的物理因素（一）溫度1、干熱滅菌烘箱內(nèi)熱空氣滅菌火焰灼燒干熱滅菌160℃，2小時第57頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四582、濕熱滅菌濕熱比干熱滅菌更好：更易于傳遞熱量；更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu)；濕熱對一般營養(yǎng)體和孢子的殺滅條件：多數(shù)細菌和真菌的營養(yǎng)細胞：在60℃左右處理5-10分鐘；酵母菌和真菌的孢子：用80℃以上溫度處理；細菌的芽孢：121℃處理15分鐘以上；第58頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四59高壓蒸汽滅菌法（常規(guī)高壓滅菌）利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升，以達到100℃以上高溫滅菌的方法。方法：121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）維持15-20min。112℃（0.5kg/cm2或8磅/英寸2）20-30min。115℃（0.75kg/cm2或11磅/英寸2）20-30min。應根據(jù)滅菌物品的性質(zhì)或成分選擇滅菌溫度例如：生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂等培養(yǎng)基用121℃。含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培養(yǎng)基用112℃。適用：耐高溫物品，玻璃儀器、含水或不含水的物品。第59頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四60高壓蒸汽滅菌鍋注意事項：排凈冷空氣；滅菌終了，緩慢降壓。第60頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四61影響加壓蒸汽滅菌效果的因素菌量滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度pH滅菌對象的體積加熱與散熱速度第61頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四62高溫對培養(yǎng)基的影響及其防止措施消除有害影響的措施采用特殊的加熱滅菌法過濾除菌法其它方法：加入螯合劑第62頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四63采用濾孔比細菌還小的篩子或濾膜作成各種過濾器，當空氣或液體流經(jīng)篩子或濾膜時，微生物不能通過濾孔而被阻留在一側(cè)，從而達到滅菌的目的。但不能除去病毒。實驗室中常用的濾器：濾膜過濾器、蔡氏過濾器、玻璃過濾器、磁土過濾器等。過濾介質(zhì)：醋酸纖維素膜、硝酸纖維素膜、聚丙烯膜；以及石棉板、燒結(jié)陶瓷、燒結(jié)玻璃等。濾器孔徑：常用0.22μm、0.45μm

。應用：對于含酶、血清、維生素和氨基酸等熱敏物質(zhì)除菌。（二）過濾除菌法第63頁，共69頁，2023年，2月20日，星期四64（二）過濾作用空氣和