基因工程基本操作的四個步驟課件

1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四個步驟1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細胞4、目的基因的檢測與鑒定(一)從基因文庫中獲取目的基因?qū)⒑心撤N生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫基因文庫

基因組文庫（某物種全部基因

）部分基因文庫（如:cDNA文庫）1.基因文庫2.基因文庫的構(gòu)建方法與目的基因的獲得①鳥槍法：供體細胞中的DNA許多DNA片段運載體限制酶與載體連接載入受體細胞（基因組文庫）

產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入外源DNA擴增目的基因分離(直接分離法)(一)從基因文庫中獲取目的基因②反轉(zhuǎn)錄法：

以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA雜交雙鏈(單鏈RNA/單鏈DNA)單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶核酸酶H2.基因文庫的構(gòu)建方法與目的基因的獲得DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)（cDNA文庫）③根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA法：

根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學(xué)合成2.基因文庫的構(gòu)建方法與目的基因的獲得PCR技術(shù)—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)概念：原理：前提：PCR擴增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列是一項在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)四種脫氧核苷酸dNTP一對引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA(含有目的基因)溫度控制條件：④方式：以_____方式擴增，即____（n為擴增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增指數(shù)2n利用PCR技術(shù)擴增目的基因①概念：PCR全稱為_______________，是一項在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件：_______________________、_______________、___________(做啟動子)、___________.前提條件：②原理：__________④方式：以_____方式擴增，即____（n為擴增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：選修1P60多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA雙鏈復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫