免疫學(xué)檢測原理及臨床應(yīng)用

相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎:fantibodyfantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實驗室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進行咨詢，期待您的加入*目前一頁\總數(shù)六十頁\編于二點內(nèi)容提要：概念基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測方法免疫細胞檢測免疫分子檢測免疫學(xué)診斷與檢測掌握：原理臨床應(yīng)用*目前二頁\總數(shù)六十頁\編于二點概念：免疫學(xué)細胞生物學(xué)分子生物學(xué)

應(yīng)用：免疫相關(guān)疾病的診斷、病情檢測和療效評價等?？乖贵w免疫細胞細胞因子檢測理論和方法定性定量*目前三頁\總數(shù)六十頁\編于二點第1節(jié)基于抗原-抗體反應(yīng)

（antigenantibodyreaction）的檢測方法一、原理二、反應(yīng)的特點三、影響因素四、基本檢測方法*目前四頁\總數(shù)六十頁\編于二點

一、原理1、抗原抗體反應(yīng)的特異性2、抗原抗體反應(yīng)的可見性

抗原抗體按適當(dāng)比例結(jié)合，形成肉眼可見的現(xiàn)象。*目前五頁\總數(shù)六十頁\編于二點應(yīng)用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。簜?、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體——診斷自身免疫?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關(guān)抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原：確認運動員是否服用興奮劑*目前六頁\總數(shù)六十頁\編于二點（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點特異性帶現(xiàn)象與可見性可逆性取決于抗原表位與抗體高變區(qū)結(jié)合部位空間構(gòu)型的互補的程度親和力（affimity）親合力（avidity）*目前七頁\總數(shù)六十頁\編于二點抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點*目前八頁\總數(shù)六十頁\編于二點可逆性：（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點低pH值高濃度鹽凍融等AgAb解離取決于親和力大小*目前九頁\總數(shù)六十頁\編于二點*目前十頁\總數(shù)六十頁\編于二點（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素電解質(zhì)酸堿度溫度抗原抗體的性質(zhì)*目前十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點1.電解質(zhì)：親水性---------疏水性失去電荷------發(fā)生凝集（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點2、酸堿度：最適pH值：6—8假陽性假陰性（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點3.溫度：適當(dāng)溫度------增加碰撞機會加快結(jié)合速度37℃（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點4、抗原和抗體的性質(zhì)關(guān)鍵因素---特異性和親和力決定因素---二者的比例（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點（三）抗原或抗體的檢測方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補體參與的反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)*目前十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點（一）凝集反應(yīng)（agglutination）顆粒性抗原（紅細胞、細菌、乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見的凝集塊。*目前十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點1、直接凝集(directagglutination)2、間接凝集（indirectagglutination）

3、間接凝集抑制試驗（indirectagglutinationinhibitiontest）4、協(xié)同凝集試驗（co-agglutinationtest）

（一）凝集反應(yīng)（agglutination）*目前十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）可溶性抗原（免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色的沉淀。*目前十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點1、單向免疫擴散

（singleimmunodiffusion）常用于測定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。沉淀環(huán)抗體混于瓊脂凝膠中制板環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān)*目前二十頁\總數(shù)六十頁\編于二點2、雙向免疫擴散（douleimmunodiffusion）：常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關(guān)性分析。*目前二十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis)*目前二十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點4、免疫比濁法（immunonephelomtry）：快速簡便。用于血清IgG、IgA、IgM、補體C3、C4含量測定*目前二十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點（三）補體參與的抗原抗體反應(yīng)1、50%補體溶血試驗（CH50測定）——血清總補體量測定2、補體結(jié)合試驗(complementfixationtest)：檢測抗原或抗體。原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體進行診斷試驗原理？檢測系統(tǒng)：待測樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補體*目前二十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點用標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原進行抗原抗體反應(yīng)借以提高免疫學(xué)診斷的敏感性熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA）

（四）免疫標(biāo)記技術(shù)液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）*目前二十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點1、免疫熒光法

（immunofluorescence,IF）用熒光標(biāo)記抗體，再與待檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)那個，所形成的抗原抗體復(fù)合物在熒光顯微鏡下散發(fā)熒光，借此對抗原進行定性和定量。*目前二十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點間接ELISA雙抗夾心法2、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA法）*目前二十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點

抗細胞因子的抗體包被（1）（2）（3）（4）抗原包被用于效應(yīng)細胞分泌的單一細胞因子的測定，也可測定分泌特異抗體的B細胞的頻數(shù)。*目前二十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點BAS-ELISA法（

biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、RNA的檢測。卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì)*目前二十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點3、免疫組化

(immunohitochemistry)應(yīng)用標(biāo)記的抗體與組織或細胞抗原反應(yīng)，借助形態(tài)學(xué)觀察，對組織或細胞表面抗原進行定性、定量、定位檢測。*目前三十頁\總數(shù)六十頁\編于二點4、放射免疫測定法

（radioimmunassay,RIA）用發(fā)射性核素標(biāo)記抗體或抗原進行免疫學(xué)檢測。*目前三十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點5、化學(xué)發(fā)光免疫分析

（chemiluminescenceimmunoassay）將發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)回復(fù)至穩(wěn)定的基態(tài)時發(fā)射光子，通過自動發(fā)光分析儀測定管子參量，可反應(yīng)樣品中抗體或抗原含量。*目前三十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點6、免疫印記法

（immunoblotting）又稱western印記法：結(jié)合凝膠電泳和固相免疫技術(shù)，將借助電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，在應(yīng)用酶免疫、放射免疫等技術(shù)進行檢測。*目前三十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點第2節(jié)免疫細胞檢測機體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)免疫細胞來源---外周血*目前三十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點（一）免疫細胞及其亞類計數(shù)1、淋巴細胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法白膜層單核細胞淋巴細胞BT吸附分離過尼龍毛柱分離*目前三十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點（1）尼龍棉柱分離法

B細胞滯留與柱上T細胞流出（2）E花環(huán)分離法成熟人T細胞表面有CD2，綿羊紅細胞的受體2、淋巴細胞亞群的分離*目前三十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點（3）洗淘法（panning）

（4）流式細胞儀（flowcytometry,FCM）（5）磁珠分離法：用抗CD4交聯(lián)的微珠可將T細胞中的CD4+T細胞與CD8+T細胞分。*目前三十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點3、淋巴細胞亞群計數(shù)免疫熒光計數(shù)微量細胞毒試驗*目前三十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點

（二）淋巴細胞功能測定1、測定淋巴細胞功能的體外試驗（1）T細胞增殖試驗（淋轉(zhuǎn)）：絲裂原、抗CD3單克隆抗體等能非特異地激活T細胞，使之發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖，計算淋巴母細胞轉(zhuǎn)化率（正常值65~80%）*目前三十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點1、細胞增殖試驗具體方法①形態(tài)學(xué)觀察法②3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測定樣品的β射線放射活性③MTT法*目前四十頁\總數(shù)六十頁\編于二點——檢測CTL、NK、LAK、TIL細胞殺傷靶細胞的功能①51Cr釋放法②乳酸脫氫酶釋放法③細胞凋亡檢查法：TUNEL法（TdTdependentdUTP-biotinnickendlabeling）、FACS測定法（2）淋巴細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗（LMC）*目前四十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點（3）分泌功能測定檢測細胞因子分泌細胞檢測抗體形成細胞2、測定淋巴細胞功能的體內(nèi)試驗結(jié)合菌素試驗—遲發(fā)型超敏反應(yīng)*目前四十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點遲發(fā)型超敏反應(yīng)：舊結(jié)核菌素試驗（OT試驗）皮試（+）——有一定的細胞免疫能力皮試（—）——細胞免疫功能缺損*目前四十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點第3節(jié)免疫分子檢測（一）免疫球蛋白測定1、體外用已知抗原檢測相應(yīng)抗體2、用已知抗體定性、定量測定各類免疫球蛋白*目前四十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點（二）補體測定免疫比濁法ELISARIA*目前四十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點（三）細胞因子檢測1.免疫學(xué)測定法鑒定分離的淋巴細胞亞群，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN、TNF等檢測①ELISA法②生物活性測定法③聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法*目前四十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點（三）細胞因子檢測2.生物活性測定法原理：不同細胞因子具有特定的生物學(xué)活性，借助相應(yīng)指示系統(tǒng)與之反應(yīng)，從結(jié)果得知細胞因子的活性*目前四十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點2.生物活性測定法

促進細胞增殖和增殖抑制法抗病毒活性測定法直接殺傷法趨化活性測定法3.分子生物學(xué)測定法PCR*目前四十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點（四）CD分子、表面受體和粘附分子的測定（五）HLA分型*目前四十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點第23章免疫學(xué)防治免疫學(xué)預(yù)防免疫學(xué)治療*目前五十頁\總數(shù)六十頁\編于二點（一）人工主動免疫（artificialactiveimmunization）——用疫苗、類毒素接種機體，使之產(chǎn)生特異性的免疫，從而預(yù)防感染的措施。一、人工免疫免疫預(yù)防*目前五十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點

人工主動免疫

常用制劑——疫苗、類毒素

死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。

減毒活疫苗：是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。

類毒素：細菌外毒素經(jīng)甲醛處理后，失去毒性而保留其免疫原性即為類毒素。常用的類毒素有破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素等。目前五十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!死疫苗和活疫苗的比較*目前五十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點（二）新型疫苗亞單位疫苗—乙肝表面抗原制備乙肝疫苗結(jié)合疫苗合成肽疫苗基因工程疫苗（三）核酸疫苗*目前五十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點