美國(guó)FDA指導(dǎo)原則 確立用于檢測(cè)或診斷區(qū)分人乳頭瘤病毒的體外診斷器械

含無約束力的建議行業(yè)和食品藥品監(jiān)督管理局工作人員指南確立用于檢測(cè)或診斷區(qū)分人乳頭瘤病毒的體外診斷器械性能特征發(fā)布時(shí)間：2011年11月28日本文件草案發(fā)布時(shí)間為2009年9月9日關(guān)于本文件的問題，請(qǐng)聯(lián)系KateSimon博士，電話（301）796-6204，電子郵箱kathleen.simon@或MarinaV.Kondratovich博士，電話（301）796-6036，電子郵箱marina.kondratovich@。美國(guó)衛(wèi)生及公眾服務(wù)部食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械與放射健康中心體外診斷器械評(píng)估和安全辦公室微生物器械部

前言公眾評(píng)論貴公司可隨時(shí)將供機(jī)構(gòu)考慮的書面意見提交至美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局文檔管理部，5630FishersLane，rm.1061,(HFA-305),Rockville,MD,20852。電子意見提交至。請(qǐng)使用在《聯(lián)邦公報(bào)》發(fā)表的生效通知中所列出的卷宗號(hào)標(biāo)識(shí)所有意見。可能直到文件下次修訂或更新時(shí)，機(jī)構(gòu)才會(huì)受理評(píng)論。其他副本其他副本可從網(wǎng)上獲取。貴公司也可以向dsmica@發(fā)送郵件，獲取指南的電子版，或向301-827-8149發(fā)送傳真請(qǐng)求獲取打印件。請(qǐng)使用文件編號(hào)1740標(biāo)識(shí)貴公司所需的指南。

目錄I. 簡(jiǎn)介 行業(yè)和食品藥品監(jiān)督管理局工作人員指南確立用于檢測(cè)或檢測(cè)區(qū)分人乳頭瘤病毒的體外診斷器械性能特征本指南代表食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）當(dāng)前對(duì)本主題的見解。其不會(huì)為任何人創(chuàng)造或賦予任何權(quán)利，也不對(duì)FDA或公眾具有約束力。如果替代方法滿足適用的法律、法規(guī)或其兩者的要求，可以使用替代方法。如果貴公司希望討論一種替代方法，請(qǐng)聯(lián)系負(fù)責(zé)實(shí)施本指南的FDA工作人員。如果貴公司無法確定適當(dāng)?shù)腇DA工作人員，請(qǐng)撥打本指南標(biāo)題頁(yè)上列出的合適的電話號(hào)碼。簡(jiǎn)介食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布本指南的目的是為行業(yè)和機(jī)構(gòu)工作人員提供建議，進(jìn)行研究以確立預(yù)期用于檢測(cè)或檢測(cè)區(qū)分人乳頭瘤病毒的體外診斷器械（IVD）性能特征。這些器械與宮頸細(xì)胞學(xué)一同使用，以輔助進(jìn)行宮頸癌篩查。其包括可檢測(cè)一組人乳頭瘤病毒（HPV）基因型的器械，尤其是高風(fēng)險(xiǎn)人乳頭瘤病毒，以及檢測(cè)一種以上HPV基因型并對(duì)其做進(jìn)一步區(qū)分以指明存在哪種（哪些）HPV基因型的器械。已識(shí)別到100余種HPV基因型，其中約40種可影響生殖道【參考文件1】。HPV的“高風(fēng)險(xiǎn)”類型感染事實(shí)上被視為所有宮頸癌的必要病因【參考文件2】。約15種HPV基因型被視為致癌或“高風(fēng)險(xiǎn)”【參考文件3和20】?！案唢L(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試”指檢測(cè)但不區(qū)分不同類型HPV的HPVIVD器械，而“HPV基因分型測(cè)試”指檢測(cè)并進(jìn)一步區(qū)分不同類型HPV的HPVIVD器械。本文件中，“HPV”指“高風(fēng)險(xiǎn)HPV”，除非另有說明。本指南提供關(guān)于食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）推薦用以支持這些器械上市前應(yīng)用（PMA）的研究類型的詳細(xì)信息。我們建議貴公司在開始貴公司的研究前聯(lián)系OIVD，以討論貴公司器械的具體研究提案和性能目標(biāo)。本指南限制為預(yù)期確立體外診斷HPV器械性能特征的研究，這些器械用于與宮頸細(xì)胞學(xué)一同使用，進(jìn)行宮頸癌篩查。其不討論預(yù)期獨(dú)立于宮頸細(xì)胞學(xué)結(jié)果使用的HPV器械。本指南特別討論了定性檢測(cè)宮頸標(biāo)本中HPV核酸的器械，但很多建議也適用于檢測(cè)HPV蛋白的器械。關(guān)于本指南文件中所包含內(nèi)容的更多詳細(xì)信息，請(qǐng)參見第III章范圍。食品藥品監(jiān)督管理局指南文件，包括本指南，均不設(shè)立法律上的可執(zhí)行責(zé)任。相反，指南描述了機(jī)構(gòu)當(dāng)前對(duì)某一主題的見解，僅應(yīng)視作建議，除非引入了具體監(jiān)管或法定要求。機(jī)構(gòu)指南中詞語應(yīng)指建議或推薦某事，而非要求。背景本文件提供的指南可用于確立檢測(cè)或檢測(cè)區(qū)分宮頸標(biāo)本中人乳頭瘤的體外診斷器械性能特征。這些建議適用于HPVIVD的PMA。預(yù)期上市一種用于檢測(cè)或區(qū)分人乳頭瘤病毒的IVD器械的生產(chǎn)商必須符合聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案（FD&C法案）的通用控制條件，并在器械上市前獲得上市前批準(zhǔn)（FD&C法案第513和第515章；21U.S.C.360C和360e）。由于HPV診斷器械為修正后器械，可自動(dòng)分類為FD&C法案513（f）（1）節(jié)下的III類器械。已分類為第513（f）（1）節(jié)的器械需要按照FD&C法案第515章進(jìn)行上市前批準(zhǔn)。請(qǐng)參見FD&C法案第515（a）（2）節(jié)（需要根據(jù)第513（f）節(jié)分類為III類的器械的上市前批準(zhǔn)）；也請(qǐng)參見FD&C法案第513（a）（1）（C）節(jié)（定義一種器械，其作為“需按照第515章遵守上市前批準(zhǔn)，以提供其安全性和有效性的合理保證”）。關(guān)于器械測(cè)試的進(jìn)一步信息請(qǐng)參見標(biāo)題為“體外診斷（IVD）器械研究-常見問題”的指南，網(wǎng)址/downloads/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/GuidanceDocuments/ucm071230.pdf，和標(biāo)題為“使用不可單獨(dú)識(shí)別的殘余人體樣本進(jìn)行體外診斷器械研究知情同意指南”的指南，網(wǎng)址

/downloads/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/GuidanceDocuments/ucm071265.pdf.范圍本文件推薦的研究可用于確立檢測(cè)或區(qū)分人乳頭瘤的體外診斷器械性能特征。本指南限制為預(yù)期確立體外診斷HPV器械性能特征的研究，這些器械與宮頸細(xì)胞學(xué)一同使用，進(jìn)行宮頸癌篩查。其不討論預(yù)期獨(dú)立于宮頸細(xì)胞學(xué)結(jié)果或在其之前使用的HPV器械。其不討論非宮頸標(biāo)本的HPV檢測(cè)，如陰道和陰莖標(biāo)本，或HPV感染的易感性檢測(cè)。其不討論HPV的定量或半定量試驗(yàn)。作為修正后器械，HPV診斷器械科自動(dòng)分類為FD&C法案513（f）（1）節(jié)下的III類器械。迄今已為HPVDNA檢測(cè)器械確立了單獨(dú)產(chǎn)品代碼：MAQ，III類。本指南的建議適用于檢測(cè)HPV核酸（不僅HPVDNA，還包括HPVRNA）的HPV診斷器械。很多建議也適用于利用HPV核酸以外靶標(biāo)（如HPV蛋白）的HPV檢測(cè)器械。因此，本指南可包含所列代碼以外的后續(xù)HPV產(chǎn)品代碼。健康風(fēng)險(xiǎn)未能按照預(yù)期進(jìn)行的檢測(cè)或區(qū)分人乳頭瘤病毒的器械，或未能正確解釋結(jié)果，可能導(dǎo)致宮頸癌篩查和治療中有錯(cuò)誤的患者管理決策。假陰性結(jié)果可導(dǎo)致宮頸癌的及時(shí)診斷和治療延遲，使未檢測(cè)到的疾病惡化，并可能增加患病率和死亡率。假陽性結(jié)果可導(dǎo)致很多女性接收更多不必要的篩查和可能的侵入性程序，如陰道鏡和活檢。最高風(fēng)險(xiǎn)HPV類型，如HPV16和/或18的假陽性結(jié)果可導(dǎo)致宮頸病灶的不必要積極治療，可能損害生育力。由于對(duì)幾乎所有性活躍女性均推薦進(jìn)行宮頸癌篩查，這些女性中有相當(dāng)數(shù)量級(jí)進(jìn)行HPV測(cè)試，假陰性和假陽性HPV所致公共健康潛在傷害的風(fēng)險(xiǎn)量極為顯著。因此，確立這些器械的性能并了解與這些器械使用相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)其安全和有效使用而言至關(guān)重要。提交給PMA以確立HPV檢測(cè)器械性能的研究為確定這些器械安全性和有效性的基礎(chǔ)。

確立性能特征分析研究檢測(cè)限我們建議貴公司使用HPV基因組DNA或RNA轉(zhuǎn)錄本的系列稀釋確定檢測(cè)限（LOD），如適當(dāng)，在樣本采集緩沖液中進(jìn)行?；蚪MDNA和/或RNA轉(zhuǎn)錄本可為經(jīng)克隆或人工合成的材料，因?yàn)镠PV無法培養(yǎng)。我們建議貴公司確定使用器械測(cè)試的每種HPV基因型和每種標(biāo)本采集培養(yǎng)基的LoD。如果貴公司的試驗(yàn)適用于使用液基細(xì)胞學(xué)（LBC）標(biāo)本進(jìn)行測(cè)試，且涉及在處理前離心宮頸細(xì)胞和除去LBC采集培養(yǎng)基，無論離心步驟后重懸細(xì)胞的矩陣或緩沖液為何，貴公司均應(yīng)在其中進(jìn)行LOD研究。如果貴公司在任意分析研究中使用了含HPV感染細(xì)胞系的LBC模擬樣本（精密度如下文推薦），則貴公司還應(yīng)使用這些樣本類型進(jìn)行LoD研究。推薦使用人上皮細(xì)胞系，如Jurkat，作為使用HPV感染細(xì)胞系（如，SiHa和海拉細(xì)胞系）設(shè)計(jì)的LBC樣本中非HPV感染細(xì)胞的替代品。我們建議貴公司首先定義信號(hào)臨界值（空白限（LoB）），從而使患者樣本中超出LoB的信號(hào)可指示檢測(cè)到病毒。貴公司還應(yīng)估計(jì)得到95%檢測(cè)率的病毒水平（LOD）。請(qǐng)注意，臨床臨界值定義了臨床樣本中HPV測(cè)試的陽性和陰性結(jié)果，其可高于LoB，LoB分析性定義了HPV病毒是否存在。C95濃度是僅高于臨床臨界值的分析物濃度，因此本樣本重復(fù)測(cè)試的結(jié)果在95%的時(shí)間里為陽性。當(dāng)LoB用作臨界值時(shí)，則濃度C95與LOD相同。對(duì)于臨床臨界值高于LoB的HPV試驗(yàn)，濃度C95可能與LoD濃度不同。我們建議貴公司參考臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI）文件EP17-A【參考文件4】獲取LoD研究的基本概念、設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析。貴公司可使用CLSIEP17-A中、以及Linnet和Kondratovich【參考文件5】所述的方法，使用基底濃度樣本的標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估LoD?；蛘撸墒褂妹新剩z測(cè)到病毒的百分比）評(píng)估LoD，只要確定所測(cè)定的命中率覆蓋較大部分的檢測(cè)范圍（0%-100%）。LoD研究應(yīng)包括每種目標(biāo)HPV基因型、細(xì)胞系或標(biāo)本類型的系列稀釋，并可使用概率元分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析【參考文件6】。應(yīng)通過制備至少20份LoD濃度的額外重復(fù)，并標(biāo)明可在95%的時(shí)間里檢測(cè)到病毒，以確認(rèn)LoD。在兩種LoD評(píng)估方法中，應(yīng)在LoD研究中納入適當(dāng)?shù)淖儺愋詠碓?，方法為?-5天中檢測(cè)貴公司器械2-3個(gè)批次的3-5個(gè)樣本。

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度/可重復(fù)性我們建議貴公司在外部研究中心需要最小測(cè)試天數(shù)時(shí)，于室內(nèi)進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度/可重復(fù)性研究。另一種選擇是將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度研究和重復(fù)性研究結(jié)合成一項(xiàng)單獨(dú)研究，本研究在12天里于內(nèi)部和貴公司的外部測(cè)試中心同時(shí)進(jìn)行。精密度研究的標(biāo)本為確立HPV測(cè)試的精密度，貴公司應(yīng)使用已定義的分析物水平和HPV基因型創(chuàng)建10-20種精密度測(cè)試組成員。除含中度分析物水平的標(biāo)本外，貴公司還應(yīng)使用含可激發(fā)醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)分析物水平的樣本確立性能（如下所述）。考慮以下理由以確定充分體積：1）HPV不能培養(yǎng)，2）臨床樣本的獲取受限，以及3）剩余標(biāo)本的完全表征可耗盡可用于測(cè)試的標(biāo)本。處理本問題的一個(gè)選擇是使用HPV感染的細(xì)胞系（與非HPV感染的“背景”細(xì)胞系相混合，如Jurkat），以創(chuàng)建模擬臨床標(biāo)本的測(cè)試組成員。對(duì)LBC標(biāo)本而言，利用細(xì)胞系很重要，因?yàn)檫@可有助于解釋一些因細(xì)胞不均勻混懸物的采樣和處理導(dǎo)致的變異性。當(dāng)貴公司預(yù)期聲明用于檢測(cè)的HPV基因型不易獲取用作感染細(xì)胞系時(shí)，貴公司也可使用從HPVDNA質(zhì)粒或RNA復(fù)制獲取的人造測(cè)試組成員（如適用）。除這些含已定義HPV感染或HPV核酸水平的人造樣本外，貴公司還應(yīng)在研究組中納入4種或以上所含信號(hào)水平可激發(fā)貴公司臨床臨界值的真實(shí)臨床樣本，加上至少一種HPV陰性樣本。由于單獨(dú)的細(xì)胞系和質(zhì)粒不能處理臨床樣本中存在的所有變異性，因此需要真實(shí)臨床樣本?？蓞R總臨床樣本以創(chuàng)建足夠體積和達(dá)到所需病毒水平濃度。臨床標(biāo)本的病毒載量不能定義，但你應(yīng)通過納入僅部分時(shí)間（本部分的精確值不關(guān)鍵，5%至95%陽性之間均可接受）測(cè)試為陽性和/或陰性的標(biāo)本激發(fā)醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)【臨床臨界值】。通過這種方法，最終用戶可觀察到哪些輸出信號(hào)水平有變異性等級(jí)，以及其定性結(jié)果。來源于細(xì)胞系和/或真實(shí)臨床樣本的測(cè)試組成員應(yīng)作為真實(shí)LBC標(biāo)本進(jìn)行處理，從核酸提取步驟前的LBC培養(yǎng)基混懸液開始處理。如果貴公司希望利用由真實(shí)臨床標(biāo)本組成的精密度測(cè)試組（無任何模擬標(biāo)本），請(qǐng)聯(lián)系食品藥品監(jiān)督管理局體外診斷器械評(píng)價(jià)和安全辦公室（OIVD）討論關(guān)于此類標(biāo)本額外表征的建議。我們建議貴公司進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度研究，包括儀器或自動(dòng)組件。貴公司應(yīng)納入變異性來源（如操作者、天數(shù)、儀器、試驗(yàn)運(yùn)行等），包含至少12天（不必須連續(xù)），每天進(jìn)行2次運(yùn)行，每次運(yùn)行每份樣本有2份重復(fù)。這些測(cè)試天數(shù)應(yīng)覆蓋指示2次儀器校準(zhǔn)周期（如適用）。貴公司應(yīng)在精密度研究中評(píng)估這些不同儀器和3種實(shí)際批次之間的精密度。

對(duì)于模擬精密度測(cè)試組成員，測(cè)試組應(yīng)納入至少3種病毒載量水平的6個(gè)樣本（2種HPV基因型），如下所述：一種“零濃度”樣本，無任何分析物。一種“高陰性”樣本，旨在代表低于臨床確立臨界值的分析物濃度，從而使本樣本重復(fù)測(cè)試在約95%的時(shí)間里結(jié)果為陰性，約5%的時(shí)間里結(jié)果為陽性，C5濃度（如，實(shí)時(shí)PCR試驗(yàn)中，所含分析物濃度比試驗(yàn)臨床臨界值低不超過10倍）。一種“低陽性”樣本（C95濃度）：一種所含分析物濃度恰好高于臨床臨界值的樣本，從而使本樣本重復(fù)測(cè)試的結(jié)果在約95%的時(shí)間里為陽性。一種“中度陽性”樣本：一種此濃度時(shí)可預(yù)期在約100%時(shí)間里均為陽性結(jié)果的樣本（如，約為臨床臨界值濃度的2至3倍）。圖表1臨床臨界值信號(hào)低陽性C95高陰性臨床臨界值信號(hào)低陽性C95高陰性C5陽性結(jié)果百分比使用LoB作為臨床臨界值時(shí)，濃度C95與檢測(cè)限（LoD）相同，零濃度（樣本中不存在分析物）為C5【參考文件4】。CLSI文件EP05-A2【參考文件7】和EP12-A2【參考文件8】包含關(guān)于設(shè)計(jì)和進(jìn)行精密度研究的進(jìn)一步信息。

對(duì)于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度研究，不必須使用精確到C5或C95的高陰性和低陽性樣本。如果精密度研究中高陰性和低陽性樣本足夠接近臨界值，且臨界值的標(biāo)準(zhǔn)差（或變異系數(shù)百分比（%CV））在臨界值周圍的范圍中近似不變，則可通過本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度研究評(píng)估C5和C95。 如果截止值周圍濃度精密度研究的標(biāo)準(zhǔn)差（SD）幾乎不變，則：C95=C50+1.645×SD， 如果截止值周圍濃度精密度研究的標(biāo)準(zhǔn)差（SD）幾乎不變，則：C95=C50+1.645×SD，C5=C50-1.645×SD。如果截止值周圍濃度精密度研究的變異系數(shù)（CV）幾乎不變，則C95=C50+1.645×CV×C95，C5=C50–1.645×CV×C5。由此，C95=C50/(1–1.645×CV)，C5=C50/(1+1.645×CV)。再現(xiàn)性再現(xiàn)性研究的方案可根據(jù)試驗(yàn)格式而有輕微變化。需注意，如果類似于上述室內(nèi)精密度研究的較大型12天研究在除貴公司的室內(nèi)測(cè)試外又納入了2個(gè)外部研究中心，則不必須進(jìn)行一項(xiàng)單獨(dú)再現(xiàn)性研究。當(dāng)貴公司的外部研究中心需要一些測(cè)試天數(shù)時(shí)，我們推薦以下方案：在3個(gè)測(cè)試中心評(píng)估貴公司測(cè)試的再現(xiàn)性（例如，2個(gè)外部研究中心和1個(gè)內(nèi)部研究中心）。使用5天測(cè)試方案，包括每天至少2次運(yùn)行（除非試驗(yàn)設(shè)計(jì)排除了每天多次運(yùn)行）和每次運(yùn)行每種測(cè)試組成員3份重復(fù)。每天，每個(gè)機(jī)構(gòu)需至少2位操作者進(jìn)行測(cè)試。使用以上實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度研究中所述的樣本測(cè)試組（包括根據(jù)貴公司再現(xiàn)性研究中實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度內(nèi)部研究中評(píng)估的C5和C95樣本）。對(duì)于貴公司的可重復(fù)項(xiàng)研究，細(xì)胞系測(cè)試組成員對(duì)每次運(yùn)行的處理均應(yīng)從核酸提取步驟開始，每次運(yùn)行進(jìn)行獨(dú)立提取。對(duì)于精密度研究中（實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部精密度研究和再現(xiàn)性研究）測(cè)試的每種樣本，我們建議貴公司展示信號(hào)平均值和方差分量（標(biāo)準(zhǔn)差和百分CV）。此外，貴公司應(yīng)在精密度研究中納入每種樣本臨界值以上和以下值的百分比。對(duì)于再現(xiàn)性研究，展示每個(gè)試驗(yàn)中心分別和合并數(shù)據(jù)的平均值和方差分量，以及高于和低于臨界值值的百分比，我們建議貴公司咨詢CLSI文件，EP05-A2【參考文件7】和EP15-A2【參考文件9】，以獲取關(guān)于再現(xiàn)性研究設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析的其他信息。交叉反應(yīng)性我們建議貴公司使用已知會(huì)感染生殖道的其他微生物測(cè)試潛在交叉反應(yīng)性，包括通過性接觸傳播的人類病原體。我們建議貴公司測(cè)試病毒和細(xì)菌的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平（病毒通常為105pfu/ml或以上，細(xì)菌為106cfu/ml或以上）。我們建議貴公司確認(rèn)病毒和細(xì)菌的識(shí)別及滴度。滴度通常由供應(yīng)商估計(jì)，但不保證。推薦用于進(jìn)行交叉反應(yīng)性研究的微生物列出如下。具體種屬按照患病率和/或相關(guān)性推薦，但其他種屬可能也根據(jù)申辦者的判斷進(jìn)行測(cè)試。所選的任何其他種屬均應(yīng)已知會(huì)感染生殖道。如果有其他理由懷疑可能出現(xiàn)交叉感染性，應(yīng)檢測(cè)其他微生物（即，交叉感染的臨床證據(jù)、所選探針/引物序列的血液學(xué)等。對(duì)于目標(biāo)為一組乳頭瘤病毒（HPV）基因型但不對(duì)其進(jìn)行區(qū)分的器械，貴公司應(yīng)測(cè)試最密切相關(guān)和/或臨床顯著的非目標(biāo)HPV基因型，以測(cè)試交叉反應(yīng)性。對(duì)于檢測(cè)一種以上HPV基因型并對(duì)其進(jìn)一步區(qū)分的器械，貴公司應(yīng)測(cè)試目標(biāo)基因型之間的交叉反應(yīng)性。由于HPV不易培養(yǎng)，可根據(jù)貴公司的目標(biāo)分析物，將HPV基因型作為質(zhì)粒中經(jīng)克隆HPVDNA或體外轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行測(cè)試。表1.推薦用于進(jìn)行分析特異性（交叉反應(yīng)性）研究的微生物。微生物細(xì)菌：人乳頭瘤病毒嗜酸乳桿菌所有非目標(biāo)的α-HPV基因型。α-HPV基因型包括：HPV16、18、26、30、31、33、34、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、67、68，69、70、73、82、85表皮葡萄球菌金黃色葡萄球菌糞鏈球菌HPV6，11釀膿鏈球菌根據(jù)探針-血液學(xué)分析（如，blast檢索結(jié)果），任何可能與貴公司的試驗(yàn)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的非目標(biāo)生殖器HPV基因型。無乳鏈球菌棒狀桿菌屬沙眼衣原體淋病奈瑟菌其他病毒：大腸桿菌腺病毒腸球菌屬巨細(xì)胞病毒梭菌屬EB病毒消化鏈球菌屬單純皰疹病毒1克雷伯氏菌屬單純皰疹病毒2腸桿菌屬變形桿菌屬假單胞菌屬擬桿菌屬其他：雙歧桿菌屬白色念珠菌梭桿菌屬陰道毛滴蟲

干擾我們建議貴公司使用醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度的干擾物和至少一種與臨床最相關(guān)的HPV基因型（如HPV16或HPV18）進(jìn)行綜合干擾研究，以評(píng)估宮頸標(biāo)本中所見物質(zhì)的潛在抑制作用。潛在干擾物質(zhì)包括但不限于以下幾種：全血（人）、白細(xì)胞、避孕用品和女性衛(wèi)生用品。所選產(chǎn)品的活性成分和/或商標(biāo)名以及所檢測(cè)濃度均應(yīng)在貴公司的標(biāo)簽中提供。潛在干擾物質(zhì)的示例列出如下。我們建議貴公司使用含可激發(fā)醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)（臨床臨界值周圍，如，C95）分析物水平的樣本測(cè)試干擾性。我們還建議貴公司評(píng)估每種潛在最高濃度的干擾物質(zhì)（“最差情況”）。完成本目的的一種方法是，將一種標(biāo)本采集器械直接浸入潛在干擾物質(zhì)中，隨后將采集器械置于一種分離測(cè)試標(biāo)本的分裝品中。測(cè)試無潛在干擾物的另一份分裝品，從而比較成對(duì)樣本之間的信號(hào)。本方法中，2份分裝品（有和無潛在干擾物）均以相同方式在一次分析運(yùn)行中作為有充分復(fù)制的患者標(biāo)本（至少4至7份重復(fù)）進(jìn)行測(cè)試。計(jì)算所觀察干擾影響的估計(jì)值，作為2份分裝品平均值之間差異，并計(jì)算了干擾作用的雙側(cè)95%置信區(qū)間。如果未觀察到顯著臨床影響，不需要進(jìn)一步測(cè)試。我們建議貴公司參見CLSI文件EP07-A2【參考文件10】獲取關(guān)于干擾測(cè)試的其他信息。表2.干擾研究推薦的物質(zhì)物質(zhì)全血（人）白細(xì)胞（1×106細(xì)胞/ml）避孕膠凍沖洗器抗真菌乳膏殺精子劑陰道潤(rùn)滑劑女性噴霧陰道內(nèi)激素粘液

遺留和交叉污染研究（針對(duì)有自動(dòng)液體處理系統(tǒng)的器械）我們建議貴公司證明在貴公司推薦的使用說明下，貴公司的器械不會(huì)出現(xiàn)遺留和交叉污染。在一項(xiàng)遺留和交叉污染研究中，我們建議根據(jù)器械的運(yùn)行功能，將高陽性樣本與陰性樣本按順序交替使用。應(yīng)使用交替高陽性和陰性樣本進(jìn)行5次運(yùn)行。我們建議研究中高陽性樣本應(yīng)足夠高，在預(yù)期用途人群中超過95%或高于患病患者中獲得的結(jié)果。隨后可估算遺留和交叉污染影響，使用與無臨近高陽性樣本（即，僅在板上運(yùn)行陰性樣本）中陰性結(jié)果的百分比相比，在遺留研究中臨近高陽性樣本的陰性樣本的陰性結(jié)果百分比進(jìn)行。詳細(xì)信息請(qǐng)參見Haeckel【參考文件11】。對(duì)于適用于測(cè)試殘留細(xì)胞學(xué)樣本的器械，應(yīng)提供任何上游自動(dòng)細(xì)胞學(xué)處理系統(tǒng)的遺留影響分析。標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件對(duì)于貴公司推薦的標(biāo)本儲(chǔ)存條件，貴公司應(yīng)證明在整個(gè)推薦儲(chǔ)存持續(xù)時(shí)間內(nèi)幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)，貴公司的器械對(duì)所儲(chǔ)存標(biāo)本可生成與時(shí)間零點(diǎn)等效的結(jié)果。評(píng)估的儲(chǔ)存溫度應(yīng)代表貴公司推薦溫度范圍的每種極限。貴公司應(yīng)利用貴公司預(yù)期用途中聲明的標(biāo)本類型和可激發(fā)貴公司試驗(yàn)中醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)的分析物水平，確立貴公司的標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件。試劑儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件對(duì)于貴公司推薦的試劑儲(chǔ)存條件，貴公司應(yīng)利用所儲(chǔ)存試劑證明在整個(gè)推薦儲(chǔ)存持續(xù)時(shí)間內(nèi)幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)，貴公司的器械可生成與時(shí)間零點(diǎn)等效的結(jié)果。評(píng)估的儲(chǔ)存溫度應(yīng)代表貴公司推薦溫度范圍的每種極限。我們建議貴公司參見CLSI文件EP25-A【參考文件12】獲取其他信息。極速穩(wěn)定性研究適用于估算試劑穩(wěn)定性，但貴公司提交資料中的數(shù)據(jù)應(yīng)顯示真實(shí)時(shí)間性能。貴公司應(yīng)利用貴公司預(yù)期用途中聲明的標(biāo)本類型和可激發(fā)貴公司試驗(yàn)中醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)的分析物水平，確立貴公司的試劑儲(chǔ)存和運(yùn)輸條件。臨床性能研究指南注意事項(xiàng)專業(yè)宮頸癌篩選指南可幫助定義一種HPV器械將在較大患者管理方案中起到的作用，因此有助于評(píng)估一種HPV器械的任何預(yù)期用途聲明及其支持?jǐn)?shù)據(jù)。在本指南中將考慮的指南為2006年子宮頸癌篩查異常婦女處理的共識(shí)指南（2006共識(shí)指南）【參考文件13】，其為宮頸癌篩查方面可用的最新共識(shí)指南。盡管食品藥品監(jiān)督管理局中考慮了專業(yè)指南，給出進(jìn)行HPV測(cè)試的預(yù)期用途仍主要受提交供測(cè)試批準(zhǔn)的數(shù)據(jù)所支持，且通常受限于所評(píng)估的人群和樣本類型。研究應(yīng)針對(duì)于在按照HPV測(cè)試結(jié)局分層的給定人群中，確立女性的宮頸疾病風(fēng)險(xiǎn)。HPV測(cè)試的預(yù)期用途可進(jìn)行更通用的書寫（如以下“輔助”預(yù)期用途），以使臨床醫(yī)師能夠按照其認(rèn)為合適的方式靈活使用本風(fēng)險(xiǎn)信息，尤其是在未來宮頸癌篩查指南的開發(fā)中。預(yù)期用途貴公司器械的預(yù)期用途應(yīng)驅(qū)使貴公司的臨床研究設(shè)計(jì)以評(píng)估性能，因?yàn)轭A(yù)期用途將最終確定食品藥品監(jiān)督管理局將如何審查貴公司的數(shù)據(jù)。以下為一種預(yù)期用途聲明的示例，可適用于本器械類型：【商品名】HPV測(cè)試是一種【試驗(yàn)技術(shù)或類型】試驗(yàn)，用于定性檢測(cè)宮頸標(biāo)本中高風(fēng)險(xiǎn)類型的人乳頭瘤病毒（HPV）【指明目標(biāo)，如DNA、RNA轉(zhuǎn)錄本或蛋白】。試驗(yàn)檢測(cè)的HPV類型為高風(fēng)險(xiǎn)HPV類型【列出類型–指明測(cè)試是否可識(shí)別具體類型】?？墒褂谩旧唐访縃PV測(cè)試進(jìn)行測(cè)試的宮頸樣本包括【插入可能使用試驗(yàn)測(cè)試的樣本名和可能用于采集樣本的采集器械類型】。使用本測(cè)試適用于：為篩查有ASC-US（未測(cè)定顯著性的非典型鱗狀細(xì)胞）宮頸細(xì)胞學(xué)結(jié)果的患者以確定轉(zhuǎn)診進(jìn)行陰道鏡檢查的需要。30歲及以上女性中，【商品名】測(cè)試可與宮頸細(xì)胞學(xué)一同使用進(jìn)行輔助性篩查，以評(píng)估是否存在高風(fēng)險(xiǎn)HPV類型。本信息與細(xì)胞學(xué)病史的醫(yī)師評(píng)估、其他風(fēng)險(xiǎn)因素和專家指南一同，可能用于指導(dǎo)患者管理。本指南全文中首個(gè)預(yù)期用途將稱為“ASC-US分類”預(yù)期用途，第二個(gè)預(yù)期用途將稱為“輔助”預(yù)期用途。具體預(yù)期用途的研究設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)描述如下，其后為更多通用研究設(shè)計(jì)建議。ASC-US分類輔助預(yù)期用途（和很可能的任何其他預(yù)期用途）中常見的通用研究設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)：

美國(guó)以外研究中心的使用（21CFR814.15）如果貴公司依賴于國(guó)外臨床數(shù)據(jù)支持貴公司的PMA，必須滿足食品藥品監(jiān)督管理局要求，即數(shù)據(jù)科學(xué)有效且人類受試者的權(quán)利、安全性和福利按照21CFR814.15受到保護(hù)。為科學(xué)有效，貴公司的數(shù)據(jù)應(yīng)適用于預(yù)期人群和美國(guó)醫(yī)學(xué)實(shí)踐。我們鼓勵(lì)貴公司在提交前會(huì)議中與我們見面，以根據(jù)國(guó)外數(shù)據(jù)尋求批準(zhǔn)，由此減少國(guó)外研究不能支持貴公司預(yù)期用途的風(fēng)險(xiǎn)。一些考慮領(lǐng)域?yàn)榫唧w高風(fēng)險(xiǎn)HPV株系的患病率、患者篩查間期、開始篩查的平均年齡和性活動(dòng)、宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)、宮頸采樣方法和種族。組織學(xué)審查食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)為陰道鏡檢查和活檢（如必須）的結(jié)果為臨床研究中受試者疾病評(píng)估的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)（金標(biāo)準(zhǔn)）。貴公司可選擇使用貴公司每個(gè)臨床研究中心生成的組織學(xué)結(jié)果，但我們建議使用集中的三專家病理學(xué)家審查組，其很可能為貴公司的研究生成更一致且精確的疾病評(píng)估。這些病理學(xué)家應(yīng)區(qū)別宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）2和3，不得出于報(bào)告目的將這2種類別結(jié)合在一起（即，不得報(bào)告“CIN2/3”的結(jié)果）。我們建議審查組確立受試者的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)（臨床真理），并建議3位專家病理學(xué)家中的2位以遮掩方式獨(dú)立審查切片。如果2位病理學(xué)家意見一致，應(yīng)將診斷視為臨床參考標(biāo)準(zhǔn)。如果無一致意見，第三位專家病理學(xué)家應(yīng)以遮掩訪視獨(dú)立讀取切片。如果3位專家病理學(xué)家診斷中有一致意見，應(yīng)視為受試者的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)。如果第三位病理學(xué)家審查后仍無一致意見，所有3位專家病理學(xué)家均應(yīng)在一臺(tái)多頭顯微鏡（或等效技術(shù)）下一同審查切片，嘗試并達(dá)到共識(shí)診斷（如果不能達(dá)到完全共識(shí)，根據(jù)多數(shù)原則，使用3位中的2位的意見）。提交貴公司的數(shù)據(jù)是，貴公司應(yīng)提供關(guān)于如何解決不一致組織學(xué)結(jié)果的信息。細(xì)胞學(xué)報(bào)告術(shù)語采集中心應(yīng)利用可翻譯為2001年報(bào)告宮頸細(xì)胞學(xué)Bethesda系統(tǒng)（2001年Bethesda系統(tǒng)）的細(xì)胞學(xué)報(bào)告術(shù)語，或更新的Bethesda如同（如可用，或可用時(shí)）【參考文件14】。細(xì)胞學(xué)結(jié)果應(yīng)在向食品藥品監(jiān)督管理局報(bào)告數(shù)據(jù)前轉(zhuǎn)換為2001（或更新）Bethesda系統(tǒng)。HPV基因型對(duì)于可檢測(cè)“高風(fēng)險(xiǎn)”HPV的試驗(yàn)，應(yīng)以下列按照世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）分類為“致癌”的基因型作為目標(biāo)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58和59【參考文件15】。如果貴公司的試驗(yàn)不以這些推薦高風(fēng)險(xiǎn)基因型的任何一種作為目標(biāo)，貴公司應(yīng)解釋原因。其他基因型，如IARC視為“很可能致癌”或“可能致癌”（即，第66、68和73型）的基因型可能也被考慮入選，但這應(yīng)在開始貴公司的研究前與食品藥品監(jiān)督管理局進(jìn)行討論。

樣本采集培養(yǎng)基我們建議貴公司對(duì)預(yù)期用途中聲明的每種標(biāo)本采集培養(yǎng)基類型（即，液基細(xì)胞學(xué)采集液的具體商標(biāo)）均進(jìn)行所述分析和臨床研究。應(yīng)分別展示每種采集培養(yǎng)基的臨床性能。樣本采集器械可能用于采集標(biāo)本供貴公司器械測(cè)試的采集器械列表應(yīng)在預(yù)期用途聲明中進(jìn)行描述，且應(yīng)獲批通過貴公司所指的細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行使用。貴公司的分析研究中不需要評(píng)估每種聲明的采集器械（即，采集毛刷/刮刀相比于采集刷）。然而，貴公司的臨床研究中應(yīng)評(píng)估每種指明的采集器械。應(yīng)分別展示每種采集器械的臨床性能?；顧z方法每項(xiàng)研究中對(duì)所有患者和所有研究中心利用的活檢方法應(yīng)一致。如果對(duì)不同適應(yīng)癥（即，ASC-US分類和輔助）進(jìn)行了獨(dú)立研究，則每項(xiàng)研究可能使用不同的活檢方法。如果給定適應(yīng)癥的數(shù)據(jù)集中活檢方法不同，可能導(dǎo)致貴公司研究中出現(xiàn)偏差，可能影響對(duì)貴公司在該適應(yīng)癥方面性能特征的正確確立。標(biāo)準(zhǔn)活檢方法可有與其相關(guān)的不同變量，但這些變量應(yīng)與陰道鏡檢查期間可視化時(shí)宮頸的表現(xiàn)有關(guān)，如存在或不存在可見病灶、或鱗柱狀上皮交界處（SCJ）的可視性。如果需要其他變量，貴公司應(yīng)在開始貴公司的研究前就其與OIVD進(jìn)行討論。請(qǐng)注意，有病灶和無病灶區(qū)進(jìn)行的活檢應(yīng)在貴公司的病例報(bào)告表上區(qū)別表示。細(xì)胞學(xué)樣本分裝追求細(xì)胞學(xué)樣本中HPV測(cè)試預(yù)期用途的申辦者在設(shè)計(jì)其研究時(shí)應(yīng)考慮他們應(yīng)為從分裝前細(xì)胞學(xué)樣本（切片處理前采集的分裝品）進(jìn)行測(cè)試，還是從殘留細(xì)胞學(xué)樣本（切片處理后采集的分裝品）進(jìn)行工作。細(xì)胞學(xué)樣本的預(yù)分裝僅可在細(xì)胞學(xué)采集得到細(xì)胞學(xué)切片處理前分裝品移除的批準(zhǔn)時(shí)，方可能進(jìn)行。這可確保患者細(xì)胞學(xué)測(cè)試結(jié)果不受其細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的標(biāo)示外處理所影響?；蛘?，進(jìn)行殘留細(xì)胞學(xué)樣本工作的申辦者將需要分析性評(píng)估細(xì)胞學(xué)切片處理期間遺留的影響（參見分析研究章節(jié)的遺留和交叉污染研究）。進(jìn)行放大試驗(yàn)且已考慮到污染的申辦者可能需要使用替代標(biāo)本采集系統(tǒng)或批準(zhǔn)用于預(yù)分裝的系統(tǒng)進(jìn)行鞏固走，以解決其污染問題。HPV基因分型試驗(yàn)的報(bào)告結(jié)果結(jié)果應(yīng)由臨床醫(yī)師以可容易解釋的方式進(jìn)行報(bào)告。有相似風(fēng)險(xiǎn)的HPV基因型組可分組報(bào)告，而非單獨(dú)報(bào)告（如適用）。

HPV疫苗接種和研究人群由于在將來幾年里，美國(guó)HPV疫苗接種的個(gè)體數(shù)有增長(zhǎng)的可能，臨床最相關(guān)的HPV基因型預(yù)期會(huì)隨時(shí)間轉(zhuǎn)變。針對(duì)此原因，除任何當(dāng)前食品藥品監(jiān)督管理局許可的疫苗所靶向的HPV基因型外，貴公司還應(yīng)考慮在貴公司的分析評(píng)估中（精密度、遺留、穩(wěn)定性等）納入臨床最相關(guān)的非疫苗目標(biāo)HPV基因型之一（如HPV45或31）。確定樣本量估算值時(shí)，貴公司應(yīng)考慮HPV疫苗接種個(gè)體數(shù)增加將減少美國(guó)宮頸疾病的總體患病率。估算研究樣本量時(shí)，應(yīng)將疫苗率和疾病患病率的當(dāng)前估值考慮在內(nèi)。納入非疫苗接種個(gè)體高于平均水平的研究中心最終可能較為明智，因?yàn)槿赖囊呙缃臃N個(gè)體數(shù)可增加。請(qǐng)注意，本情境下，有平均水平疫苗接種個(gè)體的研究中心也需要進(jìn)行評(píng)估?？紤]本設(shè)計(jì)類型的申辦者應(yīng)在開始其研究前與食品藥品監(jiān)督管理局的討論本選擇。臨床數(shù)據(jù)集中HPV檢測(cè)的評(píng)估我們建議貴公司提供在貴公司的臨床數(shù)據(jù)集中貴公司的器械檢測(cè)目標(biāo)HPV基因型能力的評(píng)估。進(jìn)行評(píng)估的一個(gè)方法是，進(jìn)行一項(xiàng)檢測(cè)基因型與貴公司的測(cè)試相同經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)HPV測(cè)試，或貴公司可在對(duì)貴公司的臨床標(biāo)本進(jìn)行RCR后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序（PCR/測(cè)序），并將這些結(jié)果與貴公司器械的結(jié)果進(jìn)行比較。使用結(jié)合了經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)HPV測(cè)試和/或PCR/測(cè)序的復(fù)合HPV比較器也是一種選擇。對(duì)于PCR/測(cè)序，我們建議貴公司對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的2個(gè)條帶均進(jìn)行測(cè)序（雙向測(cè)序），生成的序列應(yīng)符合以下所有驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：序列包含至少100個(gè)連續(xù)堿基，使用PHRED、美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司KBBasecaller或類似軟件測(cè)量，堿基的質(zhì)量?jī)r(jià)值均為20或以上（這代表誤差可能性為1%或以下）。序列匹配參考或共有序列，具體目標(biāo)的預(yù)期（E值）<10-30（GenBank中的BLAST檢索，/Genbank/）。對(duì)于進(jìn)行HPV基因分型試驗(yàn)以確定貴公司的器械已識(shí)別到正確的HPV基因型，與RCR后擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序的比較尤其重要。請(qǐng)注意，不一致標(biāo)本的任何其他測(cè)試均不必須，且不能用于改變協(xié)議估算值。然而，可將對(duì)不一致標(biāo)本的額外測(cè)試結(jié)果作為性能表的腳注。請(qǐng)注意，在2種情形下，當(dāng)臨床臨界值設(shè)置高于LoB時(shí)，HPV測(cè)試發(fā)現(xiàn)樣本為陰性：a）HPV測(cè)試檢測(cè)到一些量的分析物（分析物水平高于LoB），但該量低于用作定義陽性和陰性結(jié)果的臨床臨界值（下表中的“檢測(cè)到”=“LoB<信號(hào)<臨床臨界值”），或b）HPV測(cè)試未檢測(cè)到關(guān)注的分析物。

（下表中“未檢測(cè)到”=信號(hào)≤LoB）。對(duì)于HPV測(cè)試和PCR/測(cè)序（或其他有效比較器，如上討論）的比較，請(qǐng)展示以上定義的HPV測(cè)試中為陰性的樣本中是否檢測(cè)到分析物。貴公司應(yīng)在表格中分別展示ASC-US和NILM（上皮內(nèi)病變或惡性腫瘤陰性）≥30人群的比較。在一份行業(yè)請(qǐng)求中有人詢問我們?nèi)绾翁峁┍拘畔?。?為貴公司可用作輔助工具的格式。表3.PCR/測(cè)序合計(jì)高風(fēng)險(xiǎn)

陽性高風(fēng)險(xiǎn)

陰性未測(cè)定HPV陽性HPV

陰性檢測(cè)到未檢測(cè)到其他

（無效/未測(cè)定）合計(jì)應(yīng)分別展示每個(gè)測(cè)試中心，以及分別展示每種采集培養(yǎng)基類型的HPV檢測(cè)評(píng)估。對(duì)于HPV基因分型測(cè)試的區(qū)分，貴公司應(yīng)在表格中分別展示ASC-US和NILM≥30人群中，比較PCR/測(cè)序與所有HPV測(cè)試輸出物的數(shù)據(jù)。詳細(xì)信息請(qǐng)參見CLSIMM17-A第9章【參考文件16】。在一份行業(yè)請(qǐng)求中有人詢問我們?nèi)绾螢橛?種可能結(jié)局的HPV基因分型測(cè)試提供本信息：HPV16陽性、HPV18陽性、HPV16和HPV18陽性、陰性和無效（不確定）：表4為貴公司可用作輔助工具的格式。表4PCR/測(cè)序高風(fēng)險(xiǎn)類型數(shù)1種高風(fēng)險(xiǎn)類型2種高風(fēng)險(xiǎn)類型多種高風(fēng)險(xiǎn)類型1618其他16和1816和其他18和其他其他陽性：HPV16陽性：HPV18陽性：HPV16和18陰性其他

無效/未測(cè)定合計(jì)

ASC-US分類預(yù)期用途–高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試貴公司應(yīng)使用代表預(yù)期用途人群（即，有ASC-US細(xì)胞學(xué)結(jié)果的患者）的標(biāo)本進(jìn)行預(yù)期研究，已確定所有標(biāo)本類型中貴公司器械的臨床性能，和貴公司在標(biāo)簽中聲明的標(biāo)本采集器械。定性測(cè)試（使用雙結(jié)局，陽性或陰性的測(cè)試）的臨床性能通過其靈敏度和特異性進(jìn)行描述。貴公司器械的臨床靈敏度為有癌前和癌癥【大于或等于宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變2（≥CIN2）】、貴公司的測(cè)試為陽性的個(gè)體比例。貴公司器械的臨床特異性為無癌前或癌癥（<CIN2）、貴公司的測(cè)試為陰性的個(gè)體比例。這些性能特征應(yīng)在作為美國(guó)臨床研究中心代表的最少3個(gè)研究中心進(jìn)行的前瞻性臨床研究中確立。樣本采集和處理正確的標(biāo)本采集和處理對(duì)確立HPV測(cè)試的性能特征而言至關(guān)重要。對(duì)于ASC-US分類預(yù)期用途，所研究的女性人群應(yīng)從婦產(chǎn)科門診進(jìn)行招募。請(qǐng)注意，陰道鏡門診不是進(jìn)行ASC-US分類評(píng)估患者的良好來源，因?yàn)榍巴幍犁R門診的女性已確定需要陰道鏡檢查（即，已通過其他測(cè)試確定為HPV陽性，或通過細(xì)胞學(xué)重復(fù)ASC-US）。由于已知需要腹腔鏡檢查的女性不是HPV分類適應(yīng)癥的目標(biāo)人群，本人群不得用于貴公司的研究，因?yàn)樗苌男阅芄浪阒挡粶?zhǔn)確。出現(xiàn)在腹腔鏡門診的女性人群HPV感染和宮頸疾病的患病率均較高，日期由于驗(yàn)證的偏差，會(huì)對(duì)器械靈敏度進(jìn)行夸大。對(duì)于應(yīng)直接使用液基細(xì)胞學(xué)（LBC）標(biāo)本進(jìn)行的測(cè)試，也應(yīng)對(duì)生成細(xì)胞學(xué)結(jié)果所用相同的LBC樣本進(jìn)行所有研究型HPV測(cè)試。這將使貴公司能夠避免貴公司研究中的任何偏差（即，在初始細(xì)胞學(xué)樣本和研究型樣本采集時(shí)間之間可能消失的感染，在首份樣本中除去大部分HPV感染細(xì)胞等）。盡管采集額外樣本時(shí)，一種減輕采樣變差的方法是將對(duì)2中樣本進(jìn)行的測(cè)試程序進(jìn)行隨機(jī)化（即，細(xì)胞學(xué)和HPV測(cè)試），對(duì)于在患者中產(chǎn)的細(xì)胞學(xué)結(jié)果而言，此方法不可接受。從患者中采集的首份細(xì)胞學(xué)樣本應(yīng)始終為用于生成細(xì)胞學(xué)結(jié)果的樣本，因此本結(jié)果（以及后續(xù)的患者健康情況）不會(huì)受到損害。因此，對(duì)2份細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的隨機(jī)測(cè)試不會(huì)減輕HPV研究的采樣偏差。從婦產(chǎn)科門診入組患者與陰道鏡門診是一種截然相反的挑戰(zhàn)，其可導(dǎo)致大量女性不屬于預(yù)期使用人群的一部分。如果貴公司正在進(jìn)行一項(xiàng)大型研究以支持多種HPV測(cè)試預(yù)期用途，明智做法是在貴公司的研究中入組所有女性，不考慮細(xì)胞學(xué)狀態(tài)。另一個(gè)選擇，如果ASC-US的預(yù)期用途是在單獨(dú)的研究中進(jìn)行的，則只將ASC-US細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果的患者登記到您的前瞻性臨床研究中。當(dāng)采用后一方法時(shí)，重要的是確立一種方法用于獲取最初用于生成入組ASC-US結(jié)果的初始細(xì)胞學(xué)樣本，從而避免上述采樣偏差。臨床參考（“金”）標(biāo)準(zhǔn)貴公司的研究應(yīng)設(shè)計(jì)為，來自婦產(chǎn)科門診且有ASC-US細(xì)胞學(xué)的所有女性將繼續(xù)進(jìn)行應(yīng)到經(jīng)檢查，不考慮HPV狀態(tài)或其他因素?；颊叩腍PV狀態(tài)應(yīng)對(duì)研究者、患者和臨床醫(yī)師（包括進(jìn)行陰道鏡檢查和組織學(xué)檢查的醫(yī)師）設(shè)盲，直至完成陰道鏡檢查/組織學(xué)檢查，以避免研究中的偏差。篩選宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的采集和后續(xù)細(xì)胞學(xué)程序之間的經(jīng)過時(shí)間不得超過12周。這些程序中經(jīng)過過長(zhǎng)時(shí)間可能導(dǎo)致HPV感染及其相關(guān)宮頸病灶的自發(fā)消退率高于正常值，將對(duì)貴公司估算臨床靈敏度和特異性產(chǎn)生不良影響。貴公司應(yīng)描述臨床研究中所用陰道鏡檢查程序的詳細(xì)信息，且陰道鏡檢查程序的結(jié)果應(yīng)分類為（陰道鏡檢查陰性/無活檢）、活檢陰性、CIN1、CIN2、CIN3和癌癥。臨床性能評(píng)估用于檢測(cè)HPV的測(cè)試（定性測(cè)試）臨床新能使用其臨床靈敏度和特異性，其陽性和陰性預(yù)測(cè)值，以及預(yù)期用途人群中目標(biāo)疾病的患病率進(jìn)行描述。用于檢測(cè)和區(qū)分HPV基因型的測(cè)試（有多種結(jié)局的測(cè)試）臨床性能使用每種測(cè)試結(jié)局的目標(biāo)疾病可能性，以及有每種測(cè)試結(jié)局的研究受試者百分比進(jìn)行描述。在一份行業(yè)請(qǐng)求中有人詢問我們?nèi)绾翁峁┍拘畔?。?duì)于2種結(jié)局的定性測(cè)試（陽性和陰性），表5為貴公司可用作輔助工具的格式：表5陰性

陰道鏡中樞組織學(xué)陰性CIN1CIN2≥CIN3HPV陽性A1A2A3A4A5A1+A2+A3+A4+A5HPV陰性B1B2B3B4B5B1+B2+B3+B4+B5合計(jì)A1+B1A2+B2A3+B3A4+B4A5+B5N貴公司的器械對(duì)于目標(biāo)疾病“CIN2和以上”（≥CIN2）的臨床性能應(yīng)評(píng)估如下：靈敏度=（A4+A5）/（A4+A5+B4+B5）；特異性=（B1+B2+B3）/（A1+A2+A3+B1+B2+B3）PPV=（A4+A5）/（A1+A2+A3+A4+A5）NPV=（B1+B2+B3）/（B1+B2+B3+B4+B5）

≥CIN2的患病率=（A4+A5+B4+B5）/N由于與CIN2相比，CIN3病灶最可能進(jìn)展為宮頸癌【參考文件17】，貴公司的器械對(duì)目標(biāo)疾病“CIN3和以上”（≥CIN3）的臨床性能應(yīng)表示為：靈敏度=A5/（A5+B5）；特異性=（B1+B2+B3+B4）/（A1+A2+A3+A4+B1+B2+B3+B4）PPV=A5/（A1+A2+A3+A4+A5）NPV=（B1+B2+B3+B4）/（B1+B2+B3+B4+B5）≥CIN3的患病率=（A5+B5）/N靈敏度和特異性的估算值、陽性和陰性預(yù)測(cè)值用于95%雙側(cè)置信區(qū)間一同提供。對(duì)于靈敏度和特異性的95%置信區(qū)間，推薦使用一種評(píng)分方法（關(guān)于評(píng)分置信區(qū)間的更多詳細(xì)信息請(qǐng)參見統(tǒng)計(jì)分析附錄和CLSIEP12-A2【參考文件8】）。預(yù)測(cè)值的置信區(qū)間可根據(jù)（如果患病率為常數(shù)）相應(yīng)似然比的置信區(qū)間計(jì)算（似然比的估算值為2個(gè)獨(dú)立比例的比值；因此，可以使用2個(gè)獨(dú)立比例比值的置信區(qū)間，參見統(tǒng)計(jì)分析附錄）。目標(biāo)疾病≥CIN2的臨床性能應(yīng)按照年齡進(jìn)行分層。對(duì)于<21、21-30、30-39和39+的年齡組，患病率展示為≥CIN2、靈敏度、特異性、PPV和NPV，以及95%CI。樣本量當(dāng)考慮到用于ASC-US分類預(yù)期用途的樣本量時(shí)，人們應(yīng)考慮到ASC-US患者中所需用于確立臨床靈敏度和特異性點(diǎn)估算值的樣本數(shù)，以及95%雙側(cè)置信區(qū)間下限。宮頸疾病的臨床靈敏度（≥CIN2）為HPV測(cè)試的最關(guān)鍵性能參數(shù)，因?yàn)榧訇幮訦PV測(cè)試結(jié)果可導(dǎo)致宮頸癌檢測(cè)和治療延遲【參考文件13】。如果貴公司器械的估算臨床靈敏度和后續(xù)陰性預(yù)測(cè)值達(dá)不到HPV測(cè)試的當(dāng)前預(yù)期值【參考文件13】，可能必須進(jìn)行對(duì)貴公司性能數(shù)據(jù)的小組審查以對(duì)貴公司的測(cè)試進(jìn)行臨床有效性評(píng)估。臨床臨界值的選擇根據(jù)使用臨床樣本的試點(diǎn)研究的接受者操作曲線（ROC）分析，可通過敏感度和特異性的相關(guān)水平進(jìn)行調(diào)整，選擇適當(dāng)?shù)呐R床臨界值。所選臨床臨界值時(shí)HPV測(cè)試的臨床性能可使用一項(xiàng)試點(diǎn)臨床研究進(jìn)行理想估算。一些情況下，臨床臨界值可使用無偏倚的程序和適當(dāng)樣本量，在關(guān)鍵臨床研究期間確定。如果臨床可接受的敏感度水平為預(yù)先設(shè)定（例如，敏感度水平93%-95%為預(yù)期用途人群的臨床可接受水平），則可使用關(guān)鍵研究確立對(duì)應(yīng)于預(yù)先設(shè)定靈敏度水平的臨床臨界值，并使用本所選臨界值獲取HPV測(cè)試的無偏差臨床性能估算值【參考文件18，19】。ASC-US人群–HPV基因分型測(cè)試檢測(cè)和區(qū)分HPV基因型的測(cè)試通常有多種結(jié)局。例如：HPV16+、HPV18+、HPV16/18+等。前一章節(jié)（ASC-US分類預(yù)期用途–高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試）描述了研究原則，以確立有ASC-US細(xì)胞學(xué)的女性中，≥CIN2的臨床靈敏度和特異性，適用于雙結(jié)局的高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試（高風(fēng)險(xiǎn)HPV陽性或陰性）以及多結(jié)局的HPV基因分型測(cè)試。除了確立HPV基因分型測(cè)試的ASC-US人群中≥CIN2的臨床靈敏度和特異性，每種測(cè)試結(jié)局的似然比和有每種測(cè)試結(jié)局的受試者百分比也應(yīng)按如下所述確立。在一份行業(yè)請(qǐng)求中有人詢問我們?nèi)绾翁峁〢SC-US人群中HPV基因分型臨床研究的數(shù)據(jù)。表6為貴公司可用作輔助工具的格式（所示范例有以下結(jié)局：HPV16+、HPV18+、HPV16/18+等）：表6陰性

陰道鏡中樞組織學(xué)陰性CIN1CIN2≥CIN3陽性：HPV16A11A12A13A14A15A11+A12+A13+A14+A15陽性：HPV18A21A22A23A24A25A21+A22+A23+A24+A25陽性：HPV16和18A31A32A33A34A35A31+A32+A33+A34+A35……合計(jì)N此類測(cè)試對(duì)目標(biāo)疾病≥CIN2的臨床性能可通過每種測(cè)試結(jié)局的似然比X和有每種測(cè)試結(jié)局的受試者百分比進(jìn)行評(píng)估。測(cè)試結(jié)局的似然比X匯總了有此疾病（≥CIN2）的受試者與無此疾病的受試者相比，有特定結(jié)果X的可能性高（或低）多少倍：LR（T=X）=Pr（T=X|D+）/Pr（T=X|D-）。應(yīng)計(jì)算每種結(jié)局的似然比以及95%置信區(qū)間。除似然比外，還應(yīng)計(jì)算每種測(cè)試結(jié)局患者有≥CIN2的可能性以及95%置信區(qū)間。每種結(jié)局K的可能性計(jì)算方法：每種K的可能性（）≥CIN2|結(jié)局K）=（）AK4+AK5）/（AK1+AK2+AK3+AK4+AK5）。臨床數(shù)據(jù)集中每種結(jié)局的百分比也應(yīng)展示如下：每種K的可能性（≥CIN2|結(jié)局K）=（AK4+AK5）/（AK1+AK2+AK3+AK4+AK5）。此外，合并結(jié)局HPV16/18+的≥CIN2可能性（如果HPV16+或HPV18+或二者均由，則HPV16/18定義為陽性）應(yīng)計(jì)算如下：可能性（≥CIN2|HPV16/18+）=（A14+A15+A24+A25+A34+A35）/（A11+A12+A13+A14+A15+A21+A22+A23+A24+A25+A31+A32+A33+A34+A35）和有HPV16/18+結(jié)果的受試者百分比。

≥CIN2可能性的置信區(qū)間可根據(jù)相應(yīng)似然比的置信區(qū)間進(jìn)行計(jì)算。通過相似訪視，對(duì)于目標(biāo)疾病≥CIN3，應(yīng)對(duì)HPV測(cè)試的臨床性能進(jìn)行估算。輔助預(yù)期用途–高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試通用研究設(shè)計(jì)選擇按照2006年共識(shí)指南，30歲及以上女性中，建議在細(xì)胞學(xué)正常的女性中主要將HPV測(cè)試作為細(xì)胞學(xué)的輔助方法。在細(xì)胞學(xué)正常的女性人群中確立貴公司器械的臨床靈敏度和特異性會(huì)更復(fù)雜，因?yàn)檫@些女性在進(jìn)行HPV測(cè)試時(shí)由于宮頸癌現(xiàn)有風(fēng)險(xiǎn)較低，通常不會(huì)被送往進(jìn)行陰道鏡檢查。然而，細(xì)胞學(xué)正常的女性子集可能有未檢測(cè)到的宮頸異常（≥CIN2）【參考文件20】。HPV測(cè)試可能有助于識(shí)別細(xì)胞學(xué)正常、有較高宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的30歲和以上女性受試者。為證明貴公司的器械能夠識(shí)別本較高風(fēng)險(xiǎn)的女性子集，貴公司應(yīng)如上所述，使用貴公司的試驗(yàn)估算本人群中陽性與陰性個(gè)體相比的≥CIN2絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)和相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)。估算本預(yù)期用途人群中的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)和相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)可使用以下2中前瞻性臨床研究設(shè)計(jì)中的至少一種來完成：使用貴公司的研究型器械將一個(gè)30歲和以上細(xì)胞學(xué)正常的人群表征為陽性或陰性，并確立含有效比較器HPV檢測(cè)器械的協(xié)議，如食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的HPV檢測(cè)器械，或基線時(shí)PCR/測(cè)序；隨后以每年一次為間期對(duì)這些女性進(jìn)行至少3年的隨訪。參見上文標(biāo)題為“臨床數(shù)據(jù)集中HPV檢測(cè)的評(píng)估”的章節(jié)，獲取在HPV檢測(cè)方面與前瞻性臨床數(shù)據(jù)集基線分析相關(guān)的更多詳細(xì)信息。隨訪期間所有出現(xiàn)異常細(xì)胞學(xué)（≥ASC-US）的女性均應(yīng)被送往進(jìn)行陰道鏡檢查，無論其HPV狀態(tài)如何。與下列選擇2不同,本研究設(shè)計(jì)中不將細(xì)胞學(xué)正常的女性送往進(jìn)行腹腔鏡檢查，尤其是如果送往進(jìn)行腹腔鏡檢查的決定基于基線訪視時(shí)或隨訪期間的研究型或已批準(zhǔn)HPV測(cè)試結(jié)果一種例外是，如果一例女性出現(xiàn)2次細(xì)胞學(xué)檢查陰性和HPV陽性（連續(xù)2年的訪視時(shí)）–本情景下，應(yīng)按照2006年共識(shí)指南，將其送往進(jìn)行陰道鏡檢查[參考文件13]。本情況下出現(xiàn)的偏差不可避免，因?yàn)榛颊呓】底钪匾r(shí)（這對(duì)避免偏差而言很重要）。請(qǐng)注意，如果女性在研究期間任何時(shí)間出現(xiàn)≥CIN2的陰道鏡檢查結(jié)果，則隨訪結(jié)束，這些女性被視為“疾病陽性”。進(jìn)行腹腔鏡檢查但<CIN2的女性應(yīng)在剩余研究持續(xù)時(shí)間里繼續(xù)接受隨訪。數(shù)據(jù)應(yīng)表明，入組時(shí)貴公司的器械測(cè)為陽性或陰性的女性中，在≥CIN2的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)方面，有統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床顯著差異。此外，如果基線時(shí)貴公司的測(cè)試為陰性的女性在3年時(shí)絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)一種例外是，如果一例女性出現(xiàn)2次細(xì)胞學(xué)檢查陰性和HPV陽性（連續(xù)2年的訪視時(shí)）–本情景下，應(yīng)按照2006年共識(shí)指南，將其送往進(jìn)行陰道鏡檢查[參考文件13]。本情況下出現(xiàn)的偏差不可避免，因?yàn)榛颊呓】底钪匾?/p>

基線時(shí)使用貴公司的研究型器械將一個(gè)30歲和以上細(xì)胞學(xué)正常的人群表征為陽性或陰性，隨后將這些女性子集進(jìn)行陰道鏡檢查。貴公司還應(yīng)使用此第二種研究設(shè)計(jì)選擇，確立含比較器HPV檢測(cè)儀器的協(xié)議，但由于貴公司有更多關(guān)于基線時(shí)≥CIN2風(fēng)險(xiǎn)的信息，也可對(duì)相似的樣本子集進(jìn)行評(píng)估。建議貴公司將所有HPV陽性女性（通過研究型和/或已批準(zhǔn)測(cè)試）和HPV陰性女性的隨機(jī)子集送往進(jìn)行陰道鏡檢查。數(shù)據(jù)應(yīng)表明，入組時(shí)貴公司的器械測(cè)為陽性或陰性的女性中，在≥CIN2的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)方面，有統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床顯著差異。應(yīng)使用多重插補(bǔ)法計(jì)算貴公司的器械所測(cè)陽性和陰性受試者中≥CIN2的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)。用于檢測(cè)和區(qū)分的HPV測(cè)試中，數(shù)據(jù)也應(yīng)證明，基線時(shí)一些陽性結(jié)局的≥CIN2絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)足夠高，足以證明預(yù)期用途人群中測(cè)試的有效性。由于僅HPV陰性女性的隨機(jī)樣本將送往進(jìn)行陰道鏡檢查，屬于有驗(yàn)證偏差，因此，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法，如多重插補(bǔ)法【參考文件21】，進(jìn)行絕對(duì)和相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的計(jì)算?？v向隨訪：考慮到細(xì)胞學(xué)正常的女性人群中確立臨床靈敏度和特異性會(huì)涉及極大樣本量和/或長(zhǎng)期患者隨訪，食品藥品監(jiān)督管理局考慮了以下選擇：在確保安全性和療效的同時(shí)，允許更快獲得這些重要器械。食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)為，在正接受或已接受HPV測(cè)試的情況下，在測(cè)試顯示有高等級(jí)宮頸學(xué)癌前/癌癥（≥CIN2）靈敏度時(shí)，對(duì)于ASC-US分類預(yù)期用途的批準(zhǔn)，在與HPV測(cè)試當(dāng)前預(yù)期一致的水平時(shí)進(jìn)行測(cè)試有較高的置信性【參考文件2】。此類病例中，為接受相同HPV測(cè)試的輔助預(yù)期用途，食品藥品監(jiān)督管理局可能提供上文選擇1中所述輔助研究的縱向隨訪部分，只要其顯示在前瞻性采集的30及以上NILM（NILM≥30）數(shù)據(jù)集中，研究型測(cè)試的HPV檢測(cè)與ASC-US人群中的HPV檢測(cè)相似。本情景種，對(duì)于已確立HPV測(cè)試特征的前瞻性采集NILM≥30數(shù)據(jù)集，其中的相同患者將接受縱向隨訪，作為批準(zhǔn)后研究的一部分，以在使用本人群中研究型HPV測(cè)試測(cè)得陽性或陰性的人群中，確立癌前/癌癥的累積三年風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)前臨床實(shí)踐指南支持用于NILM≥30人群并檢測(cè)HPV類型的測(cè)試中將考慮本方法【參考文件13】。請(qǐng)注意，CDRH的監(jiān)測(cè)和生物識(shí)別辦公室已發(fā)布了一份批準(zhǔn)后研究指南，“行業(yè)和食品藥品監(jiān)督管理局工作人員指南-PMA法令強(qiáng)制實(shí)施的處理批準(zhǔn)后研究的程序”/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/GuidanceDocuments/ucm070974.htm3。有新型HPV目標(biāo)的申辦者應(yīng)聯(lián)系FDA/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/GuidanceDocuments/ucm070974.htm輔助預(yù)期用途–HPV基因分型測(cè)試細(xì)胞學(xué)正常的30及以上女性中，前一章節(jié)（輔助預(yù)期用途–高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試）中所述用于確立≥CIN2相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的研究選擇可適用于雙結(jié)局高風(fēng)險(xiǎn)HPV測(cè)試（陽性或印象高風(fēng)險(xiǎn)HPV）和多結(jié)局HPV基因分型測(cè)試（不僅檢測(cè)還區(qū)分不同高風(fēng)險(xiǎn)HPV類型的測(cè)試）。HPV基因分型測(cè)試的結(jié)局越多，其表明每種結(jié)局相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的挑戰(zhàn)越大。按照2006年共識(shí)指南的推薦，對(duì)于HPV基因分型試驗(yàn)，公司希望追求的其他選擇（更多通用輔助篩查預(yù)期用途除外）為最高風(fēng)險(xiǎn)HPV基因型的特異性NILM≥30陰道鏡分類預(yù)期用途，如HPV16和18。本類型研究設(shè)計(jì)和評(píng)估的原則與ASC-US分類極為相似，除了貴公司需處理不同研究人群和測(cè)試結(jié)局。如果貴公司希望追求此類預(yù)期用途，請(qǐng)聯(lián)系OIVD獲取進(jìn)一步輔助。ASC-US細(xì)胞學(xué)>30及以上女性中的HPV測(cè)試為了能夠進(jìn)行平行細(xì)胞學(xué)和HPV測(cè)試，輔助預(yù)期用途需不對(duì)細(xì)胞學(xué)正常的女性設(shè)限（即，無需等待細(xì)胞學(xué)結(jié)果以預(yù)定HPV測(cè)試）。對(duì)于所有輔助預(yù)期用途的HPV器械，標(biāo)簽均應(yīng)表明，>ASC-US細(xì)胞學(xué)的30歲和以上女性的陰性HPV結(jié)果不會(huì)妨礙女性進(jìn)行陰道鏡檢查。對(duì)照當(dāng)進(jìn)行上述性能研究時(shí)，我們建議貴公司在分析和臨床研究的持續(xù)時(shí)間中，每天對(duì)測(cè)試運(yùn)行適當(dāng)?shù)耐獠繉?duì)照。由于HPV不易培養(yǎng)，適當(dāng)?shù)耐獠繉?duì)照包括質(zhì)粒內(nèi)包含的HPV基因組DNA或合成的HPVRNA轉(zhuǎn)錄物（取決于貴公司的測(cè)試目標(biāo)是HPVDNA或RNA）在盡可能接近臨床樣品的基質(zhì)中。貴公司對(duì)照中選擇使用的HPV基因型應(yīng)屬于臨床最相關(guān)的HPV基因型（如，HPV16）。由于疫苗接種項(xiàng)目，HPV株系的臨床顯著性有變化，因此可能需要適當(dāng)?shù)膶?duì)照序列進(jìn)行再次評(píng)估。我們建議貴公司在設(shè)計(jì)器械對(duì)照時(shí)咨詢OIVD。如果貴公司的器械基于核酸技術(shù)進(jìn)行，我們通常推薦貴公司納入以下類型的對(duì)照：

外部對(duì)照陰性對(duì)照陰性外部對(duì)照含適當(dāng)緩沖液或樣本運(yùn)送培養(yǎng)基，且通過與臨床標(biāo)本相同的方式在整個(gè)試驗(yàn)過程中運(yùn)行。本對(duì)照用于排除目標(biāo)核酸的污染物，或擴(kuò)增和/或檢測(cè)反應(yīng)。陽性對(duì)照陽性內(nèi)部對(duì)照包含目標(biāo)核酸，水平約比試驗(yàn)的C95濃度高2倍，溶于適當(dāng)緩沖液或樣本運(yùn)送培養(yǎng)基中，且通過與臨床標(biāo)本相同的方式在整個(gè)試驗(yàn)過程中運(yùn)行。對(duì)于靶向于HPVDNA的測(cè)試，可將在載體質(zhì)粒DNA中的克隆HPV16基因組溶于樣本運(yùn)送培養(yǎng)基中作為一種合適對(duì)照。HPV16的完整靶向保守區(qū)，如L1區(qū)，也可用作全長(zhǎng)基因組克隆的替代物。對(duì)于靶向HPVRNA轉(zhuǎn)錄本的測(cè)試，可將懸浮在樣本運(yùn)送培養(yǎng)基中的靶基因合成全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本作為一種合適對(duì)照。對(duì)于不能充分激發(fā)醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)的分析物水平對(duì)照，作為確保與21CFR809.10（b）（8）（vi）依從性的一部分，應(yīng)在標(biāo)簽中納入以下警告：“陽性和陰性對(duì)照預(yù)期用于監(jiān)測(cè)實(shí)質(zhì)性試劑失敗。陽性對(duì)照不得用作臨界值精密度的指示劑，僅可保證試劑功能。必須按照當(dāng)?shù)亍?guó)家和/或州條例或認(rèn)證要求以及貴公司實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制程序，進(jìn)行質(zhì)量控制要求。”內(nèi)部對(duì)照內(nèi)部對(duì)照為非目標(biāo)核酸序列，與目標(biāo)核酸序列一同處理（即，提取和擴(kuò)增）。其可對(duì)照試劑的完整性（聚合酶、引物等）、設(shè)備功能（熱循環(huán)儀）和樣本中存在的抑制物?？山邮艿膬?nèi)部對(duì)照材料舉例包括與人乳頭瘤病毒共同處理的人類核酸，以及擴(kuò)增人體管家基因的引物（如，RNaseP，β-actin）。人體“管家”基因的內(nèi)部對(duì)照也可幫助確定分裝樣本的足夠細(xì)胞采樣應(yīng)在器械個(gè)例分析的基礎(chǔ)上確定是否需要本對(duì)照【參考文件22】。參考文件DeVilliersEM.Taxonomicclassificationofpapillomaviruses.Virology.2004;324(1):17-27.WalboomersJM,JacobsMV,ManosMM,BoschFX,etal.Humanpapillomavirusisanecessarycauseofinvasivecervicalcancerworldwide.JournalofPathology.1999;189:12-19.

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