放線菌酵母菌霉菌的觀察及微生物大小的測量

放線菌酵母菌霉菌的觀察及微生物大小的測量第1頁/共24頁實驗三.放線菌、酵母菌、霉菌的觀察及微生物大小的測量一、實驗?zāi)康模赫莆杖愇⑸锏幕拘螒B(tài)掌握酵母菌的染色法及霉菌的一般染色法學(xué)會用測微尺測量微生物的大小第2頁/共24頁二、實驗原理1）放線菌的形態(tài)觀察：第3頁/共24頁放線菌的觀察方法：插片法將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后進(jìn)行培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。玻璃紙法將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。印片法將要觀察的放線菌的菌落或菌苔先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。第4頁/共24頁螺旋型孢子絲直型孢子絲第5頁/共24頁單輪生螺旋狀

放線菌孢子絲的光學(xué)顯微鏡圖片第6頁/共24頁2）酵母菌死、活細(xì)胞的鑒定及形態(tài)觀察：用美蘭制水浸片，美蘭為一種無毒性材料活細(xì)胞有較強(qiáng)還原力將美蘭還原為無色死細(xì)胞無還原力不能還原美蘭藍(lán)色染色結(jié)束時活細(xì)胞無色，死細(xì)胞藍(lán)色。氧化型藍(lán)色還原型無色第7頁/共24頁曲霉的分生孢子梗和頂囊上的分生孢子3）霉菌的形態(tài)觀察第8頁/共24頁曲霉的足細(xì)胞第9頁/共24頁青霉的掃帚狀分生孢子第10頁/共24頁根霉匐匍枝(菌絲)孢子囊囊軸假根囊托孢囊孢子第11頁/共24頁霉菌的靜孢子

左：毛霉的孢子囊；中：孢子囊壁破裂，露出靜孢子；右：囊軸

第12頁/共24頁乳酚油具有固定、染色、保持水分、殺菌防腐作用，因此制成的片子細(xì)胞不變形，孢子不宜飛散，保存時間較長。采用乳酸、石碳酸、棉蘭染液（乳酚油）染色。霉菌形態(tài)觀察的方法：第13頁/共24頁4）微生物大小測量：采用鏡臺、目鏡兩種測微尺進(jìn)行測量鏡臺測微尺：是一塊特殊的載玻片，中央刻有精確刻度（1mm分成100個小格），用于校正目鏡測微尺。第14頁/共24頁目鏡測微尺：是一圓形玻片，其上有精確刻度（50-200），經(jīng)校正后用來測量。第15頁/共24頁三、實驗材料酵母菌（培養(yǎng)36h左右）、根霉、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、顯微鏡、接種環(huán)、接種針、蓋玻片等第16頁/共24頁四、實驗步驟1.觀察放線菌、青霉和曲霉的預(yù)裝片（示范）2.酵母菌片子制作取一干凈載玻片，滴一滴美蘭染液無菌操作，取少量菌種與染液混勻小心蓋上蓋玻片，吸去多余染液，靜置3min，備用觀察3.根霉水壓片的制作取一干凈載玻片，滴一滴乳酚油用接種針挑取少量帶孢子的菌種置于染液中蓋上蓋玻片，備用觀察第17頁/共24頁4.微生物大小測量及酵母菌、根霉形狀觀察1）校正目鏡測微尺取出目鏡，將透鏡旋下，將目鏡測微尺刻度朝下放在目鏡鏡筒內(nèi)的隔板上，然后旋上透鏡插入目鏡筒內(nèi)。將鏡臺測微尺有刻度的一面朝上，放在載物臺上。先用低倍鏡觀察，調(diào)節(jié)使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，找出兩尺的兩條刻度線完全重合的區(qū)域。記錄兩重合區(qū)間目鏡與鏡臺測微尺分別占的格數(shù)換成高倍鏡。用同樣方法進(jìn)行校正，并記錄數(shù)據(jù)。第18頁/共24頁目鏡測微尺每小格長度（μm）兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)×10兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)按下式計算：第19頁/共24頁16×1016×40校正示意：第20頁/共24頁2）測量：移去鏡臺測微尺，放上酵母菌片子，用目鏡測微尺測量10個菌體的長寬并記錄。3）觀察酵母菌的死活細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)及出芽情況，并繪圖。4）觀察根霉的孢子囊、假根及匍匐枝，以及用解剖鏡直接觀察根霉自然生長狀態(tài)，并繪圖。第21頁/共24頁注意事項1.取酵母菌時，接種環(huán)務(wù)必冷卻，防止?fàn)C死酵母菌。2.每人一套測微尺，小心使用，損壞賠償。第22頁/共24頁作業(yè)繪制酵母和根霉的形態(tài)圖，并標(biāo)注特殊結(jié)構(gòu)。記錄測量結(jié)果。填下表。物鏡物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)