實驗用小型豬　第 1 部分：遺傳質(zhì)量控制

DB43/T958.1—2014DB43/T958.1—2014PAGE2PAGE1實驗用小型豬遺傳質(zhì)量控制1范圍本部分規(guī)定了實驗用小型豬的遺傳分類、繁殖方法、近交系及封閉群的遺傳質(zhì)量標準。本部分適用于實驗用小型豬的遺傳質(zhì)量控制。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB14923實驗動物哺乳類動物的遺傳質(zhì)量控制NY/T1673畜禽微衛(wèi)星DNA遺傳多樣性檢測技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1實驗用小型豬experimentalminipig經(jīng)人工飼養(yǎng)與培育，對其攜帶的病原微生物、寄生蟲進行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，12月齡體重宜不超過50kg，用于科學(xué)研究（非臨床應(yīng)用研究）、教學(xué)、生產(chǎn)、質(zhì)量控制鑒定以及其他科學(xué)實驗的小型豬。3.2近交系inbredstrain在一個動物群體中，任何個體基因組中99%以上的等位位點為純合時定義為近交系。經(jīng)典近交系經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親子交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)（inbreedingcoefficient）應(yīng)大于99%。3.3封閉群（遠交群）closedcolony（outbredstock）以非近親交配方式進行繁殖生產(chǎn)的實驗用小型豬種群，在不從外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上且每一代近交系數(shù)增量不超過1%。3.4基因修飾小型豬geneticmodifiedminipigs經(jīng)人工誘發(fā)突變或特定類型基因組改造建立的小型豬。包括轉(zhuǎn)基因豬、基因定位突變豬、誘變豬等。4遺傳分類及命名4.1遺傳分類根據(jù)遺傳特點的不同，實驗用小型豬分為近交系和封閉群。4.2命名4.2.1近交系一般以大寫英文字母命名，亦可以用大寫英文字母加阿拉伯數(shù)字命名，符號應(yīng)盡量簡短。如XENO等。4.2.2近交系的近交代數(shù)用大寫英文字母F表示。例如當一個近交系的近交代數(shù)為30代時，寫成（F30）。4.2.3亞系、支系、重組近交系、同源突變近交系以及同源導(dǎo)入近交系的定義和命名按照GB14923執(zhí)行。4.2.4封閉群的命名按照GB14923執(zhí)行。4.2.5基因修飾小型豬命名基因修飾小型豬屬于特殊近交系，其命名按照GB14923執(zhí)行。5繁殖5.1近交系的繁殖5.1.1原則選擇近交系實驗用小型豬繁殖方法的原則是保持近交系小型豬的同基因性及基因純合性。5.1.2引種作為繁殖用種豬的近交系實驗用小型豬，應(yīng)來自于近交系的基礎(chǔ)群或血緣擴大群，遺傳背景明確，有完整的資料（包括品系名稱、近交代數(shù)、遺傳基因特點及主要生物學(xué)特征等）。5.1.3可分為基礎(chǔ)群（foundationstock）、血緣擴大群（pedigreeexpansionstock）和生產(chǎn)群（productionstock）。當近交系實驗用小型豬生產(chǎn)供應(yīng)數(shù)量不是很大時，一般不設(shè)血緣擴大群，僅設(shè)基礎(chǔ)群和生產(chǎn)群?；A(chǔ)群、血緣擴大群和生產(chǎn)群的具體繁殖方式按照GB14923執(zhí)行。5.2封閉群的繁殖5.2.1原則選擇封閉群實驗用小型豬繁殖方法的原則是保持封閉群小型豬的遺傳異質(zhì)性及基因多態(tài)性，避免近交系數(shù)增速過快。5.2.25.2.2.1作為繁殖用種子的封閉群實驗用小型豬應(yīng)遺傳背景明確或來源清楚，有完整的資料（包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及主要生物學(xué)特性等）。5.2.2.2根據(jù)繁殖方式，在保證每代近交系數(shù)增量不大于1%的前提下，決定最小引種規(guī)模。如采用循環(huán)交配方式，引種數(shù)量不得少于13對無血緣關(guān)系（三代以內(nèi)無共同祖先）的公母豬；若采用隨機交配方式，引種數(shù)量不得少于25對無血緣關(guān)系的公母豬。5.2.3方法封閉群應(yīng)保持封閉群實驗用小型豬的遺傳基因的穩(wěn)定，并盡量避免近親交配。具體繁殖方法按照GB14923執(zhí)行。6近交系實驗用小型豬的遺傳質(zhì)量監(jiān)測6.1檢測方法采用微衛(wèi)星DNA標記檢測方法。具體方法按照NY/T1673執(zhí)行，各微衛(wèi)星DNA標記的染色體位置、等位基因數(shù)、等位基因片段范圍、引物序列、熒光標記、PCR反應(yīng)的Tm值、鎂離子濃度等見表4。6.2抽樣對基礎(chǔ)群，凡在子代留有種豬的雙親動物都應(yīng)進行檢測。對生產(chǎn)群，按表1要求從每個近交系中隨機抽取非同窩成年豬，公母各半。表1近交系實驗用小型豬遺傳檢測抽樣要求生產(chǎn)中母數(shù)量抽樣量＜50頭不少于3頭50100頭不少于5頭100500頭不少于10頭＞500頭不少于20頭6.3結(jié)果判定近交系實驗用小型豬遺傳檢測結(jié)果的判定按表2執(zhí)行。表2近交系實驗用小型豬遺傳檢測結(jié)果判定標準檢測結(jié)果判定與標準遺傳概貌完全一致未發(fā)現(xiàn)遺傳變異有一個位點的標記基因與標準遺傳概貌不一致遺傳發(fā)生變異6.4判定結(jié)論所有樣品檢測位點的等位基因都符合品系的特征，沒有新的等位基因出現(xiàn)為合格實驗用小型豬近交系，否則判為不合格。6.5檢測頻率近交系實驗用小型豬生產(chǎn)群每年至少進行一次遺傳質(zhì)量檢測。7封閉群實驗用小型豬的遺傳質(zhì)量監(jiān)測7.1檢測方法采用微衛(wèi)星DNA標記檢測方法。具體方法按照NY/T1673執(zhí)行，各微衛(wèi)星DNA標記的染色體位置、等位基因數(shù)、等位基因片段范圍、引物序列、熒光標記、PCR反應(yīng)的Tm值、鎂離子濃度等見表4。7.2抽樣按表3要求從每個封閉群中隨機抽取非同窩成年豬，公母各半。表3封閉群實驗用小型豬遺傳檢測抽樣要求群體數(shù)量抽樣數(shù)量＜50頭不少于3頭50-100頭不少于5頭100-500頭不少于10頭＞500頭不少于20頭7.3結(jié)果判定群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標或群體平衡狀態(tài)方法進行評價。當平均雜合度在0.5-0.7時，且期望雜合度與觀測雜合度經(jīng)卡方檢驗無明顯差異時，群體為合格的封閉群實驗用小型豬群體?；蛴萌后w是否達到平衡狀態(tài)來判定，如果沒有達到平衡狀態(tài)，說明群體的基因頻率或基因型頻率發(fā)生變化，該封閉群實驗用小型豬群體判為不合格。具體方法按照NY/T1673執(zhí)行，各微衛(wèi)星DNA標記的染色體位置、等位基因數(shù)、引物序列及熒光標記，PCR反應(yīng)的Tm值、鎂離子濃度見表4。7.4檢測頻率封閉群實驗用小型豬生產(chǎn)群每兩年至少進行一次遺傳質(zhì)量檢測。

表4各微衛(wèi)星DNA分子標記所在的染色體位置、等位基因數(shù)、等位基因片段范圍、熒光標記、兩側(cè)引物序列（左側(cè)：F，右側(cè)：R）、退火溫度和鎂離子濃度分子標記名稱染色體位置等位基因數(shù)（個）等位因片段（bp）熒光標記引物列5→3'Tm（）Mg2+M)S015517148164AMTGTTTGTTTGTGRAGAGAGT581.5S000146175189AMTGGGTTTGRTGTCCTAC501.5S0005510200248AMTCCTCTCAARGATCTGA553.0S0087617161220AMGACGCAGTCGRTCTTCAGA581.5S0101713196230AMGAGGTGARGTCCCTCAG581.5S022587170194HXGCAGAGARCGAAATA581.5SAGCCAATAGCRTCGTTTCG581.5S0009996133AMAAACACGRACTCCCTGT621.5SW605125109135MAAGCTCGACRCCGTTGCC581.5

表4（續(xù)）分子標記名稱染色體位置等位基因數(shù)（個）等位因片段（bp）熒光標記引物列5→3'Tm（）Mg2+M)SW769137104139HXGGCACGGRTCCTATC553.0SW857146134160MATGAGATGACRGCCCACT551.5S03551514243277HXTCTGTACTTGRTTTTTAA553.0S002616590AMAACTC