菊花組織培養(yǎng)

菊花組織培養(yǎng)第1頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二課題背景①植物細(xì)胞或組織，發(fā)育成完整植株，需要什么條件？②什么叫植物細(xì)胞的全能性？（1）概念：具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞，具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。

１.植物細(xì)胞全能性表現(xiàn)的條件：離體、適宜營(yíng)養(yǎng)、一定比例的激素、無(wú)菌條件、適宜溫度、光照

當(dāng)植物細(xì)胞，脫離了原來(lái)所在的植物體的器官或組織，而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其它外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整植株。２.植物細(xì)胞具有全能性思考（3）過(guò)程機(jī)理：在特定條件刺激下，在特定的時(shí)間和空間里，基因（遺傳信息）選擇性地表達(dá)出了特定的結(jié)構(gòu)和功能蛋白。（2）原因：細(xì)胞內(nèi)，含有某種生物全部遺傳信息第2頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二基礎(chǔ)知識(shí)思考①植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)為什么一定需要離體條件？（一）植物組織培養(yǎng)的過(guò)程：１、細(xì)胞的分化（必修1－第117～118頁(yè)）（1）概念：在植物的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過(guò)程。

（3）機(jī)理：（2）過(guò)程：受精卵增殖、生長(zhǎng)、分化形成組織、器官、系統(tǒng)基因在特定的時(shí)間和空間里，選擇性地表達(dá)出了特定結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)。基因表達(dá)的程序，在個(gè)體發(fā)育的很早時(shí)期，就已經(jīng)預(yù)定下來(lái)，由于機(jī)體各部位間分工協(xié)作的需要，原預(yù)定程序是不可更改的。所以，在生物體內(nèi)，已經(jīng)分化的細(xì)胞是不可能表現(xiàn)出全能性的。即在個(gè)體發(fā)育的不同時(shí)期，生物體不同部位的細(xì)胞表達(dá)的基因不同，合成了不一樣的蛋白質(zhì)。第3頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（4）細(xì)胞分化的特點(diǎn)：①持久性：細(xì)胞分化是一種持久性的變化，一般來(lái)說(shuō)，分化了的細(xì)胞將一直保持分化后的狀態(tài)，直到死亡。②普遍性：由于不同生物細(xì)胞分化的機(jī)理是大致相同的，所以細(xì)胞分化現(xiàn)象，在具細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物體內(nèi)是一種普遍存在的生理現(xiàn)象。③重要性：多細(xì)胞植物體的細(xì)胞分化，是建立在有絲分裂基礎(chǔ)上的，如果只有細(xì)胞分裂，細(xì)胞彼此一樣，生物體的各部分之間，就不能進(jìn)行分工協(xié)作了。正是有了細(xì)胞分化，才使多細(xì)胞生物體中的細(xì)胞趨向?qū)ｉT化，才能提高了機(jī)體各種生理功能的效率。③全能性：多細(xì)胞植物內(nèi)已分化細(xì)胞，盡管形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能各異，但它們都由一個(gè)細(xì)胞（如受精卵）有絲分裂來(lái)的，細(xì)胞內(nèi)仍保留著某種生物的全部遺傳信息，仍具有發(fā)育成完整新個(gè)體的潛能。第4頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2、植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程離體條件下，盡管有改變細(xì)胞內(nèi)原來(lái)預(yù)定的基因選擇性表達(dá)程序的可能，但要讓離體細(xì)胞發(fā)育成完整的植株，并不容易。離體的植物組織或細(xì)胞外植體有絲分裂脫分化愈傷組織長(zhǎng)出叢芽生根移栽成活長(zhǎng)成植株再分化（1）組織培養(yǎng)程序第5頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（2）相關(guān)概念①外植體：從活植物體上切下，用于進(jìn)行離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。②愈傷組織:細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則,是高度液泡化的、呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞③脫分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫再分化。由高度分化的植物組織或細(xì)胞，產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程。④再分化：?jiǎn)?dòng)脫分化、再分化，往往需要使用植物激素，人為地進(jìn)行控制；其中細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素是關(guān)鍵激素。第6頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：1.植物材料的選擇（1）不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難（2）同一植物材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開花植株的莖上部，新萌生的側(cè)枝。（內(nèi)因）2.不同的離體組織和細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊，需配置不同的培養(yǎng)基（外因）第7頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二MS培養(yǎng)基配方（P84頁(yè)，附錄3－八）第8頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Co、I、Mo等C、有機(jī)物、植物激素MS培養(yǎng)基主要成分包括：①你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？②同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？思考微量、大量元素：提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖：提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)：主要是為了滿足離體植物細(xì)胞對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)的需求。微生物培養(yǎng)基，以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。MS培養(yǎng)基，則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。第9頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（1）常用的植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素①生長(zhǎng)素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）吲哚乙酸（IAA）

萘乙酸（NAA）吲哚丁酸（IBA）②細(xì)胞分裂素類：激動(dòng)素（KT）6－芐基嘌呤（6－BA）玉米素（ZT）③赤霉素類：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影響第10頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（2）生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素作用植物中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)的趨勢(shì)。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果同時(shí)使用先使用細(xì)胞分裂素后使用生長(zhǎng)素先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化細(xì)胞既分裂也分化分化頻率提高第11頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素>有利于根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<有利于芽的分化抑制根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素＝促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)（3）生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)使用，用量的比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響（4）pH、溫度、光照進(jìn)行菊花組織培養(yǎng)時(shí)：不同植物，對(duì)各種條件的要求往往不同。pH控制在5.8左右，溫度控制在18－22OC.每日用日光燈照射12h。第12頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二菊花組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作程序（一）制備MS固體培養(yǎng)基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養(yǎng)（五）移栽（六）栽培第13頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基配制母液→配制MS固體培養(yǎng)基→高壓蒸汽滅菌1.配制各種母液

大量元素：濃縮10倍；微量元素：濃縮100倍；二者均常溫保存激素、維生素類用量少的有機(jī)物按1mg/mL配成母液（1）一般要求

（2）配制母液的意義：①減少工作量；②減少微量試劑稱量所造成的誤差

第14頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（3）配制母液流程：稱量→溶解→混合→定容→標(biāo)記→保存（4OC）（2）配制母液的意義：①減少工作量；②減少微量試劑稱量所造成的誤差微量級(jí)分析天平微量元素大量元素有機(jī)物鐵鹽第15頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2.配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌

依次加入大量元素、微量元素、有機(jī)物、激素母液根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量將稱好的瓊脂加入800mL蒸餾水，加熱，熔化瓊脂加入30g蔗糖，攪拌均勻加蒸餾水定容到1000mL調(diào)節(jié)pH

分裝到錐形瓶中（每瓶50mL～100mL）高壓蒸汽滅菌(培養(yǎng)基+其他器械)立式高壓滅菌鍋第16頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1.選材：（二）外植體消毒2.消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2～3次，持續(xù)6～7s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗

③消毒液處理取出后用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1～2min，取出后在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液。取菊花未開花植株，莖上部生長(zhǎng)旺盛的嫩枝

要兼顧藥劑的消毒效果和外植體的耐受力幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長(zhǎng)旺盛的幼嫩組織

花藥（花粉）第17頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二進(jìn)行消毒外植體消毒液要完全浸沒(méi)外植體消毒液：70%酒精、0.1%HgCl、

10%次氯酸鈉消毒時(shí)間依據(jù)材料而定外植體第18頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（三）接種1.接種前準(zhǔn)備

污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種環(huán)境的消毒是至關(guān)重要的。如果條件允許，接種外植體，要在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，確保無(wú)菌操作。

接種前一天，用70％的酒精噴霧消毒空氣，

用酒精或新潔爾滅擦試工作臺(tái)，并用紫外線照射20分鐘。①接種室，超凈工作臺(tái)的消毒②接種前，啟動(dòng)超凈工作臺(tái)，如打開吹風(fēng)和照明燈開關(guān)等等。第19頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二③做好接種準(zhǔn)備工作在等待外植體消毒的同時(shí)，做好接種準(zhǔn)備工作：用酒精進(jìn)行桌面消毒。用酒精棉球?qū)ε囵B(yǎng)基和培養(yǎng)基瓶口進(jìn)行消毒。準(zhǔn)備無(wú)菌紙點(diǎn)燃酒精燈第20頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2.接種時(shí)的無(wú)菌操作要求接種操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。灼燒接種工具時(shí)，要注意安全第21頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二①將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶整齊地排列在酒精燈左側(cè)。②將消過(guò)毒的菊花莖段，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切成小段（長(zhǎng)約0.5～1cm）。③左手持錐形瓶，右手拉開捆扎錐形瓶的繩子，并將封口膜攥于右手心，以避免封口膜接觸瓶口的一面被污染。④左手持錐形瓶，瓶口旋轉(zhuǎn)通過(guò)火焰；右手用鑷子夾取菊花莖段插入培養(yǎng)基中（不要倒插）⑤接種后，將封口膜重新扎好⑥瓶外壁貼上標(biāo)簽：植物名稱、接種日期、姓名等3.接種過(guò)程第22頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二接種后，在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒瓶口，加蓋貼標(biāo)簽：植物名稱接種日期姓名等第23頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二【接種注意事項(xiàng)】①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和光照條件③插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基，利于吸收水分和養(yǎng)分第24頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（四）培養(yǎng)

接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度控制在18～200C，并且每日用日光燈光照12h.1、愈傷組織的培養(yǎng)2周后，培養(yǎng)基成分接近耗盡，必須更換培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng)（即分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)）.從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織需經(jīng)過(guò)2周時(shí)間。2周之內(nèi)可以看到，外植體上逐漸長(zhǎng)出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時(shí)，恒溫箱的門應(yīng)該關(guān)閉不必見光，因?yàn)樵跓o(wú)光條件下愈傷組織長(zhǎng)的更快。第25頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二愈傷組織開始分化愈傷組織培養(yǎng)室里培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)第26頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2.愈傷組織的繼代培養(yǎng)（切割、分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)）

繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)愈傷組織的相同，在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下，將愈傷組織連同原來(lái)的外植體一起移到新培養(yǎng)基上，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

繼代培養(yǎng)一代為20d。若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，因培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，外植體會(huì)分泌有毒物質(zhì)，造成自身中毒。

如果愈傷組織長(zhǎng)到直徑為1～1.5cm時(shí)，就可以進(jìn)行試管苗培養(yǎng)，否則還需進(jìn)行第二代繼代培養(yǎng).

繼代培養(yǎng)期間恒溫箱的門要打開，讓愈傷組織見光，見光后，愈傷組織顏色逐漸轉(zhuǎn)為綠色3.試管苗的培養(yǎng)愈傷組織長(zhǎng)到直徑為1～1.5cm時(shí)，更換培養(yǎng)基，進(jìn)行試管苗的見光培養(yǎng).第27頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二切割、分瓶擴(kuò)大繁殖第28頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二無(wú)菌室里超凈工作臺(tái)上的切割過(guò)程第29頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（五）移栽（練苗、移栽、栽培）在移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日.1.打開封口膜：2.清洗轉(zhuǎn)移：用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3.移栽：幼苗長(zhǎng)壯后，移栽到土壤中珍珠巖：是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。是一種天然、無(wú)毒，在高溫作用下會(huì)膨脹比較少見的礦物質(zhì)。屬于硅酸鹽。

蛭石：特點(diǎn)：固體基質(zhì)，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培練苗移栽栽培第30頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二六、煉苗、移栽移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖上的幼苗長(zhǎng)在蛭石和珍珠巖上的幼苗第31頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（六）栽培

幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花第32頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無(wú)菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無(wú)菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？第33頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒(méi)有被雜菌污染。答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。思考第34頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2.外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。練習(xí)第36頁(yè)－練習(xí)題11.植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料，體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。第36頁(yè)－練習(xí)題2第35頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二(1)培育無(wú)病毒植株4、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：(2)實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖，保持遺傳性狀的一致(3)實(shí)現(xiàn)花卉的連續(xù)生產(chǎn)，不受季節(jié)的限制因?yàn)?，植物的根尖，芽尖的分生組織，由于細(xì)胞分裂、增殖快，常常沒(méi)有病毒；以此為外植體，通過(guò)組織培養(yǎng)繁殖而的植株，一般沒(méi)有病毒。因?yàn)?，花卉組織培養(yǎng)是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，條件是可控的。第36頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二(4)培養(yǎng)紫草愈傷組織,提取紫草素（治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）(6)基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法(5)誘導(dǎo)離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)，包裹上人造種皮，制成人工種子，可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題.第37頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二三、課題延伸1、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季第38頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二此時(shí)的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境為液體有機(jī)物營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個(gè)植物體的光能自養(yǎng)在培養(yǎng)過(guò)程中，是脫分化、再分化的過(guò)程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一個(gè)個(gè)體的演變過(guò)程1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中還需要提供有機(jī)物培養(yǎng)基？2、培養(yǎng)過(guò)程中為什么需要進(jìn)行光照思考？第39頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔結(jié)合錄像外植體滅菌與接種操作，談?wù)劷M織培養(yǎng)污染的主要途徑及怎樣預(yù)防污染？第40頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第41頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二菊花的組織培養(yǎng)JLSSYBYH第42頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第43頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第44頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

菊花是菊科菊屬的多年生宿根草本植物,是我國(guó)的傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一長(zhǎng)期以來(lái)菊花采用分株、扦插等無(wú)性繁殖方法進(jìn)行繁殖但是傳統(tǒng)的繁殖方法易受環(huán)境影響,繁殖周期長(zhǎng),隨著市場(chǎng)需求的急劇增加,已經(jīng)不能滿足市場(chǎng)日益發(fā)展的需要。植物組織培養(yǎng)具有增殖效率高、繁殖速度快的特點(diǎn),可以用較短的時(shí)間和較少的空間生產(chǎn)出大量的試管苗第45頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二扦插嫁接壓條

第46頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二（四）培養(yǎng)1、愈傷組織的培養(yǎng)從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織需經(jīng)過(guò)2周時(shí)間。2周之內(nèi)可以看到外植體上逐漸長(zhǎng)出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時(shí)，恒溫箱的門應(yīng)該關(guān)閉不必見光，因?yàn)樵跓o(wú)光條件下愈傷組織長(zhǎng)的更快。2周后，培養(yǎng)基成分接近耗盡，必須更換培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng)第47頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)愈傷組織的相同，在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下，將愈傷組織連同原來(lái)的外植體一起移到新培養(yǎng)基上。愈傷組織的繼代培養(yǎng)一代為20d。如果延長(zhǎng)時(shí)間，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，外植體會(huì)分泌有毒物質(zhì)，造成自身中毒。如果愈傷組織長(zhǎng)到直徑為1－1.5cm時(shí)，就可以進(jìn)行試管苗培養(yǎng)，否則還需進(jìn)行第二代繼代培養(yǎng)2、愈傷組織的繼代培養(yǎng)在愈傷組織繼代培養(yǎng)期間，將恒溫箱的門打開，讓愈傷組織見光，愈傷組織見光后顏色可以轉(zhuǎn)為綠色第48頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3、試管苗的培養(yǎng)當(dāng)愈傷組織長(zhǎng)到一定大小后，可以更換培養(yǎng)基，進(jìn)行試管苗的見光培養(yǎng)（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間第49頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二同常規(guī)的無(wú)性繁殖方法相比，組織培養(yǎng)快速繁殖法主要具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）快速。采用常規(guī)的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生產(chǎn)幾株或幾十株，但用組織培養(yǎng)的方法則每年可以繁殖出幾萬(wàn)甚至數(shù)百萬(wàn)的小植株。（2）周年生產(chǎn)?；ɑ芙M織培養(yǎng)快速繁殖是在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，因條件可控，所以不受季節(jié)限制，可以全年進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。而常規(guī)的無(wú)性繁殖則受季節(jié)限制，只能在花卉生長(zhǎng)季節(jié)進(jìn)行繁殖。（3）經(jīng)濟(jì)效益高?；ɑ芙M織培養(yǎng)快速繁殖所需要的空間小，在一個(gè)200平方米的培養(yǎng)室內(nèi)一年可生產(chǎn)試管苗上百萬(wàn)株。如按每株1元計(jì)算，每年產(chǎn)值上百萬(wàn)元。（4）以組織培養(yǎng)繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。所以使用這項(xiàng)技術(shù)可讓優(yōu)良的品種不斷地延續(xù)。組織培養(yǎng)與常規(guī)繁殖相比優(yōu)點(diǎn)眾多第50頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二植物組織培養(yǎng)過(guò)程示意圖2、上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？沒(méi)有進(jìn)行滅菌處理，試管也沒(méi)有做密封等。第51頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二專題3課題1菊花的組織培養(yǎng)第52頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二試評(píng)價(jià)下列操作正確與否第53頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第54頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二本課題內(nèi)容小結(jié)菊花組織培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)操作植物體的組織培養(yǎng)影響組織培養(yǎng)的因素細(xì)胞分化細(xì)胞全能性組織培養(yǎng)過(guò)程營(yíng)養(yǎng)激素環(huán)境條件MS固體培養(yǎng)基制備外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培第55頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二作業(yè)：P36

1、在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無(wú)菌操作。2、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝？第56頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第57頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第58頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二三、接種外植體1.前期準(zhǔn)備啟動(dòng)超凈工作臺(tái)（打開吹風(fēng)和照明燈開關(guān)）第59頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二在等待外植體消毒的同時(shí)，做后面的準(zhǔn)備工作—如點(diǎn)燃酒精燈、用酒精棉進(jìn)行培養(yǎng)基和培養(yǎng)基瓶口的消毒、桌面的酒精消毒、準(zhǔn)備無(wú)菌紙等。第60頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二倒掉消毒液用無(wú)菌水反復(fù)沖洗多次第61頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二灼燒接種工具，注意安全2.在酒精燈旁操作進(jìn)行外植體切割和接種第62頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二在無(wú)菌紙上切割外植體第63頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2月20日，星期二灼燒瓶口和鑷子第64頁(yè)，共88頁(yè)，2023年，2