細菌內毒素檢查法專家講座

細菌內毒素檢驗法王思理細菌內毒素檢查法專家講座第1頁較95版藥典修改關鍵點新增加三個定義1.細菌內毒素檢驗用水2.鱟試劑靈敏度3.反應終點濃度細菌內毒素檢查法專家講座第2頁其它增加內容序言：細菌內毒素國家標準品用途增加了復核鱟試劑靈敏度。試驗準備：增加了試驗所和器皿應確證無干擾細菌內毒素檢驗。鱟試劑靈敏度復核:增加了2管陰性對照。供試品干擾試驗:增加了標準對照檢驗法:鱟試劑支數由原來4支增加為5支結果判斷:

細菌內毒素檢查法專家講座第3頁細菌內毒素檢驗法應用指導標準

1.細菌內毒素限值確實定：L=K/M2.干擾試驗3.標準物質4.鱟試劑5.細菌內毒素檢驗用水細菌內毒素檢查法專家講座第4頁細菌內毒素定量測定法

（比濁法和顯色基質法）

1.標準物質2.細菌內毒素檢驗用水3.鱟試劑：應符合定量測定要求。4.試驗準備：同細菌內毒素檢驗法。細菌內毒素檢查法專家講座第5頁細菌內毒素定量試驗方法1.標準曲線可靠性試驗:r<-0.982.供試品干擾試驗:MVD=L.C/λ1 3.測定及判斷:回收率50%-200%4.供試品定量測定：測定結果與L比較細菌內毒素檢查法專家講座第6頁細菌內毒素檢驗法應用指導標準指導意義

1.明確指明了制訂指導標準目標是“為了將細菌內毒素檢驗法廣泛應用于藥品、生物制品質量控制”講非常明確。2.首次從官方文件中必定了細菌內毒素定量測定法，這對促進“定量法”在我國應用將起重大促進作用。細菌內毒素檢查法專家講座第7頁細菌內毒素檢驗法應用指導標準指導意義

3.指導標準對細菌內素限值作出了非常明確要求：1、細菌內毒素限值確實定藥品、生物制品細菌內毒素限值(L)普通按以下公式確定：L=K/M4.在這次指導標準中只字未提熱源與細菌內毒素兩法改變中對比試驗，即今后在兩法改換中無須再做對比試驗。這么必將大大加速我國兩法改換進程。細菌內毒素檢查法專家講座第8頁細菌內毒素檢驗法應用指導標準指導意義

5.指導標準中明確要求：“標準物質試驗中所用細菌內毒素標準物質應使用由中國藥品生物制品檢定所研制、標定和分發(fā)細菌內毒素國家標準品和工作標準品?！?.伴隨定量法在我國得到必定、應用和推廣，它還將有力地推進促進細菌內毒素檢驗法在我國新進展。細菌內毒素檢查法專家講座第9頁細菌內毒素國家標準品981研制

細菌內毒素檢查法專家講座第10頁概況1.我國細菌內毒素國家標準品從1979年研制成功并正式建立至今共研制分發(fā)了六批。2.現行細菌內毒素國家標準品981研制與考評時間3.研制分四個階段細菌內毒素檢查法專家講座第11頁細菌內毒素國家標準品981特點

1.細菌內毒素精品提取2.細菌內毒素國家標準品賦形劑3.候選品生產4.候選品考評5.協作標定---新國際標準品IS2為基準細菌內毒素檢查法專家講座第12頁細菌內毒素國家標準品981特點6.標定方法---凝膠法和定量法7.協作標定后結果經數據處理和教授討論8.報中檢所學術委員會審定9.長久穩(wěn)定性考評與分裝后穩(wěn)定性考評10.標準品使用期細菌內毒素檢查法專家講座第13頁細菌內毒素檢驗法考查匯報

1.王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美國進行細菌內毒素檢驗法專題考查。2.我們這次考查作了充分準備,是帶著問題而去,在出訪前又集中討論了要了解重點問題.3.這次考查將對我國細菌內毒素檢驗法發(fā)展起到良好作用.細菌內毒素檢查法專家講座第14頁考查主要收獲

一.鱟試劑生產與管理1.鱟試劑生產企業(yè)生產試劑均須按照美國聯邦法律相關要求進行質量控制并送FDA檢驗經過后方可銷售。2.生產企業(yè)在批批送檢時須呈交全部質量控制和原始統計。3.在對鱟試劑靈敏度進行標定時需同進使用美國內毒素國家標準品和鱟試劑參考標準品。細菌內毒素檢查法專家講座第15頁考查主要收獲

二.內毒素標準品管理1.美國FDA負責管理內毒素國家標準品(EC系列)和鱟試劑參考品,政府無償提供內毒素國家標準品和鱟試劑參考品給鱟試劑生產廠家用于靈敏度標定。2.工作標準品(CSE)由廠家自行生產和發(fā)放,政府不核發(fā)相關執(zhí)照。細菌內毒素檢查法專家講座第16頁

考查主要收獲

三.細菌內毒素檢驗法用于藥品生產過程及最終產品質量控制細菌內毒素檢查法專家講座第17頁考查主要收獲

四.由熱原檢驗法改為細菌內毒素檢驗法

1.細菌內毒素限值計算2.由熱原檢驗法轉換為細菌內毒素檢驗法條件是供試品在一定條件下不干擾鱟試驗，每個廠家每個品種做3批供試品干擾試驗即可，無須進行對比試驗。細菌內毒素檢查法專家講座第18頁考查主要收獲

五.細菌內毒素檢驗法1.鱟試劑靈敏度復核目標不是考查靈敏度是否準確，而且考查操作是否準確，以及工作標準品是否準確。2.0.1ml規(guī)格鱟試劑生產與使用應與國際接軌。3.對供試品進行常規(guī)檢驗時，陽性對照對4個濃度，最少有兩個濃度，即2λ和0.25λ。同時供試品陽性對照不可缺乏。每個濃度平等做兩管。4.．用于配制調整供試品酸堿度氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、緩沖溶液等均嚴格要求細菌內毒素檢驗用水。細菌內毒素檢查法專家講座第19頁考查主要收獲

六.其它1．在計算大輸液內毒素限值時，M普通定為10ml/kg/hr。2.FDA關于細菌內毒素檢驗法Guldeline(指南)不含有法律效應，它不是Regulation。3.美國藥典收裁細菌內毒素檢驗法法定方法為凝膠法，其它兩種方法能夠采取，但需做比較試驗。4.新藥在生產過程中和最終產品質量控制均須要求采取細菌內毒素檢驗法。細菌內毒素檢查法專家講座第20頁幾點提議1.抓緊修訂和完善中國藥典附錄細菌內毒素檢驗法。2.制訂細菌內毒素檢驗法應用指導標準，統一規(guī)范檢驗中相關問題。3.對鱟試劑實施批批檢定或統一發(fā)放細菌內毒素工作標準品，提議中檢所研究處理。4.擴大品種應用，提議藥典會制訂標準，宜先將中國藥典95年版中要求進行熱原檢驗法品種改為細菌內毒素檢驗法，新藥應主動推廣使用細菌內毒素檢驗法。細菌內毒素檢查法專家講座第21頁關于怎樣在我國將熱原檢驗法改為細菌內毒素檢驗法記得提議細菌內毒素檢查法專家講座第22頁提議一.首先應該明確將熱原檢驗法改為細內菌毒素檢驗法不要做“兔法”與“鱟試驗法”對比試驗。對比試驗嚴重地影響了我國在藥品熱原檢驗中改為細菌內毒素檢驗進度，大大落后了美國，這個歷史才識必須吸收。細菌內毒素檢查法專家講座第23頁提議二.要在我國大量品種實施細菌內毒素檢驗法一個主要任務是必須要作好細菌內毒素檢驗法系統工程標準化工作。

細菌內毒素檢查法專家講座第24頁細菌內毒素檢驗法系統工程標準化內容1.《細菌內毒素檢驗法》修訂2.細菌內毒素檢驗法擴大應用指導標準制訂3.細菌內毒素檢驗法標準化操作規(guī)范(SOP)制訂4.細菌內毒素國家標準品研制5.鱟試劑內在質量研究細菌內毒素檢查法專家講座第25頁細菌內毒素檢驗法系統工程標準化內容6.鱟試劑部頒標準修訂7.鱟試劑國家對照品研制8.細菌內毒素工作標準品研制9.細菌內毒素檢驗用水研制10.細菌內毒素定量法研究等十項內容細菌內毒素檢查法專家講座第26頁提議三.明確了上述兩個問題，其首要詳細問題就是要科學地合理地確定細菌內毒素限值。四.將熱原檢驗法改為細菌內毒素檢驗法，而且確定了內毒素限值后，關鍵總是就是作好干擾試驗。五.做好品種選擇工作細菌內毒素檢查法專家講座第27頁提議

六.要在我國實施熱原檢驗法改為細菌內毒素檢驗法規(guī)范化。1.要求內毒素限值(L)2.由藥廠和鱟試劑廠相結合，共同做好供試品干擾試驗，實現兩個方法轉換。3.要求各級藥檢所，做好配合和復核工作。細菌內毒素檢查法專家講座第28頁提議

七、由藥典會制訂兩法轉換申報程序

總之為使藥典能有較多品種采取細菌內毒素檢驗法，必須抓緊時間，充分利用這個良好機遇，做好品種匯總申報和審批工作。

細菌內毒素檢查法專家講座第29頁論藥品生物制品細菌內毒素檢驗限值確實定細菌內毒素檢查法專家講座第30頁我國細菌內毒素檢驗法建立現實狀況能夠概括說：慢！主要原因：1.怎樣將熱原檢驗法改為細菌內毒素檢驗法或者說怎樣以細菌內毒素檢驗法代替熱原檢驗法？至今還沒有一個明確要求。2.假如科學地合理地確定細菌內毒素檢驗限值？還未得到應有重視。細菌內毒素檢查法專家講座第31頁一、怎樣科學地合理地確定細菌內毒素檢驗限值

L=K/MK值確實定M值確實定細菌內毒素檢查法專家講座第32頁二、當前國內在細菌內毒素限值確定中存在問題1.采取熱原檢驗劑量就會造成細菌內毒素檢驗內毒素限值要求過嚴。2.細菌內毒素限值L確定后，就依據L值進行稀釋和做干擾試驗。這么它們結果也需重新考慮了。3.當前大量細菌內毒素限值實際確定、鱟試驗、發(fā)表文章、上報結果等多用“熱原檢驗劑量”或“L=K/（fM），f為安全系數，普通為3~10”來確定L值。細菌內毒素檢查法專家講座第33頁再論細菌內毒素限值確實定細菌內毒素檢查法專家講座第34頁當前細菌內毒素限值確定存在問題主要問題是對“M為人用每千克體重每小時最大劑量”作了以下解釋：1.把最大劑量解釋成“熱原檢驗法劑量”。2.把最大劑量解釋成“每小時人用量f倍”。3.把最大劑量解釋成“熱原劑量或人用最大劑量”。細菌內毒素檢查法專家講座第35頁筆者認為科學地合理地確定細菌內毒素限值不但對我國建立細菌內毒素檢驗法至關主要，對確保被檢藥品安全使用也十分主要。而且它還直接關系到判斷藥品合格是否