小動(dòng)物采血法

小動(dòng)物采血法第1頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抓取保定方法

第2頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo一、小鼠的抓取保定小鼠性情較溫順，掙扎力小，比較容易抓取和保定。抓取時(shí)，用左手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部放在鐵籠上。趁著小鼠試圖掙脫的瞬間，迅速用另外三個(gè)手指壓住小鼠的尾巴根部握入手掌；放松拇指和食指，用另外三個(gè)手指控制小鼠，然后用食指和拇指捏住小鼠頭部?jī)蛇吺杷傻钠つw提起小鼠完成抓取保定。注意，抓小鼠尾巴應(yīng)抓住尾巴中部或根部，不能僅捏住小鼠尾巴的尾端，因?yàn)檫@時(shí)小鼠的重量全部集中到尾端，如果小鼠掙扎，有可能弄破尾端。第3頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo在進(jìn)行解剖、手術(shù)、心臟采血、尾靜脈注射時(shí)，可將小鼠用線繩捆綁在木版上，或固定在尾靜脈注射架及粗試管中。第4頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo二、大鼠的抓取保定抓取大鼠前最好戴上防護(hù)手套，右手輕輕抓住大鼠尾巴的中部并提起，迅速放在籠蓋上或其他粗糙面上，左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行，以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。第5頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo對(duì)大鼠在進(jìn)行解剖、手術(shù)、心臟采血、尾靜脈注射時(shí)，可用線繩加木版、尾靜脈注射架等裝置進(jìn)行固定第6頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo三、豚鼠的抓取保定豚鼠性情溫順，膽小易驚，一般不易傷人。捉拿時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員可先用手輕輕扣、按住豚鼠背部，順勢(shì)抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)其頸部，用另一只手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取保定第7頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo四、兔的抓取保定家兔馴服不咬人，但四肢的爪尖銳，掙扎時(shí)容易抓傷人。抓取保定方法是用右手把兩耳拿在手心并抓住頸后部皮膚，提起家兔，然后用左手托住臀部。另一種方法是使用家兔保定欄第8頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo五、犬的抓取保定犬性情兇猛、咬人，但通人性。如果犬在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前曾與實(shí)驗(yàn)人員有接觸，受過(guò)馴養(yǎng)調(diào)教，抓取保定就比較容易。受過(guò)馴養(yǎng)的犬或比格犬的抓取保定，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)彎下膝蓋，一只胳膊繞著它的胸部，另一只胳膊繞著后肢的大腿，兩只胳膊一起繞著將犬抱起。第9頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo第10頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo六、猴的抓取保定

（一）猴房?jī)?nèi)或露天大籠內(nèi)捕捉采用捕猴網(wǎng)進(jìn)行捕捉，捕猴網(wǎng)是用尼龍繩編織成的網(wǎng)袋，捕猴網(wǎng)連有1.5米長(zhǎng)的木柄。捕捉時(shí)動(dòng)作要迅速準(zhǔn)確，不要損傷頭部及其他要害部位。猴入網(wǎng)后，將圈網(wǎng)按在地上，緊緊壓住猴頭或抓住頸后部（以防回頭咬人），再將猴雙前肢反背于猴的身后，捉住后將猴由網(wǎng)中取出，在捕捉兇猛的雄猴時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)皮手套，并有2~3個(gè)人緊密配合。第11頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo（二）籠內(nèi)捕捉指單籠飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)猴在籠內(nèi)的捕捉法，猴籠設(shè)計(jì)成籠的后壁可向前滑動(dòng)捕捉時(shí)拉動(dòng)杠桿，使籠的后壁向前滑動(dòng)，將猴夾在籠的前后壁之間，隨即將猴的雙前肢從籠隙拉出籠外并緊緊握住，使猴更加固定，另一人戴上防護(hù)手套推開(kāi)籠門(mén)，抓住猴頭，然后小心地將雙前肢反背于猴的身后，由籠中提出猴子。第12頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo（三）固定椅固定猴固定椅基本上是由頭枷和坐椅構(gòu)成，坐椅可升降，頭枷可固定猴頭。固定椅可根據(jù)猴體型的大小隨意旋轉(zhuǎn)升降杠調(diào)整椅子的高低；猴頭枷上頸孔的大小可根據(jù)猴脖子的粗細(xì)作調(diào)整。固定后猴的頭部與身體以枷板分開(kāi)，操作者可避免被咬傷和抓傷，枷板同時(shí)又是工作臺(tái)，可放少量器械。第13頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo

材料與試劑

1．抗凝劑（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，進(jìn)而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4％的溶液備用。第14頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo（3）阿氏液（Alsever液），配方如下：枸櫞酸鈉（Na3C6H5O7·5H2O）0.80g枸櫞酸0.0325g葡萄糖2.05g氯化鈉0.42gH2O加至100.00ml混勻溶解后，114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑，又含有細(xì)胞生存的營(yíng)養(yǎng)，所以它既可做抗凝劑，又可做血細(xì)胞的保存液。第15頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo

采血法各種動(dòng)物采血方法不一。馬、牛、羊等大動(dòng)物一般從頸靜脈采血豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血，家禽由翼下靜脈或心臟采血，兔由心臟或耳靜脈采血，犬由頸靜脈或四肢靜脈采血，豚鼠由心臟采血，小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。

第16頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo

采集血液最關(guān)鍵的問(wèn)題是抗凝，采用什么方法進(jìn)行抗凝，則根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求和條件而定。最常用的方法如下：（1）肝素抗凝：采血時(shí)，使每ml血液含15U~20U肝素即可。計(jì)算采集的血液量，按1000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血時(shí)，邊采血邊輕輕搖動(dòng)，使抗凝劑和血液混勻。對(duì)于采少量的血液或小動(dòng)物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。第17頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo（2）EDTA抗凝：采血前，用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4％溶液，然后按預(yù)采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內(nèi)。采血，并不斷搖動(dòng)采血容器，使之混勻。（3）玻璃珠法：預(yù)先將適量的玻璃珠（根據(jù)采血量多少而定）清洗后，裝入采血容器中，滅菌后備用。采血過(guò)程中，邊采邊搖采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滾動(dòng)，以機(jī)械地除去纖維蛋白，使血液不能凝固。本法雖較麻煩，但對(duì)淋巴細(xì)胞的活性影響最小，且可減少血小板的混雜。第18頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，邊采邊輕輕搖動(dòng)采血瓶，使之混勻。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于紅細(xì)胞的保存。一般在4℃條件下，阿氏液中保存的紅細(xì)胞2周其活性和特性不變。第19頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo2．針頭

:根據(jù)不同動(dòng)物和采血部位，采用不同型號(hào)的針頭，用前必須滅菌或消毒。3．采血容器

:注射器或三角瓶等。4．采血?jiǎng)游?。?0頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo采血方法的選擇，決定于實(shí)驗(yàn)的目的所需血量以及動(dòng)物種類(lèi)。凡用血量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開(kāi)始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動(dòng)、動(dòng)脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。第21頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo采血時(shí)要注意：⑴采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃為宜；⑵采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥⑷若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑.第22頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo１．取少量血

ａ．尾靜脈:大鼠、小鼠

ｂ．耳靜脈:兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊

ｃ．眼底靜脈叢:兔、大鼠、小鼠

d．舌下靜脈:兔

e．腹壁靜脈:青蛙、蟾蜍

f．冠、腳蹼皮下靜脈:雞、鴨、鵝第23頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo２．取中量血

ａ．后肢外側(cè)皮下小隱靜脈:狗、猴、貓

ｂ．前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈:狗、猴、貓

ｃ．耳中央動(dòng)脈:兔

ｄ．頸靜脈:狗、貓、兔

ｅ．心臟:豚鼠、大鼠、小鼠

ｆ．?dāng)囝^:大鼠、小鼠

ｇ．翼下靜脈:雞、鴨、鴿、鵝

ｈ．頸動(dòng)脈:雞、鴨、鴿、鵝第24頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo３．取大量血

ａ．股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈:狗、猴、貓、兔

ｂ．心臟:狗、猴、貓、兔

ｃ．頸靜脈:馬、牛、山羊、綿羊

ｄ．摘眼球:大鼠、小鼠第25頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo采動(dòng)物品種

最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)

小鼠0.2

0.3

大鼠1

2

豚鼠5

10

兔10

40

狼狗100

500

獵狗50

200

猴15

60第26頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo1.割(剪)尾采血

當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。固定動(dòng)物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器(刀或剪刀)割去尾尖，讓血液自由滴入盛器，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動(dòng)脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。第27頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo2.鼠尾刺血法

大鼠用血量不多時(shí)(僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢查)，可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號(hào)或8號(hào)注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時(shí)即有血滴出。如果長(zhǎng)期反復(fù)取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。

第28頁(yè)，共31頁(yè)，2023年，2月20日，星期六CompanyLogo3、摘眼球采血：此法常用于鼠類(lèi)大量采血。用左手固定動(dòng)物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用無(wú)鉤彎鑷子或彎止血鉗迅速摘除眼球，立即將鼠倒置，頭朝下，眼眶內(nèi)很快流出血液。一般只適用于一次采血。