生物化學(xué)實驗食品課件

生物化學(xué)實驗生物化學(xué)實驗內(nèi)容1、醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)2、雙縮脲測定蛋白質(zhì)的含量3、血液葡萄糖的測定4、牛乳酪蛋白提取與鑒定5、維生素C的提取與含量的測定6、琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制7、酶的基本性質(zhì)要求：課前預(yù)習(xí)，試驗中做記錄，課后寫實驗報告。兩人一組，離開實驗室時簽字。實驗一血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳一、目的：了解電泳技術(shù)基本原理，掌握醋酸纖維薄膜電泳操作技術(shù)。二、原理：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，在非等電點狀態(tài)下在電場中會向一定電極移動。在堿性條件下多數(shù)蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動，不同蛋白質(zhì)由于大小、所帶電荷及形狀不同，在電場中的遷移率不同，經(jīng)過電泳可將其分開，結(jié)果經(jīng)染色、漂洗，得電泳圖譜。材料：血清電泳裝置點樣三、實驗步驟1、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（已制好）2、樣品測定編號123豆粉（g）00.10000.1000碳酸銅（g）1.001.001.00無水乙醇（ml）2020.0020.0010%KOH（ml）2020.0020.00振蕩10min，靜置片刻，將上清過濾后580nm測定吸光值OD540標(biāo)線上查出的Pr的量3、結(jié)果計算

×100=豆粉（g）樣品蛋白質(zhì)含量（%）標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得蛋白質(zhì)含量（g）實驗三血液葡萄糖的測定

一、實驗?zāi)康?/p>

學(xué)習(xí)和掌握Folin-吳憲法測定血糖的方法二、實驗原理G＋Cu2+堿性氧化亞銅磷鉬酸

＋鉬藍(lán)

420nm處有大吸收峰

測定管光密度100

×0.2×=葡萄糖mg/100ml

標(biāo)準(zhǔn)管光密度0.1高標(biāo)準(zhǔn)管：低標(biāo)準(zhǔn)管：

×0.1×=葡萄糖mg/100ml

標(biāo)準(zhǔn)管光密度0.1測定管光密度100四、計算實驗四牛奶中蛋白質(zhì)的提取與鑒定

一、實驗?zāi)康?/p>

學(xué)習(xí)從牛奶中制備酪蛋白的方法并進(jìn)行鑒定試驗二、實驗原理

蛋白質(zhì)等電點沉淀三、實驗步驟1、酪蛋白的制備鮮牛乳3Oml（40℃）+3Om醋酸緩沖液（40℃）邊加邊搖動離心3000r/5min冷卻至室溫，繼續(xù)放置5分鐘清液（乳清）沉淀加熱觀察現(xiàn)象

醇醚混合物洗2次沉淀清液晾干，鑒定棄掉

2.米倫反應(yīng)：

少許酪蛋白+lmlH2O+米倫試劑10滴，振搖，加熱觀察其顏色變化3.含硫(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)測定:少量酪蛋白+lmlO.1MNaOH+5%醋酸鉛1-3滴

觀察現(xiàn)象煮沸實驗五維生素C的定量測定

（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

一、實驗?zāi)康恼莆盏味ǚy定Vc含量的原理和操作。二、實驗原理

三、實驗步驟1.提取:2.0克松針（2份）+少量2%草酸

勻漿過濾后用2%草酸定容到50毫升（也可先定容后過濾或離心）2、滴定（1）標(biāo)定染料（標(biāo)準(zhǔn)維生素C液滴定）：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液10毫升（含1.0毫克維生素C）置100毫升錐形瓶中，用微量滴定管以0.1%2，6一二氯酚靛酚滴至淡紅色出現(xiàn)，15秒鐘不退色即為滴定終點。記錄所用染料體積計算出1毫升染料相當(dāng)于多少毫克維生素C（K值），即1/染料ml。(2)樣液滴定:準(zhǔn)確吸取濾液10毫升放人100毫升錐形瓶內(nèi)，滴定方法同前(做兩次平行試驗)，記錄染料體積。(3)空白液滴定：準(zhǔn)確吸取10毫升2%草酸溶液，放入100毫升錐形瓶中，用上述方法滴定至終點，記錄所用染料體積。（滴定過程宜迅速，一般不超過2分鐘）X=（V1－V2）×K×VW×V3×100X：100克樣品所含維生素C毫克數(shù)W：稱取樣品毫克數(shù)V1：滴定樣品所用染料毫升數(shù)V2：滴定空白所用染料毫升數(shù)V3：樣品測定時所用濾液毫升數(shù)（即10毫升）V：樣品提取液稀釋至總體積（即50毫升）K：1毫升染料所能氧化維生素C之毫克數(shù)，可由標(biāo)定算出3、計算實驗六琥珀酸脫氫酶的作用及其競爭性抑制的觀察一、實驗?zāi)康牧私忡晁崦摎涿傅淖饔眉捌涓偁幮砸种苿ζ浠钚缘囊种?。二、實驗原理甲烯?/p>

琥珀酸脫氫酶延胡索酸琥珀酸甲烯藍(lán)

NAD+NADH無氧丙二酸－三、實驗步驟1、酶的制備豬心1.5～2g+1/15M磷酸氫二鈉溶液3～4ml勻漿1/15M磷酸氫二鈉溶液6～7ml，放置30min2000r/min離心10min，取上清備用。試管號心臟提取液（滴）1.5%琥珀酸鈉（滴）1%丙二酸鈉（滴）蒸餾水（滴）0.02%甲烯藍(lán)（滴）現(xiàn)象155——25225（煮沸）5——252355520245255——2

加好混勻，立即在各管中加入一層（約8滴）液體石蠟油，置37度恒溫水浴保溫30分，觀察各管顏色變化，分析原因。然后用力振搖1號管，觀察變化記錄并解釋。2、酶促反應(yīng)實驗一、溫度、pH及酶的激活劑、抑制劑對酶活性的影響一、目的：了解酶催化的特異性以及pH、溫度、抑制劑和激活劑對酶活力的影響

二、實驗原理

以唾液淀粉酶為例，觀察溫度、pH、激活劑和抑制劑對其活性的影響。唾液淀粉酶可水解淀粉生成糊精、麥芽糖、葡萄糖等物質(zhì)。淀粉遇碘呈呈藍(lán)色。糊精按分子從大到小的順序，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色;最小的糊精和麥芽糖遇碘不呈現(xiàn)顏色反應(yīng)。酶具有極高的催化效率，過氧化氫酶比鐵粉的催化效率高出許多倍。三、操作步驟（一）溫度對酶活性的影響（唾液淀粉酶的制備：取漱口水0.5Ml，稀釋至50ml，以下簡稱酶液）1、取3支試管，編號后按下表操作2、在比色板上，置碘液2滴于各孔中，每隔1分鐘，從第二管中取出反應(yīng)液1滴與碘混合，觀察顏色變化。3、待第二管中反應(yīng)液遇碘不發(fā)生顏色變化時，向各管中加入碘液1滴，搖勻，觀察并記錄各管顏色，做出解釋。試管號0.5%淀粉溶液稀釋酶液溫度（10min)現(xiàn)象1235ml5ml5ml1ml1ml1ml0℃水浴37℃水浴沸水浴管號1230.5%淀粉222

pHpH5.02pH6.82pH8.22稀釋唾液（滴）101010現(xiàn)象

二、pH對酶活性的影響取試管5支，編號，按下表操作。

搖勻，37℃水浴中保溫。每隔l分鐘從pH6.8的管中（2號）取出1滴于白瓷板上，加碘液1滴，觀察淀粉水解的程度。待顏色不變時，向各管中加碘液1-3滴。觀察顏色，比較水解程度，做出解釋。三、酶的激活劑、抑制劑對酶活性的影響（氯離子是唾液淀粉酶的激活劑，銅離子是抑制劑）：取小試管3支，按表操作試管號0.5%淀粉1%CuSO40.5%NaCl蒸餾水稀釋唾液結(jié)果1232ml2ml2ml1ml0001ml0001ml1ml1ml1ml

將3支試管放入37℃水浴中，在比色板上用碘液檢查第2管，待不變色時向各管中加碘液1滴，記錄顏色并解釋。四、酶的高效性酶具有極高的催化效率，比普通催化劑活性高出很多倍。過氧化氫酶能催化過氧化氫分解為二氧化碳和水，鐵粉也能催化此反應(yīng)，但二者的催化效率有很大差距。取小試管4支，編號，按下表操作。試管號12342%H2O2（ml）3333生馬鈴薯少許熟馬鈴薯少許鐵粉少許現(xiàn)象解釋恒溫水浴鍋電磁爐水浴鍋電子天平需冷藏、冷凍試劑和材料放在冰