李謙開題MicrosoftPowerPoint演示文稿課件

(imatinib)

對醛固酮誘導(dǎo)大鼠心肌纖維化的干預(yù)作用及機制導(dǎo)師：馬禮坤教授學(xué)生：李謙一立論依據(jù)醛固酮（ALD）可以導(dǎo)致心肌纖維化（MF）的觀點已被大量實驗得到驗證。但目前醛固酮導(dǎo)致心肌纖維化的機制尚不十分清楚，傳統(tǒng)認為醛固酮通過激活心肌細胞膜表面的鹽皮質(zhì)激素受體增加轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-B）,內(nèi)皮素-1（ET-1）及血漿纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）mRNA的表達，TGF-B，ET-1及PAI-1可通過不同信號途徑導(dǎo)致心肌纖維化的發(fā)生。國內(nèi)外對ALD誘導(dǎo)MF的研究中均發(fā)現(xiàn)：MF明顯的模型組大鼠心肌中血小板衍生因子（PDGFs）明顯增多，而使用ALD受體抑制劑-螺內(nèi)酯（SPI）干預(yù)組MF程度減低PDGFs表達減少，提示PDGFs信號途徑可能參與ALD誘導(dǎo)的MF過程。PDGFs是一種促成纖維細胞(fibro—blasts)及血管平滑肌細胞有絲分裂并具有趨化作用的因子，PDGFs的高表達導(dǎo)致MF已被大量文獻報道，均提示PDGFs信號途徑可能為ALD誘導(dǎo)MF重要后續(xù)機制。二PDGFs信號途徑在ALD誘導(dǎo)心肌纖維化中的可能機制

醛固酮與其受體結(jié)合后，通過下游復(fù)雜分子信號途徑導(dǎo)致活化巨噬細胞的炎癥細胞釋放PDGFs，并且釋放炎癥細胞活性因子上調(diào)心肌間質(zhì)細胞（如：成纖維細胞）血小板源性生長因子受體（PDGFRs）表達。PDGFRs是一種酪氨酸激酶受體，

PDGFs與心肌間質(zhì)成纖維細胞表面PDGFRs結(jié)合后，一方面對成纖維細胞產(chǎn)生趨化作用并促進其有絲分裂，另一方面成纖維細胞內(nèi)開始復(fù)雜的第二信使級聯(lián)放大作用，并且以自分泌和旁分泌的形式與其它可導(dǎo)致纖維化的生長因子協(xié)同（如TGF-B1），導(dǎo)致心肌成纖維細胞大量合成膠原纖維，單位質(zhì)量心肌中膠原的含量、濃度或容積分數(shù)明顯高于正常，最終導(dǎo)致心肌纖維化、心室重塑的發(fā)生。四本動物實驗造模方法40只雄性SD大鼠首先經(jīng)10%水合氯醛腹腔麻醉行右腎切除術(shù)，術(shù)后一周給予1%氯化鈉飲水，隨機分為4組，每組10只：（1）對照組（CON組）：等體積油劑皮下注射+等體積蒸餾水灌胃；（2）模型組（去氧皮質(zhì)酮組）去氧皮質(zhì)酮15mg/只.4d-1皮下注射+等體積蒸餾水灌胃；（3）螺內(nèi)酯干預(yù)組（螺內(nèi)酯+去氧皮質(zhì)酮組）：去氧皮質(zhì)酮15mg/只.4d-1皮下注射+螺內(nèi)酯20mg.kg-1.d-1灌胃；（4）伊馬替尼干預(yù)組（伊馬替尼+去氧皮質(zhì)酮組）：去氧皮質(zhì)酮15mg/只.4d-1皮下注射+伊馬替尼60mg.kg.d-1灌胃；五研究目的初步了解在單腎切除SD大鼠經(jīng)去氧皮質(zhì)酮誘導(dǎo)致高血壓模型中，比較螺內(nèi)酯單獨，伊馬替尼單獨對心肌纖維化的影響。比較觀察各分組PDGFs及PDGFRs表達和功能變化；以纖維母細胞的增值與表型轉(zhuǎn)變和心肌膠原代謝的MMPs/TIMPs系統(tǒng)的表達及活性變化為主要指標，比較觀察螺內(nèi)酯，伊馬替尼對心肌纖維化的干預(yù)作用；觀察伊馬替尼對單核巨噬細胞浸潤及其他促纖維化因子TGF-β1、osteopontin、PAI-1、ET-1、u-PA及tenascin-C等影響，以論證PDGFs信號途徑是醛固酮誘導(dǎo)心肌纖維化重要機制之一。確定PDGFs信號途徑在醛固酮誘導(dǎo)心肌纖維化過程中的重要作用，篩選其作用的靶分子，探討其導(dǎo)致心肌纖維化的細胞分子機制，以期探尋心肌纖維化發(fā)病的新機制和防治的新策略。六研究內(nèi)容（根據(jù)待測指標修改）比較觀察各分組心臟內(nèi)源性PDGFs的mRNA表達和放免活性、PDGFRs的mRNA和蛋白表達及受體親和力的變化；比較觀察各分組心肌羥脯氨酸含量、心?、裥秃廷笮湍z原蛋白的mRNA及蛋白表達、心肌MMP-1、2、9、13、TIMPs-1的mRNA及蛋白表達及活性的變化，以及單核巨噬細胞浸潤、TGF-β1、osteopontin、PAI-1、ET-1、u-PA及tenascin-C等表達情況，以論證PDGFs信號途徑是醛固酮誘導(dǎo)心肌纖維化重要機制待測指標及方法1.通過組織切片、天狼星紅膠原染色觀察心肌間質(zhì)膠原容積分數(shù)（CVF）和心肌血管周圍膠原面積比（PVCA），生化方法測定心肌羥脯氨酸（膠原中約50%的脯氨酸被羥基化）含量；2.免疫組化法觀察PDGF-c、PDGFR-α、osteopontin及tenascin-c表達情況；3.采用RT-PCR測定心肌PDGFs的mRNA（只測C，A(待定)）。4.Western-blotting的方法測心肌磷酸化PDGFR-α表達；5.osteopontinandtenascin-cexpressionwasanalysedbyRT–PCR(最后做).

1.幻燈的文字太多，這樣容易挨罵的，前幾張片子每張字數(shù)最好減少到原字數(shù)的五分之一；2.開題中千萬不要提及標書的事情，原因是沒有中標大家都沒面子，呵呵，所以你可以參考以前的標書，但不要提它，還有，你以后要從其他角度另寫標書，早做準備??！3.脫氧皮質(zhì)醇是兩周左右才注射的吧，你怎么寫每天都注射呢，是筆誤嗎？我覺得用脫氧皮質(zhì)醇的油劑是非常好的，但是，你的對照不能用生理鹽水吧，用什么什么油啊，這類的都行吧，可以直接用你溶解脫氧皮質(zhì)醇的油劑嘛。4.你對WESTERNBLOT很熟悉的話，你最好都用這個實驗吧，至于PCI的東西等你WESTER