吸光光度法學時

吸光光度法學時第1頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五

吸光光度法或分光光度法：通過有色溶液（甚至是無色溶液）對某一波長光波的吸收情況來測定待測組分的含量。（2）測定低含量組分，甚至可測定痕量組分。（3）操作簡便、快速、儀器設備也不復雜。第2頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五二、光輻射的基本性質(zhì)光具有波動性和粒子性。光量子的能量與波長成反正。高能量的電磁輻射波長短，長波長的光輻射其能量較低。第3頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五三、輻射能與分子的作用---

吸收光譜的產(chǎn)生當原子選擇吸收了某些波長的電磁波就會產(chǎn)生電子躍遷，形成了原子吸收光譜，這是一種不連續(xù)的線狀光譜。第4頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五分子吸收光譜：由于電子躍遷引進，但譜圖復雜，原子有不同的電子能級，同一電子能級分為振動能級，同一電子能級和同一振動能級，又分為轉(zhuǎn)動能級。其譜圖為帶狀光譜。第5頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五四、物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收單色光：單一波長的光。復合光：由不同波長的光組合而成的光?；パa光：把兩種適當顏色的單色按一定強度比例混合而得到白光，這兩種單色光稱為互補光。第6頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五溶液透明無色：當一束白熾光通過某溶液時，如果該溶液對可見光區(qū)域各波段的光都不吸收，即入射光全部通過。溶液的顏色：溶液給出的顏色是它吸收光的互補色。紫外光的波長范圍：200-400nm可見光的波長范圍：400-760nm第7頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五吸收曲線：測量某溶液對不同波長單色光的吸收程度，以波長為橫坐標，吸光度A為縱坐標，即得一曲線。其中光吸收程度最大的波長位置叫最大吸收波長，以λ最大（或λmax）表示。第8頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五第二節(jié)朗伯-比耳定律當一束單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液后，溶液的吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度及吸收層厚度成正比。第9頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五T：透光率；b:液層厚度（比色皿厚度）；c:物質(zhì)的濃度。K值隨c,b所取單位不同而不同：第10頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（1）如c以g/L,b以cm表示時，則常數(shù)K以a表示，稱為吸光系數(shù)，單位：L(g.cm)（2）若c以mol/L，b以cm表示時，則K用另一種符號ε表示，

ε稱為摩爾吸光系數(shù)，其單位為：L/(mol.cm)

此時：A=εbc

不同物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)值ε不同。第11頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五第四節(jié)光度分析的步驟一、顯色劑的選擇（1）反應的選擇性好，干擾少，或干擾容易消除。（2）生成的有色化合物有較高的摩爾吸光系數(shù)，靈敏度足夠高，適用于試樣中待測物質(zhì)的含量范圍。第12頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗條件的選擇（一）溶液的酸度酸度直接影響顯色劑的濃度和生成物的顏色。（二）顯色劑用量為了使顯色反應進行完全，需加入過量顯色劑，在實際工作中，通常根據(jù)試驗來確定。第13頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（三）顯色時間及顏色的穩(wěn)定性必須通過試驗來確定在最合適的時間內(nèi)進行測定。（四）溫度大多數(shù)的顯色反應在室溫下進行，但有些顯色反應必須加熱至一定的溫度和一定時間才能完成。第14頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（五）溶劑有機溶劑對顯色反應的影響為：（1）影響絡合物的離解度；（2）影響反應速度。第15頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（六）干擾物質(zhì)的影響及消除方法（1）干擾物質(zhì)本身有顏色或與顯色劑形成有色化合物，在測量條件下也有光吸收。（2）在顯色條件下，干擾物質(zhì)析出沉淀或使溶液混濁，以致無法進行光度測量。（3）與待測離子形成更穩(wěn)定的絡合。

第16頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五消除辦法：（1）控制酸度；（2）加入適當掩蔽劑；（3）選擇適當?shù)臏y量波長；（4）選擇適當?shù)膮⒈热芤骸５?7頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五三、分析波長的選擇（1）如果不存在其它有色物質(zhì)的干擾，則選擇待測有色物（或顯色劑生成的產(chǎn)物）的最大吸收波長的光波作為入射光進行光度測定。第18頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（2）如果顯色劑本身有顏色，且在有色物質(zhì)的最大吸收波長下也有光吸收，最好選擇有色物質(zhì)有較大光吸收的波長而顯色劑（或其它有色物質(zhì)）在此波長下的光吸收為零的單色光作為入射光。第19頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五四、參比溶液的選擇（1）當試液本身及顯色劑均無色，可用

蒸鎦水作參比溶液。（2）顯色劑無色，但待測試液中有其它有色物質(zhì)存在，可采用不加顯色劑的待測試液作參比溶液。（3）如顯色劑有顏色，則要用試劑空白（不加試樣溶液）作參比溶液。第20頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（4）如顯色劑和試液均有顏色，則可

取兩份試液，其中一份先加入適當掩蔽劑將待測組分掩蔽使之不與顯色劑作用，然后兩份試液都加入顯色劑及其它試劑，將加入掩蔽的那份試液作參比溶液。第21頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五五、標準曲線的制作配制一系列不同含量的標準溶液，分別置于比色皿內(nèi)，選擇合適的入射光波長，用參比溶液調(diào)整光度計的零點，然后把入射光照射到盛有標準溶液的比色皿上，測得吸光度值。根據(jù)標準溶液中待測組分的量對吸光度作圖得一直線叫標準曲線。測量的吸光度最好在：0.2-0.8范圍內(nèi)

第22頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五第五節(jié)朗伯-比耳定律的偏離一、非單色光引起的偏離朗伯-比耳定律只適用于單色光，單色光的純度與儀器的質(zhì)量有關，性能好的分光光度計，所得的入射光的波長范圍較窄，即“單色光”純度較高，標準曲線的線性范圍也大。第23頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五二、溶液本身的化學因素引起的偏離（一）溶液中的化學反應（1）生成絡合物的濃度不同；（2）剩余顯色劑量多少不同和離解程度不同。第24頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五（二）介質(zhì)的不均勻性不均勻的介質(zhì)主要包括：（1）待測試液是膠體溶液；（2）待測試液是乳濁；（3）待測試液有懸浮物。第25頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五第八節(jié)吸光光度法的應用一、單組分或多組分的分光測定要求:要求兩種或兩種以上的有色物質(zhì)的吸收光譜有較大的差異，最大吸收峰位置有相當距離即可。第26頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五吸光度的加和性：如果兩個組分的吸光質(zhì)點對某一波長的單色光均有吸收作用，而且這兩種吸光質(zhì)點之間相互不發(fā)生化學作用，當用單色光通過此溶液時，從理論和實驗都可證明，溶液的總吸光度等于各組分的吸光度之和。第27頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五

第九節(jié)差示（差分）分光光度法采用一個比待測試液濃度稍低的標準溶液作為參比溶液以代替一般吸光光度法的參比溶液。定量基礎：相對吸光度與濃度差成正比。第28頁，共31頁，2023年，2月20日，星期五第十節(jié)雙波長