人類疾病模型

人類疾病模型人類疾病模型第1頁

一、人類疾病動(dòng)物模型定義和意義

1．定義人類疾病動(dòng)物模型(animalmodelofhumandiseases)是指醫(yī)學(xué)研究中建立含有些人類疾病表現(xiàn)動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。應(yīng)用動(dòng)物模型是當(dāng)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)生命科學(xué)客觀規(guī)律試驗(yàn)方法和伎倆。經(jīng)過動(dòng)物模型研究，進(jìn)而有意識(shí)地改變那些自然條件下不可能或不輕易排除原因，更能準(zhǔn)確地觀察模型試驗(yàn)結(jié)果，并將研究結(jié)果推及于人類疾病，從而更有效地認(rèn)識(shí)人類疾病發(fā)生、發(fā)展規(guī)律并研究防治辦法。第一節(jié)人類疾病動(dòng)物模型概述人類疾病模型第2頁

人類疾病動(dòng)物模型研究，本質(zhì)上是比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用科學(xué)。研究人員可利用各種動(dòng)物生物特征和疾病特點(diǎn)與人類疾病進(jìn)行比較研究。長久以來，生物醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展經(jīng)常依賴于使用動(dòng)物作為試驗(yàn)假說和臨床假說基礎(chǔ)。人類各種疾病發(fā)生發(fā)展是十分復(fù)雜，疾病發(fā)病機(jī)制和預(yù)防、治療機(jī)制是不可能也不允許在人體上試驗(yàn)研究，但能夠經(jīng)過應(yīng)用動(dòng)物復(fù)制出人類疾病動(dòng)物模型，對(duì)其生命現(xiàn)象進(jìn)行研究，進(jìn)而推論到人類，方便探索人類生命奧秘，控制人類疾病和衰老，延長人類壽命。人類疾病模型第3頁2．應(yīng)用動(dòng)物模型意義應(yīng)用動(dòng)物模型意義主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

(1)防止人體試驗(yàn)造成危害動(dòng)物能夠作為人類替難者，可在人為設(shè)計(jì)特定試驗(yàn)條件下重復(fù)試驗(yàn)研究。使用動(dòng)物模型除了能克服在人類研究中經(jīng)常碰到倫理和社會(huì)道德限制外，還能采取一些不能應(yīng)用于人類研究方法和路徑，甚至為了試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)需要還能夠損傷動(dòng)物組織、器官以至處死。

(2)應(yīng)用動(dòng)物模型可研究平時(shí)不易見到疾病平時(shí)臨床極難見到放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、戰(zhàn)傷等疾病，依據(jù)試驗(yàn)要求能復(fù)制該疾病動(dòng)物模型，供研究使用。人類疾病模型第4頁(3)可提供發(fā)病率低，潛伏期和病程長疾病動(dòng)物模型有些疾病如免疫性、代謝性、內(nèi)分泌和血液等疾病在臨床上發(fā)病率低，大家可選取動(dòng)物種群中發(fā)病率高類似于人疾病作為動(dòng)物模型，也可經(jīng)過不一樣方法復(fù)制這些疾病動(dòng)物模型從事研究工作。還有些疾病如腫瘤、慢性氣管炎、動(dòng)脈粥樣硬化、遺傳病、肺心病、類風(fēng)濕等疾病發(fā)生發(fā)展速度遲緩，潛伏期長，病程也長，短幾年，長十幾年甚至幾十年，有疾病要隔代或者幾代才能顯性發(fā)病。大多動(dòng)物因?yàn)樯芷诒容^短，在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行一代或幾代觀察就顯得十分輕易．應(yīng)用動(dòng)物模型來研究就克服了以上不足。人類疾病模型第5頁(4)克服復(fù)雜原因，增加方法學(xué)上可比性臨床上許多疾病是十分復(fù)雜：病人并非患有一個(gè)疾病，有幾個(gè)疾病同時(shí)并存，即使某單一疾病，因?yàn)椴∪四昙o(jì)、性別、體質(zhì)、遺傳以及社會(huì)原因?qū)ζ浼膊“l(fā)生發(fā)展都會(huì)有影響，產(chǎn)生不一樣效果。而用動(dòng)物復(fù)制疾病模型，就能夠選擇相同品種、品系、性別、年紀(jì)、體重、健康狀態(tài)以及在相同環(huán)境原因內(nèi)進(jìn)行觀察研究，這么對(duì)該疾病及其發(fā)展過程研究就能夠排除其它影響原因，使得到結(jié)果愈加準(zhǔn)確，也可單一變換某一原因，使試驗(yàn)研究結(jié)果愈加深入，增加了原因可比性。人類疾病模型第6頁(5)樣品搜集方便，試驗(yàn)結(jié)果易分析動(dòng)物模型作為研究人類疾病“代替品”，便于試驗(yàn)操作人員按時(shí)采集所需各種樣品，及時(shí)或分批處死動(dòng)物搜集樣本，方便更加好地了解疾病過程，完成試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)，這點(diǎn)在臨床是不易辦到。

(6)有利于更全方面地認(rèn)識(shí)疾病本質(zhì)有些病原體不但引發(fā)人類發(fā)生疾病，也可引發(fā)動(dòng)物感染，其臨床表現(xiàn)各有特點(diǎn)，經(jīng)過對(duì)人畜共患病比較，可觀察到同一病原體在不一樣機(jī)體引發(fā)損害，更有利于全方面地認(rèn)識(shí)疾病本質(zhì)?？偠灾?，動(dòng)物模型在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中做出了巨大貢獻(xiàn)。人類疾病模型第7頁

二、人類疾病動(dòng)物模型設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)成功動(dòng)物模型經(jīng)常依賴于最初周密設(shè)計(jì)，動(dòng)物模型設(shè)計(jì)普通應(yīng)遵照下標(biāo)準(zhǔn)。

1．相同性動(dòng)物模型應(yīng)盡可能近似人類疾病，最好能找到與人類疾病相同動(dòng)物自發(fā)性疾病。如大鼠自發(fā)性高血壓就是研究人類原發(fā)性高血壓理想動(dòng)物模型；小型豬自發(fā)性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化就是研究人類冠心病良好動(dòng)物模型：自發(fā)性狗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與人類幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分相同，一樣是理想動(dòng)物模型。與人類疾病完全相同動(dòng)物自發(fā)性疾病不易多得，往往需要研究人員加以復(fù)制，為了盡可能做到與人類疾病相同，首先要在動(dòng)物選擇上加以注意；其次是復(fù)制動(dòng)物模型試驗(yàn)方法上不停探索改進(jìn)；另外在觀察指標(biāo)等方面都應(yīng)加以周密設(shè)計(jì)。人類疾病模型第8頁2.重復(fù)性理想動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)，甚至是能夠標(biāo)準(zhǔn)化。比如用一次定量放血法可百分之百造成出血性休克，百分之百死亡，這就符合可重復(fù)性和到達(dá)了標(biāo)準(zhǔn)化要求。又如用狗做心肌梗死模型照理很適當(dāng)，因?yàn)樗跔顒?dòng)脈循環(huán)與人相同，而且在試驗(yàn)動(dòng)物中它最適宜做暴露心臟剖胸手術(shù)，但狗結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后果差異太大，不一樣狗同一動(dòng)脈同一部位結(jié)扎，其后果很不一致，無法預(yù)測(cè)，無法標(biāo)準(zhǔn)化。相反，大小白鼠、地鼠和豚鼠結(jié)扎冠脈后果就比較穩(wěn)定一致，能夠預(yù)測(cè)，因而能夠標(biāo)準(zhǔn)化。人類疾病模型第9頁3．可靠性復(fù)制動(dòng)物模型應(yīng)力爭(zhēng)可靠地反應(yīng)人類疾病，即可特異地、可靠地反應(yīng)該種疾病代謝、結(jié)構(gòu)改變，同時(shí)應(yīng)具備該種疾病主要癥狀和體征，并經(jīng)過一系列檢測(cè)(如心電圖、臨床生理、生化指標(biāo)檢驗(yàn)、病理切片等)得以證實(shí)。假如易自發(fā)地出現(xiàn)一些對(duì)應(yīng)病變動(dòng)物，就不應(yīng)選取；易產(chǎn)生與復(fù)制疾病相混同疾病或臨床癥狀者也不宜選取。比如鋁中毒，選取大鼠復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)，大鼠本身易患進(jìn)行性腎病，輕易與鉛中毒所致腎病相混同，選取蒙古沙鼠就比選取大鼠可靠性好，因?yàn)槊晒派呈笾挥秀U中毒才會(huì)使其出現(xiàn)腎病變。人類疾病模型第10頁4．適用性和可控性設(shè)計(jì)復(fù)制人類疾病動(dòng)物模型，應(yīng)盡可能考慮今后臨床應(yīng)用和易于控制其疾病發(fā)展過程，方便于開展研究工作。比如雌激素能中止大鼠和小鼠早期妊娠，但不能中止人妊娠，所以選取雌激素復(fù)制大鼠和小鼠中止早期妊娠動(dòng)物模型是不適用；用大鼠和小鼠篩選帶有雌激素活性避孕藥品時(shí)也會(huì)帶來錯(cuò)誤結(jié)論。又如選取大鼠和小鼠復(fù)制試驗(yàn)性腹膜炎也不適用，因?yàn)樗麄儗?duì)革蘭陰性菌含有較高抵抗力，不易形成腹膜炎。有些動(dòng)物對(duì)某致病因子尤其敏感，極易死亡，不好控制也不宜復(fù)制動(dòng)物模。人類疾病模型第11頁5．易行性和經(jīng)濟(jì)性復(fù)制動(dòng)物模型設(shè)計(jì)，應(yīng)盡可能做到方法輕易執(zhí)行和合乎經(jīng)濟(jì)標(biāo)準(zhǔn)。除了動(dòng)物選擇上要考慮易行性和經(jīng)濟(jì)性標(biāo)準(zhǔn)外，在選擇模型復(fù)制方法和指標(biāo)檢測(cè)觀察上也要注意這一標(biāo)準(zhǔn)。人類疾病模型第12頁

三、動(dòng)物模型分類人類疾病動(dòng)物模型經(jīng)過近30年開發(fā)研究，現(xiàn)已累積多個(gè)動(dòng)物模型在醫(yī)學(xué)發(fā)展中占有極其主要地位。為了能更加好地應(yīng)用、開發(fā)和研究動(dòng)物模型，大家將其進(jìn)行了分類，如按動(dòng)物模型產(chǎn)生原因進(jìn)行分類，按醫(yī)學(xué)系統(tǒng)范圍分類，按模型種類分類和按中醫(yī)證候動(dòng)物模型分類?，F(xiàn)將各種分類方法分述以下：人類疾病模型第13頁

（一）按產(chǎn)生原因分類

1．誘發(fā)性動(dòng)物模型(experimentalanimalmodel)又稱為試驗(yàn)性動(dòng)物模型。是指研究者經(jīng)過使用物理、化學(xué)、生物和復(fù)合致病原因作用于動(dòng)物，造成動(dòng)物組織、器官或全身一定損害，出現(xiàn)一些類似人類疾病時(shí)功效、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面病變，即為人工誘發(fā)出特定疾病動(dòng)物模型。人類疾病模型第14頁(1)物理原因誘發(fā)動(dòng)物模型常見物理原因如機(jī)械損傷、放射線損傷、氣壓、手術(shù)等許多原因。使用物理方法復(fù)制動(dòng)物模型如外科手術(shù)方法復(fù)制大鼠急性肝衰竭動(dòng)物模型，放射線復(fù)制大鼠萎縮性胃炎動(dòng)物模型，手術(shù)方法復(fù)制大鼠肺水腫動(dòng)物模型，以及放射線復(fù)制大鼠、小鼠、狗放射病模型等。采取物理原因復(fù)制動(dòng)物模型比較直觀、簡(jiǎn)便，是較常見方法。人類疾病模型第15頁(2)化學(xué)原因誘發(fā)動(dòng)物模型常見化學(xué)原因如化學(xué)藥致癌、化學(xué)毒物中毒、強(qiáng)酸強(qiáng)堿燒傷、某種有機(jī)成份增加或降低造成營養(yǎng)性疾病等。應(yīng)用化學(xué)物質(zhì)復(fù)制動(dòng)物模型，如應(yīng)用羥基乙胺復(fù)制大鼠急性十二指腸潰瘍動(dòng)物模型、應(yīng)用D-氨基半乳糖復(fù)制大鼠肝硬化動(dòng)物模型、以乙基亞硝基脲復(fù)制大鼠神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤動(dòng)物模型、以缺碘飼料復(fù)制大鼠缺碘性甲狀腺腫動(dòng)物模型和應(yīng)用膽固醇、膽鹽、甲基巰氧嘧啶及動(dòng)物脂肪油復(fù)制雞、兔、大鼠動(dòng)脈粥樣硬化癥動(dòng)物模型。不一樣品種、品系動(dòng)物對(duì)化學(xué)藥品耐受量不一樣，在應(yīng)用時(shí)應(yīng)引發(fā)注意。有些化學(xué)藥品代謝易造成許多組織、器官損傷，有可能影響試驗(yàn)觀察，應(yīng)在預(yù)試驗(yàn)中探索好穩(wěn)定試驗(yàn)條件。人類疾病模型第16頁(3)生物原因誘發(fā)動(dòng)物模型常見生物原因如細(xì)菌、病毒、寄生蟲、生物毒素等。在人類疾病中，由生物原因造成發(fā)生人畜共患病(傳染性或非傳染性)占很大百分比。傳染病、寄生蟲病、微生物學(xué)和免疫學(xué)等研究經(jīng)常使用生物原因復(fù)制動(dòng)物模型。如以柯薩奇B族病毒復(fù)制小鼠、大鼠、豬等心肌炎動(dòng)物模型；以福氏Ⅳ型痢疾桿菌或志賀桿菌復(fù)制猴細(xì)菌性痢疾動(dòng)物模型；以錐蟲病原體感染小鼠，復(fù)制錐蟲病小鼠動(dòng)物模型；以鉤端螺旋體感染豚鼠，復(fù)制由鉤端螺旋體引發(fā)肺出血?jiǎng)游锬Ｐ?。人類疾病模型?7頁(4)復(fù)合原因誘發(fā)動(dòng)物模型以上3種誘發(fā)動(dòng)物模型原因都是單一，有些疾病模型應(yīng)用單一原因誘發(fā)難以到達(dá)試驗(yàn)要求，必須使用各種復(fù)合原因誘導(dǎo)才能復(fù)制成功，這些動(dòng)物模型復(fù)制往往需要時(shí)間較長，方法比較繁瑣，但其與人類疾病比較相同。如復(fù)制大鼠或豚鼠慢性支氣管炎動(dòng)物模型可使用細(xì)菌加嚴(yán)寒方法或香煙加嚴(yán)寒，也可使用細(xì)菌加二氧化硫等方法來復(fù)制；以四氯化碳(40％棉籽油溶液)、膽固醇、乙醇等原因復(fù)制大鼠肝硬化動(dòng)物模型；以二甲基偶氮苯胺和60Co射線方法復(fù)制大鼠肝癌動(dòng)物模型。人類疾病模型第18頁2．自發(fā)性動(dòng)物模型(spontaneousanimalmodel)

指試驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下自發(fā)產(chǎn)生或因?yàn)榛蛲蛔儺惓１憩F(xiàn)經(jīng)過遺傳育種伎倆保留下來動(dòng)物模型。自發(fā)性動(dòng)物模型以腫瘤和遺傳疾病居多，可分為代謝性疾病、分子性疾病和特種蛋白合成異常性疾病等。應(yīng)用自發(fā)性動(dòng)物模型最大優(yōu)點(diǎn)是其完全在自然條件下發(fā)生疾病，排除了人為原因，疾病發(fā)生、發(fā)展與人類對(duì)應(yīng)疾病很相同，其應(yīng)用價(jià)值很高，如自發(fā)性高血壓大鼠、肥胖癥小鼠、腦中風(fēng)大鼠等。人類疾病模型第19頁

其問題是許多這類動(dòng)物模型起源比較困難，種類有限。動(dòng)物自發(fā)性腫瘤模型因試驗(yàn)動(dòng)物品種、品系不一樣，其腫瘤所發(fā)生類型和發(fā)病機(jī)制也有差異。因?yàn)檎T發(fā)性動(dòng)物模型和自發(fā)性動(dòng)物模型有一定差異，加之有些人類疾病至今尚不能用人工方法在動(dòng)物身上誘發(fā)出來，所以近十幾年來醫(yī)學(xué)界對(duì)自發(fā)性動(dòng)物模型應(yīng)用和開發(fā)十分重視。許多學(xué)者經(jīng)過對(duì)不一樣種動(dòng)物疾病進(jìn)行大量普查，以發(fā)覺自發(fā)性疾病動(dòng)物，然后經(jīng)過遺傳育種將自發(fā)性疾病保持下去，并培育成含有該病表現(xiàn)癥狀和特定遺傳性狀基因突變動(dòng)物，供試驗(yàn)研究應(yīng)用。人類疾病模型第20頁3．抗疾病型動(dòng)物模型(negativeanimalmodel)

是指特定疾病不會(huì)在某種動(dòng)物身上發(fā)生，從而能夠用來探討為何這種動(dòng)物對(duì)該疾病有天然抵抗力。如哺乳動(dòng)物均易感染血吸蟲病，而居于洞庭湖流域東方田鼠卻不能復(fù)制血吸蟲病，所以將之用于血吸蟲病發(fā)病機(jī)制和抗病機(jī)制研究。

人類疾病模型第21頁4.生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型(biomedicalanimalmodel)

指利用健康動(dòng)物生物學(xué)特征來提供人類疾病相同表現(xiàn)疾病模型。如沙鼠缺乏完整基底動(dòng)脈環(huán)，左右大腦供血相對(duì)獨(dú)立，是研究中風(fēng)理想動(dòng)物模型；鹿正常紅細(xì)胞是鐮刀形，多年來被供作鐮刀形紅細(xì)胞貧血研究；兔胸腔特殊結(jié)構(gòu)用于胸外手術(shù)研究比較方便；但這類動(dòng)物模型與人類疾病存在著一定差異，研究人員應(yīng)加以分析比較。人類疾病模型第22頁(二)按系統(tǒng)范圍分類

1．疾病基礎(chǔ)病理過程動(dòng)物模型(animalmodeloffundamentlypathologicprocessesofdisease)

指各種疾病共同性一些病理改變過程模型。致病原因在一定條件下作用于動(dòng)物，使動(dòng)物組織、器官或全身造成一定病理損傷，出現(xiàn)功效、代謝和形態(tài)結(jié)構(gòu)一些改變，其中有改變是許多疾病都可能共有，不是某種疾病所特有改變，如發(fā)燒、缺氧、水腫、休克、彌散性血管內(nèi)凝血、電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)等，均可稱為疾病基礎(chǔ)病理過程。人類疾病模型第23頁2．各系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型(animalmodelofdifferentsystemdisease)

指與人類各系統(tǒng)疾病對(duì)應(yīng)人類疾病動(dòng)物模型。各系統(tǒng)疾病模型分為消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型，呼吸、心血管、泌尿、神經(jīng)、血液與造血、內(nèi)分泌、骨骼等系統(tǒng)動(dòng)物模型，還包含按科分類，如傳染病、婦科病、兒科病、皮膚科病、五官科病、外科病、寄生蟲病、地方病、維生素缺乏病、物理損傷疾病和職業(yè)病等動(dòng)物模型。人類疾病模型第24頁(三)按模型種類分類疾病模型種類包含整體動(dòng)物、離體器官和組織、細(xì)胞株和數(shù)學(xué)模型。整體動(dòng)物模型是常見疾病模型，也是研究人類疾病常見伎倆。人類疾病模型第25頁(四)按中醫(yī)藥體系分類祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)源遠(yuǎn)流長數(shù)千年，自1960年有些人復(fù)制小鼠陽虛動(dòng)物模型至今已經(jīng)有30多年，在此期間中醫(yī)藥動(dòng)物模型迅猛發(fā)展，已形成獨(dú)特較完整體系，以其獨(dú)特理論體系“辨證論治”；獨(dú)特評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，證、病、癥；獨(dú)特處置辦法，中藥、針灸、養(yǎng)生；獨(dú)特觀察指標(biāo)，舌、脈、汗、神、色；獨(dú)特認(rèn)識(shí)特色，審證求因，形成中醫(yī)藥動(dòng)物模型體系，進(jìn)入了人類疾病動(dòng)物模型大家族，成為一支不可缺乏生力軍。人類疾病模型第26頁

四、影響動(dòng)物模型質(zhì)量原因

1．致模原因?qū)?dòng)物模型復(fù)制影響選擇好致模原因是復(fù)制動(dòng)物模型第一步。應(yīng)明確研究目標(biāo)，清楚對(duì)應(yīng)人類疾病發(fā)生、臨床癥狀和發(fā)病機(jī)制，熟悉致病原因?qū)?dòng)物所產(chǎn)生臨床癥狀和發(fā)病情況，致病原因劑量。人類疾病模型第27頁2．動(dòng)物原因?qū)?dòng)物模型復(fù)制影響復(fù)制動(dòng)物模型動(dòng)物種類繁多，如試驗(yàn)動(dòng)物、家養(yǎng)動(dòng)物和野生動(dòng)物。野生動(dòng)物屬自然生態(tài)類型，其微生物感染復(fù)雜，遺傳背景不清楚，起源困難，極難喂養(yǎng)，所以不便使用；家養(yǎng)動(dòng)物喂養(yǎng)方便，起源輕易，但微生物控制不嚴(yán)，遺傳背景不清楚也不提倡使用；應(yīng)盡可能使用標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)動(dòng)物。另外，動(dòng)物種類、品系、年紀(jì)和體重、性別、生理狀態(tài)和健康原因等均對(duì)動(dòng)物模型質(zhì)量有不一樣程度影響。人類疾病模型第28頁3．試驗(yàn)技術(shù)原因?qū)?dòng)物模型復(fù)制影響

(2)試驗(yàn)季節(jié)動(dòng)物體對(duì)外界反應(yīng)情況，一樣受春、夏、秋、冬不一樣季節(jié)影響，不一樣試驗(yàn)季節(jié)，動(dòng)物機(jī)體反應(yīng)性在一些方面有一定改變，這種影響在進(jìn)行跨季節(jié)動(dòng)物模型試驗(yàn)時(shí)應(yīng)引發(fā)重視。

(2)晝夜不一樣時(shí)間影響試驗(yàn)動(dòng)物體溫、血糖、基礎(chǔ)代謝率、內(nèi)分泌激素分泌等伴隨晝夜不一樣發(fā)生節(jié)律性改變。在復(fù)制動(dòng)物模型進(jìn)行試驗(yàn)研究時(shí)，應(yīng)注意試驗(yàn)中某種處理時(shí)間次序?qū)Y(jié)果影響。人類疾病模型第29頁(3)麻醉深度影響在復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)往往需要將動(dòng)物麻醉后才能進(jìn)行各種手術(shù)，實(shí)施一些致模原因。不一樣麻醉藥品和不一樣麻醉劑量有不一樣藥理作用和不良反應(yīng)，如麻醉過深動(dòng)物處于深度抑制狀態(tài)，甚至瀕死狀態(tài)，動(dòng)物各種反應(yīng)受到抑制，結(jié)果可靠性受影響；麻醉過淺，在動(dòng)物身上進(jìn)行手術(shù)或?qū)嵤┮恍┲履Ｔ?，將造成?dòng)物強(qiáng)烈疼痛刺激，引發(fā)動(dòng)物全身尤其是呼吸、循環(huán)、消化等功效發(fā)生改變，一樣會(huì)影響造模準(zhǔn)確性。人類疾病模型第30頁(4)手術(shù)技巧影響在試驗(yàn)手術(shù)造模時(shí)，首先要選擇好最正確手術(shù)路線，以免過大、過繁手術(shù)給機(jī)體帶來影響。手術(shù)技術(shù)熟練是否也是影響原因，技術(shù)熟練能夠降低對(duì)動(dòng)物刺激、創(chuàng)傷和出血，將提升造模成功率。

(5)試驗(yàn)給藥影響在造模過程中給藥是常規(guī)工作，但對(duì)造模也是影響原因，如給藥路徑、劑量、熟練程度等影響。

(6)對(duì)照組對(duì)造模影響在復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)經(jīng)常因忽略或錯(cuò)誤應(yīng)用對(duì)照問題，而造成動(dòng)物模型失敗或誤導(dǎo)錯(cuò)誤結(jié)論，應(yīng)依據(jù)不一樣要求設(shè)置好對(duì)照組。人類疾病模型第31頁4．環(huán)境原因和營養(yǎng)原因?qū)?fù)制動(dòng)物模型影響營養(yǎng)原因?qū)?fù)制動(dòng)物模型，尤其是長久試驗(yàn)，影響顯著，應(yīng)給予重視。如采取國家標(biāo)準(zhǔn)飼料則問題就會(huì)處理。造模過程中應(yīng)注意給水量充分和給予符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)飲水。環(huán)境原因是影響造模及其試驗(yàn)結(jié)果主要原因，居住條件、飼料、營養(yǎng)、光照、噪聲、氨濃度、溫度、濕度、氣流速度等任何一項(xiàng)都不容忽略。人類疾病模型第32頁第二節(jié)免疫缺點(diǎn)動(dòng)物

一、概述免疫缺點(diǎn)動(dòng)物是指因?yàn)橄忍煨赃z傳突變或用人工方法造成一個(gè)或各種免疫系統(tǒng)組成成份缺點(diǎn)動(dòng)物。1962年，蘇格蘭醫(yī)師Issacson等首先發(fā)覺無胸腺裸小鼠。1969年，丹麥學(xué)者Rygaard首次成功地將人類惡性腫瘤移植于裸小鼠體內(nèi)，在裸小鼠體內(nèi)腫瘤存活并生長，開創(chuàng)了免疫缺點(diǎn)動(dòng)物研究和應(yīng)用新局面。從此，免疫缺點(diǎn)動(dòng)物逐步廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究，成為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和遺傳學(xué)研究等主要模型動(dòng)物，受到越來越親密關(guān)注。人類疾病模型第33頁

二、免疫缺點(diǎn)動(dòng)物分類當(dāng)前，世界各國相繼培育出一系列免疫缺點(diǎn)動(dòng)物，從嚙齒類擴(kuò)展到馬和牛等大型哺乳類動(dòng)物，從單一T淋巴細(xì)胞免疫缺點(diǎn)到幾個(gè)免疫細(xì)胞聯(lián)合缺點(diǎn)，如T和NK細(xì)胞，T和B細(xì)胞以及T、B和NK細(xì)胞聯(lián)合免疫缺點(diǎn)動(dòng)物；從自發(fā)突變先天性免疫缺點(diǎn)到后天取得性免疫缺點(diǎn)。本節(jié)著重介紹先天性免疫缺點(diǎn)小鼠和大鼠。人類疾病模型第34頁

三、常見免疫缺點(diǎn)動(dòng)物生物學(xué)特征

(一)裸小鼠指先天性無胸腺、無毛裸體小鼠，常簡(jiǎn)稱裸小鼠。造成這種異常狀態(tài)裸基因(nu)是一個(gè)隱性突變基因，位于11號(hào)染色體上。當(dāng)前裸基因已經(jīng)回交到不一樣小鼠品系中，即將其導(dǎo)人不一樣遺傳背景。帶有裸基因小鼠品系包含NIH-nu、BALB/c-nu、C3H-nu和C57BL/6-nu等。各個(gè)品系裸小鼠因其遺傳背景不一樣，所表現(xiàn)細(xì)胞免疫反應(yīng)和試驗(yàn)檢驗(yàn)指標(biāo)也不盡相同。人類疾病模型第35頁

帶有純合裸基因小鼠含有兩個(gè)主要缺點(diǎn)特征：①毛發(fā)生長發(fā)育異常；表現(xiàn)為全身形似無毛。呈裸體外表；②無胸腺，僅有胸腺殘跡或僅有異常胸腺上皮，這種上皮不能使T細(xì)胞正常分化，缺乏成熟T細(xì)胞輔助、抑制及殺傷功效，因而細(xì)胞免疫力低下，不能執(zhí)行正常T細(xì)胞功效。另外，B細(xì)胞功效基礎(chǔ)正常，成年裸小鼠（6～8周齡）較普通鼠有較高水平NK細(xì)胞活性，但幼鼠（3～4周齡）NK細(xì)胞活性低下。裸小鼠粒細(xì)胞數(shù)比普通小鼠低。裸小鼠問世五十多年來，已廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、寄生蟲學(xué)、毒理學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中。人類疾病模型第36頁(二)裸大鼠裸大鼠(nuderat)在1953年由英國Rowett首先發(fā)覺，基因符號(hào)為rnu，純合子裸大鼠(rnu／rnu)含有與裸小鼠基礎(chǔ)相同特征，無胸腺，缺乏功效性T淋巴細(xì)胞，B細(xì)胞功效基礎(chǔ)正常，NK細(xì)胞活力增強(qiáng)，抵抗力差，易患呼吸道疾病，繁殖方法與裸小鼠相同，但軀干部仍有稀少被毛而并非像裸小鼠那樣完全無毛，頭部及四肢更多。裸大鼠一樣能接收人類正常組織和腫瘤異種移植，但因其體型大，用一只裸大鼠可為常規(guī)血液學(xué)和血清生物化學(xué)分析試驗(yàn)提供足夠血樣，也可為各種研究提供足夠瘤組織，同時(shí)裸大鼠易于進(jìn)行外科手術(shù)，為各種部位腫瘤移植和腫瘤供血研究提供了方便。人類疾病模型第37頁(三)性連鎖免疫缺點(diǎn)小鼠（X-linkedimmunedeficiencymouse，XID）起源于CBA/N品系，又稱CBA/N小鼠，其B細(xì)胞功效缺點(diǎn)，基因符號(hào)xid，位于X性染色體上。純合子雌鼠(xid/xid)和雜合子雄鼠(xid/Y)對(duì)非胸腺依賴性Ⅱ型抗原沒有體液免疫反應(yīng)，血清中IgM和IgG含量較低，對(duì)B細(xì)胞分裂素(B-cellmitogens）缺乏反應(yīng)，分泌IgM和IgG亞類B細(xì)胞數(shù)量降低，其T細(xì)胞功效正常。假如移植正常鼠骨髓到xid宿主，B細(xì)胞缺損可得到恢復(fù)。相反，把xid鼠骨髓移植給放射線照射同系正常宿主，受體動(dòng)物依然表現(xiàn)為不正常表型。該模型是研究B淋巴細(xì)胞發(fā)生、功效與異質(zhì)性理想動(dòng)物，其病理與人類Bruton丙種球蛋白缺乏癥和Wzeskott-Aidsch綜合征相同。人類疾病模型第38頁(四)Beige小鼠為NK細(xì)胞活性缺點(diǎn)突變系小鼠，bg是隱性突變基因，位于13號(hào)染色體上。純合鼠(bg/bg)被毛完整，但毛色變淺，耳郭和尾尖色素降低，出生時(shí)眼睛顏色很淡。表型特征與人齊-希氏綜合征(Chediak-Higashisyndrome)相同。其內(nèi)源性NK細(xì)胞功效缺乏，是因?yàn)榧?xì)胞溶解作用后識(shí)別過程受損傷所致。純合bg基因同時(shí)還損傷細(xì)胞毒T細(xì)胞功效，降低粒細(xì)胞趨化性和殺菌活性，延遲巨噬細(xì)胞調(diào)整抗腫瘤殺傷作用發(fā)生，還影響溶酶體發(fā)生過程，造成溶酶體膜缺損，使相關(guān)細(xì)胞中溶酶體增大，溶酶體功效缺點(diǎn)。因?yàn)槿苊阁w功效缺點(diǎn)，bg對(duì)化膿性細(xì)菌感染非常敏感，對(duì)各種病原因子也都較敏感，所以要在SPF或無菌環(huán)境中才能很好地生存。人類疾病模型第39頁(五)嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺點(diǎn)小鼠

(severecombinedimmunodeficientmice，SCID小鼠)，1983年美國學(xué)者Bosma發(fā)覺于C.B-17近交系，位于16號(hào)染色體scid單個(gè)隱性突變基因所致。純合scid基因造成控制淋巴細(xì)胞抗原受體基因VDJ編碼次序重組酶活性異常，使VDJ區(qū)域重排，裂端不能正常連接，重排后抗原受體基因出現(xiàn)缺失和異常，進(jìn)而造成T、B細(xì)胞本身不能分化成特異性功效淋巴細(xì)胞。C.B-17與BALB/cAnlcr是同源近交系，該品系小鼠除了攜帶來自C57BL/ka免疫球蛋白重鏈Igh-1b等位基因與BALB/cAnlcr不一樣外，兩品系小鼠其余基因完全相同，故C.B-17突變系SCID小鼠(C.B-17scid/scid)與BALB/cAnlcr遺傳背景基礎(chǔ)相同，其H-2抗原均為H-2d。人類疾病模型第40頁

另外，當(dāng)前已經(jīng)有C3H-scid等其它品系小鼠遺傳背景SCID小鼠出現(xiàn)。SCID小鼠外觀與普通小鼠無異，體重發(fā)育正常，但胸腺、脾、淋巴結(jié)重量普通均不及正常30％，組織學(xué)上表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞顯著缺乏。其胸腺多為脂肪組織包圍，沒有皮質(zhì)結(jié)構(gòu)，僅殘余髓質(zhì)，主要由類上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞組成，邊緣偶見灶狀淋巴細(xì)胞群。脾白髓不顯著，紅髓正常，脾小體無淋巴細(xì)胞聚集，主要由網(wǎng)狀細(xì)胞組成。淋巴結(jié)無顯著皮質(zhì)區(qū)，副皮質(zhì)區(qū)缺失，呈淋巴細(xì)胞脫空狀，由網(wǎng)狀細(xì)胞所占據(jù)。小腸黏膜下和支氣管淋巴集結(jié)較少見，結(jié)構(gòu)內(nèi)無淋巴細(xì)胞聚集。其骨髓結(jié)構(gòu)正常。其外周血白細(xì)胞較少，淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)10％～20％，而正常小鼠應(yīng)占約70％。人類疾病模型第41頁SCID小鼠全部T和B淋巴細(xì)胞功效測(cè)試均為陰性，對(duì)外源性抗原無細(xì)胞免疫及抗體反應(yīng)，體內(nèi)缺乏攜帶前B細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞。不過，其非淋巴性造血細(xì)胞分化不受突變基因影響，巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、紅細(xì)胞等呈正常狀態(tài)。自然殺傷(NK)細(xì)胞及淋巴因子激活(LAK)細(xì)胞也呈正常狀態(tài)。值得注意是少數(shù)SCID小鼠可出現(xiàn)極小程度免疫功效恢復(fù)，此即為SCID小鼠滲漏現(xiàn)象。其滲漏特征不遺傳，但與小鼠年紀(jì)、品系、喂養(yǎng)環(huán)境相關(guān)。在SPF環(huán)境下，SCID小鼠壽命可達(dá)1年，兩性均能生育，但胎仔數(shù)只有3～5個(gè)。人類疾病模型第42頁(六)Motheaten小鼠突變基因(me)位于第6對(duì)染色體上，出生后2h內(nèi)即可出現(xiàn)皮膚膿腫，有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺點(diǎn)，表現(xiàn)為對(duì)胸腺依賴和不依賴抗原均無反應(yīng)，對(duì)T、B細(xì)胞分裂素增殖反應(yīng)嚴(yán)重受損，細(xì)胞毒和NK細(xì)胞活性減低。純合型(me/me)還伴有本身免疫傾向，免疫復(fù)合物可沉積在腎、肺、皮膚。該系小鼠對(duì)判別生命早期免疫功效缺點(diǎn)和某種本身免疫性疾病發(fā)生都是有用模型。人類疾病模型第43頁(七)人工培育先天性聯(lián)合免疫缺點(diǎn)型小鼠國外將分布于3種小鼠3個(gè)隱性突變基因即NK細(xì)胞缺點(diǎn)beige基因、T細(xì)胞缺點(diǎn)nu基因以及B細(xì)胞缺點(diǎn)xid基因經(jīng)過雜交、篩選并導(dǎo)入，育成了T、B、NK細(xì)胞三聯(lián)免疫缺點(diǎn)beige-nude-xid小鼠。人類疾病模型第44頁(八)顯性半肢畸形小鼠

(dominanthemimeliamice)其基因符號(hào)為Dh，是顯性突變基因，位于1號(hào)染色體上，現(xiàn)有品系為B6C6-Dh。純合子（Dh/+）缺乏脾臟，其泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、消化道和骨骼有一定程度畸形?；伟l(fā)生于早期胚胎臟壁中胚層。因?yàn)槿逼?，在一定程度上損傷了體液免疫反應(yīng)。這種小鼠無需特殊喂養(yǎng)條件。假如將nu基因和Dh基因結(jié)合在一起，即可培育出無胸腺和無脾臟La-sat小鼠。人類疾病模型第45頁人類疾病模型第46頁人類疾病模型第47頁第三節(jié)腫瘤動(dòng)物模型

腫瘤動(dòng)物模型(animalmodelsoftumor)在腫瘤病因?qū)W、發(fā)病機(jī)制及防治等方面研究上含有主要意義。本節(jié)介紹誘發(fā)性動(dòng)物腫瘤模型和動(dòng)物自發(fā)性腫瘤及可移植瘤株。人類疾病模型第48頁

一、誘發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型

(animalmodelofinducedtumor)指使用致癌原因(carcinogens)在試驗(yàn)條件下誘發(fā)動(dòng)物發(fā)生腫瘤動(dòng)物模型，它是進(jìn)行試驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)研究常見方法。常見于驗(yàn)證可疑致癌原因作用，也越來越多地應(yīng)用于腫瘤發(fā)生機(jī)理研究及防治效果觀察上，在腫瘤病因?qū)W、遺傳學(xué)、生物學(xué)等方面研究中有主要地位。因?yàn)檎T發(fā)原因和條件可人為控制，誘發(fā)率遠(yuǎn)高于自然發(fā)病率，故在腫瘤試驗(yàn)研究中優(yōu)于自發(fā)瘤。用于誘發(fā)試驗(yàn)性腫瘤動(dòng)物種類很多，它們因種族不一樣而對(duì)相同致癌原因有不一樣反應(yīng)性。常見動(dòng)物以哺乳動(dòng)物為主，其中嚙齒類動(dòng)物使用最多，應(yīng)用最廣，包含各種大鼠、小鼠、豚鼠等。人類疾病模型第49頁

誘發(fā)性腫瘤模型原理是利用外源性致癌原因引發(fā)細(xì)胞遺傳特征異常而展現(xiàn)出異常生長和高增殖活性，形成腫瘤。致癌原因主要有化學(xué)性、物理性及生物性致癌物，而化學(xué)性致癌物(chemicalcarcinogens)最常見，已確知多達(dá)一千余種，用于誘發(fā)試驗(yàn)性腫瘤種類亦很多，如苯并芘、甲基膽蒽、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉毒素類。各種致癌物致癌強(qiáng)度、致癌譜等特征相差較大，同一個(gè)致癌物經(jīng)不一樣路徑給藥所致腫瘤部位或類型可有很大差異。有些化學(xué)性致癌物含有顯著親器官或組織特征。所以，試驗(yàn)工作中應(yīng)依據(jù)需要選取適當(dāng)致癌物和致癌路徑，并確定其它影響原因或試驗(yàn)條件。人類疾病模型第50頁(一)誘發(fā)方法誘發(fā)性動(dòng)物腫瘤誘發(fā)方式包含原位誘發(fā)和異位誘發(fā)。原位誘發(fā)是指將致癌物直接與動(dòng)物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可經(jīng)過涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等；異位誘發(fā)是將與致癌物接觸后動(dòng)物組織或器官埋置于該動(dòng)物或另一正常動(dòng)物皮下而產(chǎn)生該組織或器官腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤含有易于觀察和取材優(yōu)點(diǎn)。人類疾病模型第51頁

放射性物質(zhì)致瘤方法主要是用放射線照射或局部注射同位素。能誘發(fā)動(dòng)物腫瘤病毒亦很多，比如用小鼠白血病病毒(murineleukovirus，MLV)、雞白血病病毒(fowlleukosisvirus，F(xiàn)LV)和貓白血病病毒(felineleukosisvirus，F(xiàn)eLV)分別誘發(fā)小鼠、雞和貓白血??；Rous雞肉瘤病毒可誘發(fā)田鼠、雞、鴨、鵪鶉、猴和蛇等動(dòng)物發(fā)生肉瘤；貓肉瘤病毒(felinesarcomavirus，F(xiàn)SV)可使大鼠、貓、犬和猴發(fā)生肉瘤；人腺病毒能誘發(fā)小鼠、田鼠發(fā)生肉瘤和淋巴瘤。人類疾病模型第52頁

在進(jìn)行誘發(fā)動(dòng)物腫瘤試驗(yàn)中，應(yīng)盡可能簡(jiǎn)便可行，有很好重復(fù)性，并利于與人腫瘤比較研究；選擇對(duì)所用致癌物敏感方法和種系動(dòng)物。致癌物劑量應(yīng)能確保動(dòng)物存活率較高、誘發(fā)期較短而又可誘發(fā)較高頻率腫瘤。常見給藥基礎(chǔ)方法和路徑有口服、注入、埋藏和涂抹等方式。

1．涂抹法將致癌物涂抹于動(dòng)物背側(cè)及耳部皮膚，主要用于誘發(fā)皮膚腫瘤(如乳頭狀瘤、鱗癌等)。常見致癌物有煤焦油、3，4-苯并芘及20-甲基膽蒽等。人類疾病模型第53頁2．經(jīng)口給藥法本法是將化學(xué)致癌物溶于飲水或以某種方式混合于動(dòng)物食物中自然喂養(yǎng)或灌喂動(dòng)物而使之發(fā)生腫瘤。食管癌、胃癌、大腸癌等腫瘤常見此方法。

3．注射法注射法是將化學(xué)致癌物制成溶液或懸浮物，經(jīng)皮下、肌肉、靜脈或體腔等路徑注入體內(nèi)而誘發(fā)腫瘤。本法亦常見，其中皮下和靜脈注射又最常見。

4．氣管灌注法常見于誘發(fā)肺癌。將顆粒性致癌物制成懸浮液直接注入或用導(dǎo)液管注入動(dòng)物氣管內(nèi)。多使用金倉鼠和大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物。人類疾病模型第54頁5．穿線法適合用于將多環(huán)芳烴類致癌物直接置于某特定部位或器官，如宮頸、食管和腺胃等。方法是將一定量致癌物放置于無菌試管內(nèi)，加熱使致癌物升華，吸附于預(yù)制線結(jié)上；將含有致癌物線結(jié)穿人靶器官或靶組織而誘發(fā)腫瘤。

6．埋藏法將致癌物包埋于皮下或其它組織內(nèi)，或?qū)⒔?jīng)致癌物作用過器官、組織移植于同種或同種系動(dòng)物皮下進(jìn)行腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)。人類疾病模型第55頁(二)常見腫瘤動(dòng)物模型

1．肺癌(carcinomaofthelung)

誘發(fā)模型較多，方法也很成熟。常見方法有：

(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)小鼠肺癌模型：采取小白鼠每七天皮下注射l%DEN水溶液一次(劑量為56mg/kg體重，總劑量為868mg)。觀察時(shí)間100天左右。此模型誘發(fā)率約40％。若將DEN總劑量增到1176mg時(shí)，六個(gè)月誘發(fā)率可達(dá)90％以上。人類疾病模型第56頁(2)烏拉坦誘發(fā)肺多發(fā)性腫瘤模型采取A系小鼠(1～1.5月齡)，每次每只腹腔注射10％烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3ml，間隔3～5天，共注射2～3個(gè)月，每只動(dòng)物用量共約100mg。觀察3個(gè)月，誘發(fā)率可達(dá)100％。(3)氣管內(nèi)灌注致癌物誘發(fā)肺癌模型向氣管內(nèi)注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠或甲基膽蒽等物質(zhì)。常見有：①猴氣管內(nèi)灌注3,4-苯并芘與氧化鐵混合液，每七天1次，共10次，可誘發(fā)肺鱗狀細(xì)胞癌。②大鼠吸入硫酸銨氣溶劑可誘發(fā)肺腺癌。人類疾病模型第57頁

2．鼻咽癌(nasopharyngeal

carcinoma)(1)二甲基膽蒽(DMC)誘發(fā)大鼠鼻咽癌模型將結(jié)晶DMC置于錐形塑料管中(可用直徑2～3mm硬質(zhì)塑料管在酒精燈上拉制)，使塑料管尖端進(jìn)入并長久留置鼻咽腔。MC循小孔遲緩溢出，至六個(gè)月以上，取材。誘發(fā)率可達(dá)60％以上。

(2)二乙基亞硝胺(DEN)滴鼻法誘發(fā)大鼠鼻咽癌用磨平針尖8號(hào)針頭從前鼻插入大白鼠(體重120g左右)鼻咽腔，經(jīng)注射器灌注1％吐溫80新配33.3％DEN混懸液0.02m1，每七天1次，共15～20次。人類疾病模型第58頁3．食管癌(carcinomaoftheesophagus)(1)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)大鼠食管癌模型將MBNA溶于飲水中，并摻人飼料，喂養(yǎng)Wistar大鼠(體重100g以上)，使之每日攝入量達(dá)0.75～1.5mg/kg體重，經(jīng)3個(gè)月左右可誘發(fā)食管癌。亦可用0.2％或0.005％MBNA水溶液給大鼠經(jīng)口灌喂，天天1次(1mg/kg體重)，經(jīng)11個(gè)月可使誘發(fā)率達(dá)53％。

(2)二烴黃樟素(Dihydrosaforle)誘發(fā)大鼠食管癌模型將二烴黃樟素加入大鼠飼料(濃度2500～10000mg/kg)喂養(yǎng)大鼠，誘發(fā)率達(dá)20％～75％。人類疾病模型第59頁4．胃癌(carcinomaofthestomach)(1)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)小鼠胃癌模型用細(xì)線打結(jié)后，使MC加溫液化并滲人線結(jié)中；小鼠(體重20g左右)腺胃粘膜面穿掛含MC線結(jié)。埋線后4～8個(gè)周可成功地誘發(fā)胃癌。MC濃度為0.5～0.1g20-甲基膽蒽浸入10～20根線。

(2)不對(duì)稱亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌模型用0.25mg/kg體重不對(duì)稱亞硝胺，經(jīng)7～8個(gè)月可誘發(fā)昆明種小鼠前胃癌。人類疾病模型第60頁(3)甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)大鼠胃癌模型在SD大鼠飲水中按2mg/kg體重加入甲基亞硝基醋酸尿素，每七天5次飲用，經(jīng)520天可使100％大鼠發(fā)生腺胃癌。

(4)金黃倉鼠胃癌模型雄性金黃倉鼠口服甲基硝基亞硝基胍(MNNG)（83ug/m1）4個(gè)月，約1年后30％～40％倉鼠發(fā)生胃腺癌并出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移。亦可用濃度為91ug/ml乙基硝基亞硝基胍(ENNG)口服喂養(yǎng)雄性金黃倉鼠12個(gè)月，可誘發(fā)胃腺癌和十二指腸腺癌。另外，用MNNG（125ug/ml水溶液）經(jīng)口給藥，亦可使A/Jms、RP/Jms等系小鼠誘發(fā)胃癌。人類疾病模型第61頁(5)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)小鼠前胃癌模型選取A系、昆明種或615系小鼠，以天天0.25或1mg/kg體重劑量用40.07％MBNA水溶液灌胃，天天1次。第7～8個(gè)月可誘發(fā)出85％～100％前胃鱗狀細(xì)胞癌。

(6)肌氨酸乙酯和亞硝酸鈉誘發(fā)雞胃癌模型采取6月齡林縣家雞，喂以肌氨酸乙酯及亞硝酸鈉，誘發(fā)家雞腺胃腺癌。人類疾病模型第62頁5.大腸癌(carcinomaofthelargeintestine)(1)二甲基芐肼（DMH）誘發(fā)大腸癌模型將DMH先配成濃度為100ml中含400mg溶液，加入EDTA27mg，用0.1mol/LNaOH將pH值調(diào)整至6.5。用上述DMH經(jīng)皮下注射給4周齡雄性Wistar大鼠，每次劑量21mg/kg體重，每七天1次，連續(xù)21周；最終一次給藥后l～4周處死動(dòng)物。

(2)甲基硝基亞硝基胍(MNNG)誘發(fā)大鼠大腸癌模型用MNNG在Wistar大鼠采取直腸灌人法誘發(fā)大腸癌。人類疾病模型第63頁6．肝癌(carcinomaoftheliver)(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)大白鼠肝癌模型

0.25％DEN水溶液灌胃(按10mg/kg體重)，每七天剩下6d用0.025％DEN水溶液讓其自由飲用。共約4個(gè)月即可誘發(fā)出肝癌，5～6個(gè)月誘癌率達(dá)80％以上。亦可用0.005％DEN飲水喂養(yǎng)8個(gè)月誘發(fā)。

(2)4-二甲基氨基偶氮苯(DAB)誘發(fā)大鼠肝癌模型使用含有0.06％DAB飼料喂養(yǎng)大鼠，同時(shí)控制飼料中維生素B2含量(不超出1.5～2mg/kg體重)。經(jīng)4～6個(gè)月可誘發(fā)成功。人類疾病模型第64頁(3)2-乙酰氨基芴(2AAF)誘發(fā)動(dòng)物肝癌給成年大鼠含0.03％2AAF標(biāo)準(zhǔn)飼料，每日每只2～3mg2AAF，經(jīng)3～4個(gè)月即可誘發(fā)成功。此方法也可用于誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔等動(dòng)物肝癌。(4)亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發(fā)小鼠肝癌用1％OAAT苯溶液涂于動(dòng)物兩肩胛間皮膚上，隔日1次，每次2～3滴，普通涂100次。7個(gè)月以上誘發(fā)肝腫瘤率55％。亦可用2.5mgOAAT溶于葵花籽油中，皮下注射C3H小鼠，每10天一次。

(5)黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌在大鼠飼料中加入黃曲霉素，含0.011～0.015mg/kg，喂養(yǎng)6個(gè)月，誘發(fā)率達(dá)80％。人類疾病模型第65頁(6)二甲氨誘發(fā)肝癌模型將二甲氨用食用菜油配制成3％溶液，按98g精白碎米加2ml3%二甲氨溶液百分比配制飼料(相當(dāng)于每克碎米含0.06mg二甲氨)，喂養(yǎng)雄性大白鼠(體重150～200g)4～6周，停藥1周(以精白碎米代替)，后改用基礎(chǔ)飼料加0.12％二甲氨繼續(xù)喂養(yǎng)12～13周，即可誘發(fā)出肝癌。

(7)黃曲霉素B2誘發(fā)麻鴨肝癌模型采取半月齡雛鴨，自由食取肝癌高發(fā)區(qū)啟東霉玉米配合飼料(內(nèi)含黃曲霉素B1)，同時(shí)飲高發(fā)區(qū)淺井水，直至動(dòng)物自然死亡，可見麻鴨發(fā)生肝細(xì)胞癌。人類疾病模型第66頁7．腦腫瘤(braintumor)(1)乙基亞硝基脲(ENU)誘發(fā)大鼠膠質(zhì)瘤用0.5％～1％ENU按60mg/kg體重給藥于Wistar大鼠。給藥路徑有兩種，即經(jīng)孕鼠胎盤給藥致其子代鼠成瘤和經(jīng)新生幼鼠皮下給藥致瘤。前者是選取正常妊娠健康Wistar大鼠(體重340g左右)，在妊娠晚期(距預(yù)產(chǎn)期前7天)經(jīng)尾靜脈一次性遲緩注射1％ENU溶液；后者是選取3日齡健康Wistar大鼠(體重約4g)，于肩胛部或腰骶部一次性皮下注射0.5％ENU溶液。觀察12個(gè)月，誘發(fā)出腦、脊髓膠質(zhì)瘤。用此方法誘發(fā)膠質(zhì)瘤在組織學(xué)上以混合性少突星形細(xì)胞瘤為主，偶伴發(fā)腎纖維肉瘤和肺癌。人類疾病模型第67頁(2)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)腦腫瘤藏旭等用20％MC膽固醇小塊埋入A系、C3HA系或昆明種小鼠大腦頂部皮層內(nèi)，誘發(fā)出大腦膠質(zhì)瘤和纖維肉瘤。

8.宮頸癌(cervicalcarcinoma)

用穿線法將附有0.1mgMC棉紗線結(jié)穿入雌性小白鼠宮頸部，并固定縫線。觀察六個(gè)月左右處死動(dòng)物，取宮頸組織。人類疾病模型第68頁

二、動(dòng)物自發(fā)性腫瘤及移植瘤株人類腫瘤在試驗(yàn)動(dòng)物中幾乎都能找到相同腫瘤性疾病。利用高發(fā)病率品系動(dòng)物研究自發(fā)性腫瘤性疾病，更能靠近人群發(fā)病情況，對(duì)研究人體腫瘤防治有主要意義。人類疾病模型第69頁

動(dòng)物自發(fā)性腫瘤(spontaneoustumorsinanimals)是指試驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何有意識(shí)人工處置，在自然情況下所發(fā)生腫瘤。動(dòng)物自發(fā)瘤發(fā)生于近交系動(dòng)物，隨試驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系不一樣，腫瘤發(fā)生類型和發(fā)病率有很大差異。其中，小鼠各種自發(fā)性腫瘤在腫瘤發(fā)生、發(fā)展研究中含有主要意義。自發(fā)性腫瘤模型與誘發(fā)性腫瘤模型含有一定差異(如對(duì)藥品敏感性是不一樣)，但大個(gè)別自發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型是經(jīng)過人為定向培養(yǎng)而成，畢竟不一樣于人類自然發(fā)病情況，所以自發(fā)瘤模型和誘發(fā)瘤模型之間優(yōu)缺點(diǎn)是相正確。當(dāng)前研究自發(fā)瘤動(dòng)物主要為哺乳類和鳥類。人類疾病模型第70頁(一)動(dòng)物移植瘤瘤株腫瘤移植試驗(yàn)在腫瘤研究中含有主要作用。動(dòng)物自發(fā)瘤可移植性腫瘤就是將動(dòng)物自發(fā)性腫瘤移植到同系、同種或異種動(dòng)物體內(nèi)生長并經(jīng)傳代后組織學(xué)類型穩(wěn)定，生長特征(包含接種成活率、生長速度、自動(dòng)消退率、宿主壽命與宿主反應(yīng)等)已趨穩(wěn)定；其侵襲和轉(zhuǎn)移生物學(xué)特征，以及對(duì)化療藥品敏感程度均已確定；能在同種或異種動(dòng)物體內(nèi)繼續(xù)傳代，形成可移植性腫瘤即瘤株。人類疾病模型第71頁

移植瘤株穩(wěn)定性至關(guān)主要。為了到達(dá)可靠穩(wěn)定性，通常需連續(xù)傳代15～20代。但即使已建立瘤株再傳代后，其生物學(xué)特征亦可發(fā)生一定程度改變，如形態(tài)學(xué)上改變、惡性程度以及轉(zhuǎn)移特征改變等。移植瘤建立方法普通是選擇自發(fā)瘤或誘發(fā)瘤組織塊，無菌條件下放人組織培養(yǎng)皿內(nèi)，按1︰（3～5）百分比加入滅菌生理鹽水，制成瘤細(xì)胞懸液。取濃度約為106～107/ml細(xì)胞懸液0.2ml接種于同系雌性小鼠皮下。如此傳代，使其移植成功率、生物學(xué)特征等趨于穩(wěn)定。亦可采取組織塊接種法。腹水瘤移植方法為直接將抽取含瘤細(xì)胞腹水(0.1～0.2ml）接種于動(dòng)物腹腔。人類疾病模型第72頁(二)常見動(dòng)物自發(fā)瘤移植瘤株

1．小鼠可移植性乳腺癌黃華漳等于1973年采取TA2系小鼠自發(fā)乳腺癌，接種同系雌性小鼠皮下，建立移植瘤成功。孫文義等亦建立了TA2系小鼠自發(fā)B型乳腺癌瘤株MA-737，該移植瘤含有肺轉(zhuǎn)移和侵襲腹腔特征。今后又相繼在615系小鼠自發(fā)B型乳腺癌建立瘤株(如鄭升等建立Ca615，張鴻翔等建立MC-615，劉金友等建立Ca759和Ca763，劉世葉等建立Ma782/5S，張眾等建立B0和B9。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院建立MAC887和MAC-891，還建立了為數(shù)不多小鼠自發(fā)型乳腺癌可移植性瘤株(如錢振超等建立Ca761及中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院建立MAC-8712等)。人類疾病模型第73頁

魏泓等于1989年用BALB/c雌性小鼠自發(fā)乳腺梭形細(xì)胞癌，建立了可移植性乳腺梭形細(xì)胞癌株SCC-891，生物學(xué)特征穩(wěn)定，不出現(xiàn)腫瘤自然消退現(xiàn)象；反抗癌藥敏感性廣泛。這一特殊類型乳腺腫瘤瘤株建立為試驗(yàn)?zāi)[瘤藥及抗癌藥篩選提供了有用研究工具，同時(shí)因?yàn)槭褂昧藨?yīng)用最廣泛近交系BALB/c小鼠而方便了該瘤株研究和使用。除上述品系小鼠外，沈德鈞等于1990年用12月齡NIH雌性種小鼠自發(fā)B型乳腺癌在同系小鼠皮下移植，傳代建立了ZMB-902瘤株。人類疾病模型第74頁2．小鼠可移植性肺腺癌吳德全等于1976年用18月齡雄性615系小鼠自發(fā)肺乳頭狀腺癌組織采取埋塊法在同系成年小鼠皮下移植及傳代，建立P615瘤株。該瘤株可在CFWX615系小鼠皮下移植，成功率達(dá)100％，腹腔內(nèi)移植成功率達(dá)100％。錢振超等于1978年也建立了615近交系小鼠肺腺癌瘤株HP615，馬克韶等采取615系雄性小鼠與昆明種雌性小鼠培養(yǎng)出T739近交系小鼠自發(fā)乳頭型肺腺癌建立移植瘤株LA-795，含有高侵襲性轉(zhuǎn)移率。人類疾病模型第75頁3．小鼠可移植性肝癌小鼠肝癌瘤株建立可經(jīng)過動(dòng)物自發(fā)瘤或化學(xué)誘發(fā)瘤。錢振超等用10月齡第5l代經(jīng)產(chǎn)雌615系小鼠自發(fā)性肝細(xì)胞癌，在同系小鼠建立了H615瘤株；強(qiáng)家模等用二乙基亞硝胺(DENA)喂Wistar大鼠誘發(fā)肝細(xì)胞癌，移植到經(jīng)免疫抑制Wistar幼大鼠腹腔內(nèi)并傳代。亦可皮下或肝內(nèi)移植，建株各代宿主血清甲胎蛋白(a-fetoprotein，AFP)均陽性。人類疾病模型第76頁4．小鼠可移植性宮頸癌小鼠宮頸癌瘤株多用誘發(fā)瘤移植建立。楊滋等于1958年采取含20-甲基膽蒽線結(jié)穿入KM幼鼠宮頸誘發(fā)出鱗狀細(xì)胞癌后，接種KM雌小鼠皮下移植及傳代，建立小鼠宮頸未分化癌瘤株U14，移植成功率達(dá)96.7％。薛克勛等于1986年用U14瘤株復(fù)蘇后移植于615雌小鼠皮下并傳代，仍保持原生物學(xué)特征，移植率達(dá)100％。

5．小鼠可移植性食管癌我國建立小鼠可移植性食管癌瘤株較少，主要是丁瑞等建立SGA-73食管鱗癌瘤株。該瘤株是由甲基膽蒽異位誘發(fā)津白1系小鼠食管鱗癌在同系小鼠皮下移植，傳代而建立，已傳40代以上。人類疾病模型第77頁6．小鼠可移植性胃腫瘤

20世紀(jì)70年代我國先后建立了幾個(gè)胃腫瘤瘤株。林柄水等用甲基亞硝基脲灌胃法誘發(fā)津白1系小鼠前胃鱗狀細(xì)胞癌，在同系小鼠皮下移植、傳代，建立GS-741瘤株。李寶貴等利用甲基芐基亞硝胺灌喂615系小鼠胃鱗癌，同系小鼠皮下移植后傳代，建立FC瘤株。之后，林炳水等又用甲基膽蒽原位掛線法在津白2系小鼠誘發(fā)胃纖維肉瘤并建株S-784。該瘤株傳百多代，生物學(xué)特征穩(wěn)定。FC瘤株還含有侵襲肌組織能力和很高肺轉(zhuǎn)移率（86％～90％)。人類疾病模型第78頁7．小鼠可移植性腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤早在1957年，中央衛(wèi)生研究院(現(xiàn)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院)病理室就采取20-甲基膽蒽溶于膽固醇中，埋置于KM小鼠大腦皮層誘法未分化神經(jīng)膠質(zhì)瘤(即膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)在同系小鼠皮下移植及傳代建立B22瘤株。移植成功率達(dá)100％，已傳數(shù)百代，平均生存時(shí)間為2～4周。陳炳恒等于1964年用上述相同方法也建立KM小鼠可移植性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤株G422，可在同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植(成功率均為100％)，已傳350余代，無自發(fā)消退。還未見采取動(dòng)物自發(fā)腦瘤建株報(bào)道。人類疾病模型第79頁8.動(dòng)物可移植性肉瘤劉家勇等于1978年TA1系小鼠自發(fā)性纖維肉瘤同系雄小鼠皮下移植并傳代，建立小鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率100％，已傳86代。李殿俊等用3，4-苯并芘誘發(fā)WKA大鼠皮下纖維肉瘤移植于經(jīng)免疫抑制同系大鼠皮下，建立WBT-2大鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率達(dá)100％（包含肌肉、腹腔移植），無自然消退現(xiàn)象。以此瘤株經(jīng)WKA大鼠靜脈接種，屢次連續(xù)移植，又建立了可移植性肺轉(zhuǎn)移肉瘤瘤株WBT-2M，其肺轉(zhuǎn)移率可達(dá)100％。今后于1981年我國又建立615系小鼠纖維肉瘤瘤株FSC。它是由甲基膽蒽碘油皮下注射誘發(fā)纖維肉瘤經(jīng)移植傳代而建立。人類疾病模型第80頁

滑膜肉瘤是動(dòng)物一個(gè)少見腫瘤，錢振超等利用615系小鼠自發(fā)性滑膜肉瘤在同系小鼠皮下移植和傳代，建立ZM755瘤株，并已傳200多代。除大鼠和小鼠外其它動(dòng)物可移植性肉瘤報(bào)道極少。章魁華等于1982年應(yīng)用二甲基苯并蒽丙酮液在敘利亞金黃地鼠采取涂抹頰囊粘膜方法誘發(fā)頰肉瘤（組織起源不明），并在同種封閉群小鼠頰粘膜下、皮下或腹腔內(nèi)移植或傳代，成功率均為100％。移植后含有侵襲周圍組織能力和肺及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性(轉(zhuǎn)移率分別為9％和12％)。人類疾病模型第81頁9．小鼠可移植性淋巴造血系腫瘤我國已建立動(dòng)物淋巴造血系腫瘤(主要包含惡性淋巴瘤和白血病)可移植瘤株幾乎均建立于小鼠，其中惡性淋巴瘤瘤株有楊簡(jiǎn)等建立L1及其腹水瘤、錢振超等建立L797及其腹水瘤、孫慧等建立L-TA2等，白血病瘤株有陳妙蘭等建立LⅢ、李敏民建立L615等。值得一提是，因?yàn)槿藧盒粤馨土龇诸惙椒ㄟM(jìn)展較快，動(dòng)物淋巴瘤一些名稱顯得陳舊、混亂，亟待統(tǒng)一。人類疾病模型第82頁第四節(jié)系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

一、消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

(一)肝、膽、胰腺疾病動(dòng)物模型

1．肝纖維化動(dòng)物模型(animalmodelofliverfibrosis)

任何可引發(fā)肝損傷原因長久、重復(fù)作用于肝臟，均可產(chǎn)生肝細(xì)胞變性、壞死，繼而肝細(xì)胞再生和纖維組織增生，造成肝纖維化，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展為肝硬化、肝癌等?；诖嗽斫⒘嗽S多肝纖維化模型、化學(xué)性損傷模型、免疫性模型、生物學(xué)模型、乙醇性模型和營養(yǎng)性模型。人類疾病模型第83頁(1)免疫性肝纖維化模型免疫性肝纖維化產(chǎn)生機(jī)制是由Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)引發(fā)，白蛋白和血清大分子物質(zhì)，作為異種抗原進(jìn)入大鼠體內(nèi)后，刺激其產(chǎn)生對(duì)應(yīng)抗體，當(dāng)抗原再次進(jìn)入機(jī)體后抗原抗體結(jié)合，形成抗原-抗體免疫復(fù)合物(IC)，IC可激活(或結(jié)合)補(bǔ)體，因?yàn)榭乖貜?fù)、長久刺激，過量免疫復(fù)合物來不及被去除，沉積于肝臟血管壁內(nèi)外，引發(fā)血管炎和血管周圍炎，造成肝損傷，形成廣泛進(jìn)行性慢性炎癥病變。如此重復(fù)造成肝細(xì)胞變性、壞死，肝細(xì)胞再生，纖維增生等改變，最終發(fā)展為肝纖維化、肝硬化。人類疾病模型第84頁

動(dòng)物選取雄性Wistar大鼠，體重130g左右。取豬血清0.5ml，腹腔內(nèi)注射。每七天2次，共8次(豬血清制備：取新鮮豬血，離心制血清，濾過除菌，分裝放低溫冰箱備用)。大鼠于第3周出現(xiàn)較多肝細(xì)胞變性、壞死，第4周增生膠原纖維形成纖維束，呈侵襲性生長，從中央靜脈到門管區(qū)之間相互伸延，發(fā)生肝纖維化。該模型特點(diǎn)：①肝纖維化出現(xiàn)得早，出現(xiàn)率高達(dá)86.7％；②對(duì)動(dòng)物整體損傷輕微，動(dòng)物毛發(fā)光澤、生長、發(fā)育情況與正常無區(qū)分；③肝纖維化組織中大量膠原增生，故Ⅲ、Ⅳ型前膠原mRNA增多。人類疾病模型第85頁

臨床上，慢性活動(dòng)性肝炎患者循環(huán)免疫復(fù)合物多為陽性，故豬血清模型可用于慢性肝炎所致肝纖維化研究，對(duì)于研究免疫復(fù)合物形成、沉積和去除及對(duì)于防治免疫損傷性肝纖維化有效藥品篩選，含有理論和實(shí)際意義。人類疾病模型第86頁(2)化學(xué)損傷性肝纖維化動(dòng)物模型雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射，第一次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每七天注射2次，共8周。硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片肝細(xì)胞變性壞死和炎細(xì)胞浸潤，變性、壞死細(xì)胞數(shù)和嚴(yán)重程度顯著超出豬血清模型，炎細(xì)胞浸潤也超出豬血模型。6周后出現(xiàn)增生纖維束，纖維增生顯著晚于和少于豬血清肝纖維化模型。化學(xué)損傷性肝纖維化模型中肝細(xì)胞變性壞死，比免疫性肝纖維化模型嚴(yán)重且炎癥細(xì)胞浸潤顯著，在其大鼠肝纖維組織中有I型膠原mRNA增多，轉(zhuǎn)化生長因子β1排顯著增多。人類疾病模型第87頁(3)四氯化碳肝硬化動(dòng)物模型

Wistar或SD大鼠，體重180～200g，皮下注射40％～50％四氯化碳油溶液(0.3ml/100g體重)，每七天2次，第2周始，隔日以20％～30％乙醇1ml灌胃(或作為唯一飲料)，飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)，共10周。試驗(yàn)中大鼠成活率60％～80％。四氯化碳所致高膽固醇飲食大鼠肝硬化是當(dāng)前我國外常采取動(dòng)物模型，該模型可靠且復(fù)制時(shí)間短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝硬化發(fā)生發(fā)展過程動(dòng)態(tài)研究。人類疾病模型第88頁2．膽石癥動(dòng)物模型(animalmodelofcholelithiasis)

我國人群中膽結(jié)石疾病，尤其是原發(fā)性膽管結(jié)石發(fā)病率高，手術(shù)后復(fù)發(fā)又非常普遍，最終常因重復(fù)感染發(fā)生膽汁性肝硬化而死亡。所以是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中極為主要課題之一。多年來對(duì)膽結(jié)石病研究和診療水平有了很大提升和發(fā)展，但臨床上開展膽石癥治療研究依然存在著一定不足，所以臨床研究不易獲取符合研究需要，系統(tǒng)性和可比性病理標(biāo)本。而膽結(jié)石動(dòng)物模型建立為臨床研究膽石癥開辟了一條新研究路徑。自從1952年Dam及Christensen以倉鼠成功地復(fù)制成膽固醇結(jié)石試驗(yàn)動(dòng)物模型以來，各國學(xué)者廣泛地開展了這方面研究。人類疾病模型第89頁

動(dòng)物可用敘利亞倉鼠、健康成年家兔、大鼠、家犬或猴等，詳細(xì)方法有：

(1)食餌法：①選取敘利亞倉鼠，50～60g左右，基礎(chǔ)食餌特點(diǎn)為高糖，不含不飽和脂肪酸。食餌配制方法：蔗糖74％，酪蛋白2l％，食鹽4.4％，膽堿0.1％，濃縮魚肝油0.5％。按每只倉鼠每日5～9g，分兩次喂養(yǎng)，同時(shí)每七天喂青菜、麥芽1～2次，以補(bǔ)充維生素等，維持動(dòng)物生命。14～21d倉鼠膽囊內(nèi)形成顯著結(jié)石，22d后成石率高達(dá)100％。②選取雌性豚鼠，體重250～300g。成石飼料配制：在基礎(chǔ)食物中加入酪蛋白1％，蔗糖1.5％，豬油1％，纖維素1％，膽酸0.02％，膽固醇0.05％。2個(gè)月后在90％豚鼠膽囊中可產(chǎn)生以膽色素為主結(jié)石，其成份和結(jié)構(gòu)與人類膽色素結(jié)石相同。人類疾病模型第90頁③選取成年家犬，成石飼料成份：50％蔗糖、10％酪蛋白、20％玉米淀粉、5％動(dòng)物油、1％膽固醇，輔以礦物質(zhì)和維生素，特點(diǎn)為高蛋白、高碳水化合物，其中膽固醇為關(guān)鍵成份。12周后結(jié)石成石率達(dá)100％，結(jié)石為膽色素結(jié)石。本模型適合用于飲食與結(jié)石生成關(guān)系及代謝和防治研究，以及膽石生成過程中膽色素、膽汁酸和糖蛋白三者間相互關(guān)系研究。人類疾病模型第91頁(2)感染成石法健康成年家兔，大鼠或家犬，采取無菌條件下剖腹術(shù)，顯露十二指腸，從十二指腸乳頭逆行插入一塑料管進(jìn)入膽囊，從中注入蛔蟲卵或大腸桿菌懸液。蛔蟲卵懸液濃度為每毫升含3萬～15萬個(gè)蛔蟲卵。7個(gè)月后膽囊呈慢性炎癥，囊內(nèi)結(jié)石形成。此模型除用于防治研究外，還可進(jìn)行相關(guān)膽系感染功效代謝改變分析與觀察研究。人類疾病模型第92頁(3)狹窄成石法可選取健康成年家兔、家犬或猴，家兔誘發(fā)率高。①膽囊結(jié)扎法：健康成年家兔，無菌條件下剖腹手術(shù)，分清膽管與肝管，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住膽囊頸部以產(chǎn)生個(gè)別梗阻。6個(gè)月后膽囊中有顯著結(jié)石形成。②膽總管結(jié)扎法：家兔剖腹后顯露膽總管，在十二指腸上緣處預(yù)先經(jīng)雙鯨蠟基-26烷磷酸鈉(dicetylsodiumphosphate)浸漬外敷纖維素粘膠(cellophane)細(xì)帶松松結(jié)扎一道。4個(gè)月后出現(xiàn)膽總管狹窄或完全梗阻，70％～80％出現(xiàn)膽囊結(jié)石，這種結(jié)石質(zhì)軟，色深，有屬于純膽色素結(jié)石，但大多為含膽色素與膽固醇混合結(jié)石，此試驗(yàn)?zāi)Ｐ涂捎糜谶M(jìn)行膽色素混合結(jié)石發(fā)病學(xué)與防治研究。人類疾病模型第93頁(4)切除迷走神經(jīng)干成石法健康成年家兔或狗，性別不拘。①采取無菌手術(shù)探明家兔膽道及膽囊正常，然后顯露胃、賁門及食管，將食管懸吊，顯露兩側(cè)迷走神經(jīng)干，從食管下端切除兩側(cè)迷走神經(jīng)干各1.5～2.0cm。手術(shù)結(jié)束后，在腹腔內(nèi)注入50％葡萄糖20ml，術(shù)后繼續(xù)禁食16～20h。術(shù)后家兔膽汁成份顯著改變，4～5周有膽固醇結(jié)石形成。人類疾病模型第94頁②將狗麻醉后行無菌剖腹術(shù)。在隔下右側(cè)腎上腺上方找出右側(cè)內(nèi)臟大神經(jīng)，用止血鉗小心分離，直達(dá)交感神經(jīng)節(jié)，在神經(jīng)干局部撒無菌浮石粉(pumicepowder，一個(gè)對(duì)神經(jīng)組織有刺激作用物質(zhì))，將放藥粉局部與腹腔內(nèi)臟分隔，再沿胃賁門上至食管，切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)干，隨即縫合腹膜，術(shù)后2個(gè)月剖腹檢驗(yàn)，可見多數(shù)動(dòng)物展現(xiàn)慢性或亞急性膽囊炎改變，組織學(xué)檢驗(yàn)顯示膽囊粘膜下水腫，有淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤和不一樣程度結(jié)締組織增生，約有半數(shù)個(gè)體膽囊內(nèi)可找到大小不一、單個(gè)或多個(gè)膽色素結(jié)石。此模型可用于探討中西藥品治療辦法，或?qū)δ懯纬珊湍懙拦πв绊懠捌錂C(jī)制研究。人類疾病模型第95頁3.膽管囊腫動(dòng)物模型(animalmodelofbileductcyst)

膽管囊腫基礎(chǔ)發(fā)病步驟有：①病變處個(gè)別或全部管壁微弱，可能因胚胎發(fā)育異常或感染，外傷或胰管系結(jié)構(gòu)異常所致胰液逆流而引發(fā)，或者是新生期病變部發(fā)育不全；②在存在或不存在病變部位遠(yuǎn)側(cè)膽道梗阻情況下，肝膽汁分泌與膽囊膽汁排泄所致膽道內(nèi)壓增高。膽道梗阻亦可因不一樣先天性或取得性病因而引發(fā)。采取綿羊或山羊(出生后14d內(nèi))，雌雄不拘，詳細(xì)方法為：人類疾病模型第96頁(1)膽總管遠(yuǎn)端結(jié)扎術(shù)戊巴比妥鈉(1.5～4mg/kg體重)腹腔內(nèi)注射麻醉，顯露肝門部，在膽總管與近側(cè)小腸段匯接點(diǎn)上方(普通距幽門約4～5cm)，用1號(hào)絲線將膽總管全周縫扎，造成膽總管完全梗阻，關(guān)腹。

(2)膽總管置管膽囊結(jié)扎術(shù)麻醉、手術(shù)顯露方法同前。用1號(hào)絲線近肝總管處全周縫扎膽囊管，再將膽總管前壁縱行切開，在膽總管內(nèi)置人一硅膠管，內(nèi)徑0.1cm，長約3.0cm，在硅膠管兩端約0.5cm處，分別用1號(hào)絲線全周縫扎肝總管和膽總管，使置入之硅膠管固定在膽管內(nèi)，造成膽總管不全性梗阻。人類疾病模型第97頁

①對(duì)初生體弱動(dòng)物，需要輸液，可在關(guān)腹前腹腔內(nèi)置人熱生理鹽水；②術(shù)后麻醉清醒前注意保溫，預(yù)防肺部感染；③注意勿進(jìn)食過早，以免造成擴(kuò)張，視動(dòng)物情況，能夠喂水、糖或奶粉，2～3d后再輔以青飼料。術(shù)后膽道造影或直接觀察見膽管節(jié)段性擴(kuò)張，寬度達(dá)鄰近膽管3倍或3倍以上，或直接見膽囊憩室，即為復(fù)制成功。

注意事項(xiàng)人類疾病模型第98頁

該模型可應(yīng)用于①為膽管囊腫病發(fā)病學(xué)研究從試驗(yàn)上提供依據(jù)；②研究遠(yuǎn)側(cè)膽道梗阻后梗阻性黃疽近期發(fā)展與后果，以及分析其死亡原因；③不全梗阻可使動(dòng)物在較長時(shí)期內(nèi)成活，這種較長久存活膽汁淤滯膽道擴(kuò)張模型，能夠于探索膽石成因之間關(guān)系及結(jié)石生成規(guī)律，也可對(duì)擴(kuò)張膽道上皮增殖和誘發(fā)腫瘤可能性進(jìn)行觀察。人類疾病模型第99頁4.急性胰腺炎動(dòng)物模型(animalmodelofacutepancreatitis)

理想急性胰腺炎(acutepancreatltls，AP)動(dòng)物模型是研究AP發(fā)病機(jī)制和藥品防治前提。當(dāng)前制備AP模型方法很多，現(xiàn)有一些模型中，有食物(CDED)誘導(dǎo)法、十二指腸閉袢法、總膽管結(jié)扎法或靜脈滴注大劑量鈴蟾肽法等，因?yàn)椴荒芸刂埔认俨∽兂潭龋贿m合于評(píng)價(jià)藥品最大治療效應(yīng)。下面介紹兩種穩(wěn)定、可靠，能反應(yīng)胰腺病變依次加重急性胰腺炎系列模型。人類疾病模型第100頁(1)牛膽酸鈉誘導(dǎo)大鼠急性胰腺炎系列模型

Wistar大鼠，重180～260g；NaTc(Sigma企業(yè)產(chǎn))試驗(yàn)前用生理鹽水配制成1.0％，2.0％，3.5％備用。試驗(yàn)前禁食12h，允許飲水，3％戊巴比妥鈉(40mg/kg體重)腹腔注射麻醉。剖腹后經(jīng)十二指腸用4號(hào)頭皮針頭插入胰管開口，向內(nèi)逆行注入NaTc溶液(0.1ml/100g體重)。1.0％和2.0％NaTc誘導(dǎo)AP后12h，血清淀粉酶依次升高，組織水腫和炎癥細(xì)胞滲出逐步加重，病理學(xué)上屬輕度和重度水腫型急性胰腺炎。人類疾病模型第101頁3.5％NaTc誘導(dǎo)AP后，除血淀粉酶水平連續(xù)升高外，胰腺組織水腫，炎癥細(xì)胞浸潤深入加重，并出現(xiàn)經(jīng)典胰腺細(xì)胞壞死和出血，病理學(xué)上已屬壞死型胰腺炎；電鏡顯示細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)也證實(shí)上述形態(tài)改變。伴隨NaTc誘導(dǎo)濃度提升，胰腺損傷依次加重。本模型適合評(píng)價(jià)藥品對(duì)水腫型和(或)壞死型胰腺炎最大防治效應(yīng)，故含有一定實(shí)用價(jià)值。人類疾病模型第102頁(2)犬急性壞死型胰腺炎模型成年雜種狗，10～15kg，雌雄不拘。試驗(yàn)前禁食12h，不禁水，麻醉后經(jīng)上腹正中切口人腹，尋及十二指腸，于胰管開口附近切開十二指腸壁，置一細(xì)塑料管于主胰管內(nèi)，然后向內(nèi)注入胰蛋白酶和狗本身膽汁混合液2～3ml(0.3ml/kg體重，配方為1ml膽汁+4ml胰酶溶液，內(nèi)含4mg胰蛋白酶)，滯留5min后拔去塑料管，荷包縫合十二指腸壁，關(guān)腹。本試驗(yàn)采取胰管內(nèi)加壓注射本身膽汁和胰蛋白酶混合物，術(shù)后1h即見血清淀粉酶顯著升高，連續(xù)24h，6h達(dá)峰值；胰腺大致和鏡下病理改變呈經(jīng)典壞死、出血及炎癥細(xì)胞浸潤，表明此方法可成功誘發(fā)犬急性壞死性胰腺炎模型。人類疾病模型第103頁5．慢性胰腺炎動(dòng)物模型(animalmodelofchronicpancreatitis)

是因?yàn)檫B續(xù)炎癥造成胰腺功效不可逆性損害。盡管對(duì)該病研究已經(jīng)取得很大進(jìn)展，不過它發(fā)病機(jī)制及與其相關(guān)診療和治療仍有許多問題有待處理。許多學(xué)者在努力尋求適當(dāng)動(dòng)物模型。成年雜種貓，在隔夜禁食后，全麻(30mg/kg體重異戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射)下施行剖腹手術(shù)，將尼龍導(dǎo)管插入主胰管，縫合固定后，燒灼閉合導(dǎo)管外露端，造成主胰管完全梗阻或先將一根尼龍導(dǎo)管插入主胰管內(nèi)，遲緩注入94％乙醇1.5ml，然后截下1cm長導(dǎo)管留置在主胰管內(nèi)，最終用26號(hào)細(xì)針頭均勻點(diǎn)狀注射94%乙醇1.5ml于胰腺實(shí)質(zhì)內(nèi)。人類疾病模型第104頁6周后胰腺小葉變成圓形，被向心性纖維包繞，小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)及其周圍組織都有炎性細(xì)胞浸潤，葉間胰管顯著擴(kuò)張，管腔內(nèi)偶見多形核粒細(xì)胞。11周后胰腺結(jié)構(gòu)發(fā)生嚴(yán)重紊亂。26周后，胰腺小葉數(shù)目降低，間質(zhì)纖維組織顯著增生，單核細(xì)胞浸潤。6周后出現(xiàn)經(jīng)典慢性胰腺炎，26周后慢性胰腺炎發(fā)生率為100％。人類疾病模型第105頁(二)胃腸疾病動(dòng)物模型

1．動(dòng)物胃粘膜腸上皮化生模型(animalmodelofintestinalmetaplasia)(1)烷基硝基亞硝基胍類誘發(fā)胃粘膜腸化生模型伴隨烷基碳原子數(shù)增加，致癌性依次減弱，但誘發(fā)腸化生能力依次增強(qiáng)。其中丙基硝基亞硝基弧(PNNG)是當(dāng)前誘發(fā)動(dòng)物胃粘膜腸化生較為理想藥品。試驗(yàn)動(dòng)物普通選取4～6周齡，體重100～200g雄性大鼠，飲水中加藥，飲水瓶涂成黑色或以錫箔紙包裹，以免致癌物遇光分解。藥品先用去離子水或蒸餾水配制成濃度為1g/L儲(chǔ)存液，4℃保留，天天用前再稀釋成所需濃度溶液，讓動(dòng)物自由飲用。所用劑量為50～83ug/ml，投藥時(shí)間16～20周。人類疾病模型第106頁(2)X線胃局部照射誘發(fā)胃粘膜腸化生模型選取5～8周齡Wistar或JCL/SD大鼠。大鼠麻醉后置于X線光束下，動(dòng)物體用0.6cm厚鉛皮加以保護(hù)，鉛皮中央正對(duì)胃區(qū)處留有直徑為1.8cm小孔，經(jīng)此孔進(jìn)行X線照射。照射劑量每次5Gy，每日1次，共6次。

(3)X線照射和N-甲基-N-硝基亞硝基胍(MNNG)聯(lián)合誘發(fā)鼠胃粘膜腸化生模型

5周齡SD雄性大鼠，先用X線照射，每次0.5G