反相高效液相色譜法測定尿素中縮二脲的含量

反相高效液相色譜法測定尿素中縮二脲的含量摘要；建立一種測定尿素中縮二脲含量的反相高效液相色譜（HPLC）方法。以色譜柱L—columnODS，檢測波長為190nm，水一氨水一高氯酸為流動相?？s二脲的平均回收率為100.4%,RSD為1．55％。該方法簡單、快速、重現(xiàn)性好，可用于尿素生產(chǎn)中縮二脲的控制。關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法尿素關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法尿素縮二脲檢測尿素在工業(yè)、農(nóng)業(yè)使用時對縮二脲的含量都有嚴格的要求，在農(nóng)業(yè)使用時，縮二脲含量超標將會對農(nóng)作物種子的發(fā)芽有抑制作用。在GB2440—91尿素標準中，縮二脲是用分光光度法進行測定，操作繁瑣，分析時間長。本文采用反相高效液相色譜法，利用了1PLC中紫外一可見測器的高靈敏度的特點，建立了尿素中縮二脲的分析方法，操作簡便，靈敏，結(jié)果準確。1，實驗部分1?1儀器與試劑日本島津高效液相色譜儀（配有LC一10ATvP溶劑輸送泵，SPD一10AVP紫外一可見檢測器，CTO—10ASVP柱溫箱，7725i進樣器，C—R8A數(shù)據(jù)處理器）?？s二脲為分析純，使用前需提純。氨水（優(yōu)級純），高氯酸（優(yōu)級純）；丙酮（優(yōu)級純）；尿素（農(nóng)業(yè)用優(yōu)等品）。水為二次蒸餾水，經(jīng)0.45pm濾膜過濾。1.2實驗方法色譜條件色譜柱L—columnODS4.6mm*250mm；流速0.8mL/min；柱溫50°C；紙速0.5cm/min；檢驗波長190nm；流動相：99份的去離子水與1份的25%氨水（分析純）混合，用高氯酸（分析純）調(diào)節(jié)pH值為6.5。進樣量10pL?？s二脲標準溶液的配制縮二脲的提純，先用氨水洗滌縮二脲，然后用水洗滌，再用丙酮洗滌以除去水，最后于105~C左右在干燥箱中干燥。稱取提純的縮二脲0.0500g，溶于水的定容于250mL容量瓶中，移取5mL定容于200mL容量瓶中，此溶液中縮二脲濃厚度為5pg/mL。1?2?3尿素樣品的配制稱取尿素2.0000g，用水溶解后定容于250mL容量瓶中，移取5mL定容于200mL容量瓶中，此溶液中尿素濃度為0.2mg／mL。1?2?4測定方法分別取經(jīng)0.45pm濾膜濾過尿素樣品溶液和縮二脲標準溶液各進樣10pL,按外標法以峰面積計算含量。其色譜圖見圖1和圖2。aoLO2.010<05.06.0ZO圖2編二嫁色譜圖2■編二腺2結(jié)果與討論2.1測定波長的確定在波長為190nm、195nm、200nm、205nm、240nm下，將含有縮二脲5pg/mL溶液分別進10pL,結(jié)果見表1。隨波長的增大，峰面積在減小。波長在190nm處，峰面積最大，確定檢測波長為190nm。2.2流動相的選擇因所測定物質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有胺根，選用高氯酸作為離子對試劑，用氨水是為了調(diào)節(jié)流動相的pH值使之與測定溶液的pH值相近。經(jīng)多次試驗，最終確定上述流動相的配制和流速。表1縮二脲的檢測波長與峰面積的關(guān)系檢測峰長nm190195200205240峰面積298067146196759233305802.3線性關(guān)系稱取0.0500g縮二脲，溶解定容于250mL容量瓶中，分別移取1mL、2mL、5mL、7mL、10mL、15mL，定容于200mL容量瓶中，配制成每1mL

含有l(wèi)pg、2pg、5pg、7pg、10pg、15pg縮二脲，色譜進樣量10pg,結(jié)果見表2。表2濃度與峰面積的線性關(guān)系C/pg/mLlpg2pg5pg7pg10pg15pgA58718110206298067420275590014900361線性回歸后得A=60l89C-4989表三精密度實驗數(shù)據(jù)縮二脲標準品尿素中縮二脲峰面積平均值RSD/%峰面積平均值RSD/%2980672963701.0870204701830.182970047007528991370007298005702892970387033629819270184表四回收率測定結(jié)果投入量（mg）實測（mg）回收率（mg）平均（mg）RDS(mg)0.200.19899.0100.41.550.400.41102.51.001.02102.01.401.3999.32.001.9899.02.402.41100.4表53批樣品的測定結(jié)果序號1#2#3#縮二脲含量（%）分光光度法0.540.510.60液相色譜法0.590.500.58絕對差值0.050.010.02平均絕對差值0.03相關(guān)系數(shù)為0.999。結(jié)果表明，縮二脲在l-15pg/mL范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.4精密度試驗將5pg/mL的縮二脲溶液和0.2mg/mL的尿素溶液分別連續(xù)進樣，每次進樣量10pg?？s二脲峰面積的RSD(n=6)分別為1.08％、0.18％。結(jié)果見表3。2.5回收率試驗準確移取2ml的尿素樣品(8rag/mL)6份于200mL容量瓶中，其中一份作本底，另5份分別再移取ImL、加L、5mL、7mL、10mL、12mL的縮二脲標準溶液(0.2mg/mL),定容。按實驗方法測定回收量，根據(jù)加入量與回收量計算回收率，結(jié)果見表4。說明HPLC法測定尿素產(chǎn)品中縮二脲的回收率良好。2.6分光光度法與反相高效液相色譜法檢測3批不同尿素樣品的結(jié)果比較。兩種測定方法的平均絕對差值為0.03%，符合GB2440—91尿素標準中規(guī)定的絕對差值不大于0.05％。參考文獻分析試驗室，2004.6,P31張小華，葛竹興、張龍等，，實用高效液相色譜法的建立，張玉奎、王杰、張維冰譯，2001，北京華文出版社。鄒漢法、張玉奎、盧佩章，離子對高效液相色譜法，河南科學出版社，1994分析化學手冊第六分冊液體色譜分析，化學工業(yè)