魚類的急性毒性實(shí)驗(yàn)

魚類的急性毒性實(shí)驗(yàn)第1頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日目錄

目的與要求

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料3

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)報(bào)告注意事項(xiàng)64125CompanyLogo第2頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日通過本實(shí)驗(yàn)，熟悉和掌握魚類急性毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、條件、操作步驟，以及試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算、分析和報(bào)告等全過程。目的與要求1CompanyLogo第3頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

魚類對水環(huán)境的變化反應(yīng)十分靈敏，當(dāng)水體中的污染物達(dá)到一定程度時(shí)，就會(huì)引起一系列中毒反應(yīng)，例如行為異常、生理功能紊亂、組織細(xì)胞病變、直至死亡。在規(guī)定的條件下，使魚接觸含不同濃度受試物的水溶液，實(shí)驗(yàn)至少進(jìn)行24h，最好以96h為一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期，在24h、48h、72h、96h時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)魚的死亡率，確定魚類死亡50％時(shí)的受試物濃度。魚類毒性試驗(yàn)在研究水污染及水環(huán)境質(zhì)量中占重要地位。通過魚類急性毒性試驗(yàn)可以評價(jià)受試物對水生生物可能產(chǎn)生的影響，以短期暴露效應(yīng)表明受試物的毒害性。魚類急性毒性試驗(yàn)不僅用于測定化學(xué)物質(zhì)毒性強(qiáng)度、測定水體污染程度、檢查廢水處理的有效程度，也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評價(jià)環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供環(huán)境依據(jù)。實(shí)驗(yàn)原理2CompanyLogo第4頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

1．實(shí)驗(yàn)魚的選擇與馴養(yǎng)試驗(yàn)用的魚必須對毒物敏感，具有一定的代表性，便于實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng)，來源豐富，個(gè)體健康。我國可采用的試驗(yàn)魚有四大養(yǎng)殖淡水魚（青魚、草魚、鰱魚和鳙魚）、金魚、鯽魚、野生的食蚊魚等。本實(shí)驗(yàn)選用鯽魚作為實(shí)驗(yàn)魚。在同一實(shí)驗(yàn)中要求試驗(yàn)魚必須同屬、同種、同齡，最好是當(dāng)年生。魚的平均體長以7cm以下為合適。金魚體短、身寬，一般以3cm以下較為合適。同組魚中最大的體長不應(yīng)超過最小的體長的1.5倍。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第5頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日選用的試驗(yàn)魚在試驗(yàn)前必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)經(jīng)過馴養(yǎng)，使之適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件的生活環(huán)境和進(jìn)行健康選擇。馴養(yǎng)魚應(yīng)該與試驗(yàn)相同水質(zhì)水溫的水體中至少馴養(yǎng)7d，使其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境，不應(yīng)長期養(yǎng)殖（＜2個(gè)月）。馴養(yǎng)期間，應(yīng)每天換水，可每天喂食1-2次，但在試驗(yàn)前一天應(yīng)停止喂食，以免試驗(yàn)時(shí)，剩余餌料及糞便影響水質(zhì)。馴養(yǎng)期間試驗(yàn)魚死亡率不得超過5％，否則，可以認(rèn)為這批魚不符合試驗(yàn)魚的要求，應(yīng)該繼續(xù)馴養(yǎng)或者重新更換試驗(yàn)魚進(jìn)行馴養(yǎng)。試驗(yàn)前必須挑選健康的魚，即選擇體色光澤、魚鰭完整舒展、行動(dòng)活潑、逆水性強(qiáng)、大小無太大懸殊、無任何疾病的魚作為試驗(yàn)魚。任何畸形魚、外觀上反常態(tài)的魚都不得作試驗(yàn)魚。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第6頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

2．實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)容器

實(shí)驗(yàn)容器一般用玻璃或其他化學(xué)惰性材質(zhì)制成的水族箱或水槽。容器體積可根據(jù)試驗(yàn)魚的體重確定，通常以每升水中魚的負(fù)荷不得超過2g（最好為1g）。一些小型魚類幼魚可選擇500mL或1000mL燒杯為實(shí)驗(yàn)容器。容器的深度必須超過16cm，水體表面積越大越好。同一實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用相同規(guī)格和質(zhì)量的容器。為防止魚類跳出容器，可在容器上加上網(wǎng)罩。實(shí)驗(yàn)容器使用后，必須徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物。（2）其他

溶解氧測定儀、水硬度計(jì)、溫度控制儀、pH計(jì)、分析天平。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第7頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

3．實(shí)驗(yàn)用水（稀釋水）及水質(zhì)條件

用來馴養(yǎng)和配置實(shí)驗(yàn)液的水，必須是未受污染的清潔水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需過濾以除去大的懸浮物質(zhì)。也可用自來水代替，但必須進(jìn)行人工曝氣或放置3d以上脫氯。如果試驗(yàn)?zāi)康氖窃u價(jià)工業(yè)廢水或化學(xué)物質(zhì)對接納水體的影響時(shí)，則最好采用接納水體的污染源上游水作為試驗(yàn)用稀釋水。蒸餾水不適合做稀釋水，因?yàn)檎麴s水中已除去了自然界水中的鹽類，與實(shí)際差距太大，另外由于蒸餾器的影響，有時(shí)使蒸餾水中帶有對魚類不利的金屬離子，影響試驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第8頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日實(shí)驗(yàn)用水的水質(zhì)條件一般是指水的溫度、pH、溶解氧、硬度、水中的有機(jī)物和水量等。（1）水溫實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保持魚類原來的適應(yīng)溫度，一般冷水魚在12～18℃，溫水魚在20～28℃。為使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，在同一實(shí)驗(yàn)中，溫度的波動(dòng)范圍不要超過4℃（即±2℃）。冬天可以通過加熱室內(nèi)的空氣溫度而達(dá)到調(diào)節(jié)水溫的目的，也可以采用電熱棒直接控制調(diào)節(jié)水溫。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第9頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

（2）pH

水的pH與水生生物的代謝作用有密切關(guān)系。對毒物的毒性作用也有一定的影響。因此，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)維持pH在魚類適宜范圍內(nèi)。一般實(shí)驗(yàn)液的pH在6.7～8.5為宜。如需調(diào)節(jié)pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH來調(diào)節(jié)受試物貯備液的pH。調(diào)節(jié)貯備液的pH時(shí)不能使受試物濃度明顯改變，或發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或沉淀。

（3）溶解氧溶解氧是魚類生存的必要條件，它能影響魚類對毒物的敏感性。一般溫水魚要求溶解氧在4mg/L以上，冷水魚要求溶解氧在5mg/L以上。（4）硬度水的總硬度為10～250mg/L（以CaCO3計(jì)）。實(shí)驗(yàn)材料3CompanyLogo第10頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

1．預(yù)實(shí)驗(yàn)用確定正式實(shí)驗(yàn)所需濃度范圍，可選擇較大范圍的濃度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每個(gè)濃度放入五條魚，可用靜態(tài)方式進(jìn)行，不設(shè)平行組，試驗(yàn)持續(xù)48～96h。每日至少兩次記錄各容器內(nèi)的死魚數(shù)，并及時(shí)取出死魚。求出24h100％死亡濃度和96h無死亡濃度。如果依次預(yù)試驗(yàn)結(jié)果無法確定正式試驗(yàn)所需的濃度范圍，應(yīng)另選一濃度范圍再次進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟4CompanyLogo第11頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

2．正式實(shí)驗(yàn)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)得出的結(jié)果，在包括使魚全部死亡的最低濃度和96h魚類全部存活的最好濃度之間至少設(shè)置5個(gè)濃度組，并以幾何級(jí)數(shù)排布。濃度間隔系數(shù)應(yīng)≤2.2。每個(gè)試驗(yàn)濃度組應(yīng)至少設(shè)2～3個(gè)平行，每一系列設(shè)一個(gè)空白對照。如使用了助溶劑，應(yīng)增設(shè)溶劑對照組，其濃度與試劑中的最高溶劑濃度相同。試驗(yàn)魚的數(shù)目以每組實(shí)驗(yàn)濃度10～20尾合適，不得少于10尾。試驗(yàn)溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚群中隨即取出魚并隨機(jī)迅速放入各試驗(yàn)容器中。轉(zhuǎn)移期間處理不當(dāng)?shù)聂~均應(yīng)棄除。同一試驗(yàn)，所有試驗(yàn)用魚應(yīng)30min內(nèi)分組完畢。實(shí)驗(yàn)步驟4CompanyLogo第12頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

在24h、48h、72h、96h后檢查受試魚的狀況。如果沒有任何肉眼可見的運(yùn)動(dòng)，如鰓的扇動(dòng)、碰觸尾柄后無反應(yīng)等，即可判斷該魚已死亡。觀察并記錄死魚數(shù)目后，將死魚從容器中取出。應(yīng)在試驗(yàn)開始后3h或6h觀察各處理組魚的狀況，并記錄試驗(yàn)魚的異常行為（如魚體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積、受驚嚇后運(yùn)動(dòng)狀況等）。試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)要測定pH、溶解氧和溫度。試驗(yàn)期間，每天至少測定一次。至少在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，測定實(shí)驗(yàn)容器中試驗(yàn)液的受試物濃度。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對照組的死亡率不得超過10％。實(shí)驗(yàn)步驟4CompanyLogo第13頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

1．?dāng)?shù)據(jù)處理以暴露濃度為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，在計(jì)算機(jī)或?qū)?shù)概率紙上，繪制暴露濃度對死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計(jì)程序計(jì)算出24h、48h、72h、96h的半致死濃度（LC50）值，并計(jì)算95％的置信限。如果試驗(yàn)數(shù)據(jù)不適于計(jì)算LC50，可用不引起死亡的最高濃度和引起100％死亡的最低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個(gè)濃度的集合平均值。實(shí)驗(yàn)報(bào)告5CompanyLogo第14頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

2．化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級(jí)依據(jù)LC50值的大小，可以將化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5級(jí)，如實(shí)驗(yàn)表3-1所示。實(shí)驗(yàn)報(bào)告5實(shí)驗(yàn)表3-1魚類急性毒性實(shí)驗(yàn)毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)魚起始LC50（mg/L）＜11～100100～10001000～10000＞10000毒性分級(jí)劇毒高毒中等毒低毒微毒（無毒）CompanyLogo第15頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日

3．編寫報(bào)告在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)包括：試驗(yàn)名稱、目的、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)的準(zhǔn)確起止日期，還有如下幾項(xiàng)：（1）試驗(yàn)魚的種名、來源、體重、體長、健康和馴化狀況。（2）受試物質(zhì)名稱、來源物化性質(zhì)和保存方法。（3）實(shí)驗(yàn)用水的來源、物化性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)前的處理等。（4）實(shí)驗(yàn)溶液的濃度與配置方法、實(shí)驗(yàn)溫度。（5）實(shí)驗(yàn)條件，如容器形式、實(shí)驗(yàn)液的體積與深度、受試生物數(shù)目及負(fù)荷率。（6）實(shí)驗(yàn)開始后24h、48h、72h、96h時(shí)的LC50值，及其毒性分級(jí)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告5CompanyLogo第16頁，共18頁，