第十二章臨床血液檢驗演示文稿

第十二章臨床血液檢驗演示文稿2023/5/71目前一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點優(yōu)選第十二章臨床血液檢驗目前二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗尿液檢驗糞便檢驗瘤胃液的檢驗穿刺液的檢驗常見毒物的檢驗目前三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點第一節(jié)血液檢驗血液檢驗是臨床醫(yī)學檢驗中應用最廣，對輔助診斷最有價值，最常用的基本內(nèi)容之一。血液是由血漿和血細胞兩部分組成，是通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個組織器官密切聯(lián)系，參與機體呼吸、運輸、防御，調(diào)節(jié)生理，維持正常新陳代謝和內(nèi)外環(huán)境平衡的。目前四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液全血血漿血清血液學檢查血細胞計數(shù)分類與形態(tài)檢查血漿生理和病理檢驗內(nèi)分泌激素生化與免疫學檢查目前五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點臨床血液學檢查內(nèi)容物理學檢查：借助物理學方法測定其物理特性，如凝血時間、紅細胞脆性、紅細胞沉降率、紅細胞壓積?；瘜W檢驗：即用定性或定量的化學分析方法，檢測被檢標本各種化學成分方面的變化，如血紅蛋白的檢查。顯微鏡檢查：檢查其血細胞的形態(tài)及數(shù)量的變化，如紅細胞，白細胞，血小板等。目前六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點一、血液的采集與血涂片的制作目前七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液樣本的采取與抗凝血液樣本的采取

采血的部位和方法，根據(jù)檢驗的項目、所需血量和動物種類的不同，可分為毛細血管采血、靜脈采血和心臟采血。毛細血管采血法

適用于采血量少，血液不加抗凝劑而且直接在現(xiàn)場檢驗的項目。如涂血片，血紅蛋白測定、血細胞計數(shù)等。馬、?？稍诙獠?，豬，羊，兔等在耳背邊緣小靜脈，雞則在冠或肉髯。

采血前先剪毛，酒精棉球消毒，待酒精揮發(fā)后，用消毒的干燥的針頭迅速刺入2-3mm深，讓血液自然流出，且勿擠壓以免混入過多組織液。流出的第一滴血，可用于制作血片，然后用干棉球擦去局部的剩余血液，用流出的第二滴血液作紅、白細胞計數(shù)和血紅蛋白測定，若利用第三滴血時，仍要將第二滴血擦干，否則流出的血不能形成滴狀，不易吸取。靜脈采血法馬、牛、羊可由頸靜脈采血。豬可選用前腔靜脈采血；雞可由翼下靜脈采血，即用細針頭刺入翼下靜脈后，任血液自行流出并接入試管中。犬、貓可于小腿外側跖背外側靜脈或前臂內(nèi)側皮下靜脈采血。局部剪毛消毒，用止血帶扎住采血部上端，使靜脈怒張，用消毒、干燥的注射器接上針頭，針頭斜上面刺入靜脈采血，待抽至所需量后，先放松止血帶，再用消毒棉球按住傷口，拔出針頭。除去針頭，將血液緩緩注入清潔的試管內(nèi)。需抗凝血液時，試管內(nèi)加抗凝劑，并立即混勻，以免凝固。心臟采血法多用于兔、雞及實驗動物需多量血液時，雞可由胸腔入口處向心臟刺入由于心腔壓力較靜脈高，血液自然涌入注射器，兔及雞亦可在左側胸部第1、2肋間，心搏動明顯處，針頭與胸壁呈垂直方向緩緩刺入。目前八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

豬的前腔靜脈采血目前九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

馬的頸靜脈采血目前十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點兔的耳靜脈采血目前十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液的抗凝草酸鹽是常用的抗凝劑，每可抗凝1.0ml血液，可用于血液常規(guī)檢驗。因?qū)t細胞大小有影響，故不能用紅細胞壓積測定，如測定紅細胞壓積時，可用雙草酸鹽抗凝劑或乙二胺四乙酸二鈉。雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g草酸銨1.2g蒸餾水加至100ml溶解后吸取0.5ml，加入供采血試管或小瓶中，置干燥箱內(nèi)（溫度不超過80℃）烘干備用，可供5ml全血抗凝。目前十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗乙二胺四乙酸（EDTA

）鹽可適用于一般的血液學檢查，特別是血小板計數(shù)，但因為影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，不適合于血象及血小板功能檢查。（EDTA－Na2－H2O）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。（EDTA－K2－2H2O）1%溶液0.1ml可使5ml血液不凝固。全血細胞分析及血細胞比容測定。3.8%枸櫞酸鈉溶液每1ml可使4ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能檢查。因其毒性小又可作為血液保養(yǎng)液。但不適用于血液化學檢驗。由于抗凝劑溶解緩慢，故只能配成溶液，不能用粉劑。目前十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗肝素肝素價格最貴，其優(yōu)點是抗凝作用強，不影響血細胞的體積，不致溶血等，可用于多種血液生物化學分析和紅細胞壓積測定。但過量的肝素可引起白細胞聚集和血小板減少，故不適用于白細胞和血小板計數(shù)，也不適用于血涂片檢查，因其在瑞氏染色時會出現(xiàn)藍色背景，更不能用于血液學一般檢查。肝素是生理性抗凝劑,廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有的組織和細胞周圍，肥大細胞和嗜堿性粒細胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團的黏多糖?？鼓龣C制較為復雜，主要是加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。通常用肝素粉劑配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶內(nèi)，放于37～50℃中烘干后貯于冰箱內(nèi)保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝劑應及時使用，放置過久易失效。目前十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

如分離血清，應將全血采集在試管中（不加抗凝劑），在室溫下或25-37℃溫水中斜置，血清析出后即可分離。血漿應在抗凝血采集后離心分離。血液采集后應盡快送檢和檢測。不能立即送檢的血樣，血片應固定，抗凝血、血漿和血清應冷藏。送檢血樣應編號，并避免劇烈振搖。血液學檢查項目與血樣保存的期限見下表

血樣的處理檢查項目保存時間（h）檢查項目保存時間（h）白細胞計數(shù)2-3血紅蛋白含量48紅細胞計數(shù)24紅細胞壓積容量24血小板計數(shù)1紅細胞沉降速率2-3網(wǎng)織紅細胞計數(shù)2-3白細胞分類計數(shù)1-2注意:懷疑傳染病時，采血應防止到處流散，檢后殘余血液及所用器皿應進行消毒處理。目前十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞背景知識

紅細胞也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細胞，同時也是脊椎動物體內(nèi)通過血液運送氧氣的最主要的媒介。在所有的脊椎動物及若干無脊椎動物，其血紅素包含在特定的細胞中來進行其機能活動，這種血球稱為紅細胞。其它的血細胞，如白血球，則是免疫細胞。目前十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點目前十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結合，因此紅細胞能通過血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過紅細胞運到肺部并被排出體外。血紅蛋白更易和一氧化碳相合，當空氣中一氧化碳含量增高時，可引起一氧化碳中毒。紅細胞和血紅蛋白的數(shù)量減少到一定程度時，稱為貧血。紅細胞大量被破壞可引起溶血性黃疸。紅細胞描述：多，小而圓，中央著色較淺，無核。禽類稱為凝血細胞，一般為卵圓形，有細胞核，比哺乳動物的大得多，數(shù)量少。目前十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液涂片的制備和細胞染色１、涂片的制作目前十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

選取一張邊緣平滑的載玻片作為推片(最好此載玻片稍窄或磨去兩角),用左手的拇指與中指夾持一張載玻片，取被檢血液一滴(最好是未加抗凝劑的新鮮血)置載玻片的一端，然后右手持推片傾斜30-40°角，由血滴的前方向后接觸血滴，待血液擴散成線狀后，立即以均等的速度輕而平穩(wěn)地向前推進，即形成血膜。目前二十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點涂片時，血滴越大，角度越大，推片速度越快，則血膜越厚，反之則血膜越薄。白細胞分類計數(shù)的血片宜稍厚，進行紅細胞形態(tài)及血原蟲檢查的血片宜稍薄。一張良好的血片，要求厚薄適宜，血液分布均勻，對光觀察呈霓虹色，邊緣整齊，能明顯分出頭，體，尾三部分，兩側留有空隙(以寫明畜別，編號、日期)。血膜分布不勻，主要是由于推片不齊，用力不勻，玻片不潔所致。推好的血片可在空氣中揮動，使其迅速干燥，以防細胞皺縮變形，并盡快固定染色。目前二十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點為了觀察細胞內(nèi)部結構，識別各種細胞及其異常變化，血涂片必須進行染色。原理染色是染料透入被染物并留存其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質(zhì)不同，對染料的親和力也不一樣。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結合，染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細胞核蛋白和淋巴細胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染成紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍均可結合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。２、細胞染色目前二十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點瑞氏染色法姬姆薩氏染色法瑞－姬氏復合染色法目前二十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點（１）瑞氏染色法●瑞氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料亞甲藍●瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。將染色粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此繼續(xù)操作，直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日，每日震搖一次，過濾后即可應用。新配的染液偏堿性，放置后可呈酸性。保存時間愈久，染色能力愈佳?！裢科渭尤旧骸茫薄瞞in——加磷酸鹽緩沖液混合均勻——３～5min——水沖洗——自然干燥——鏡檢(所得血片呈櫻紅色者為佳)目前二十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點（２）姬姆薩氏染色法●姬姆薩氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料天青●姬姆薩氏染液：姬姆薩氏染粉0.5g，中性甘油33ml，中性甲醇33ml。將染色粉置于研缽中，加少量甘油，充分研磨；加入所余甘油，在50～60℃水溶液中保溫1～2h，并用玻棒攪拌，使染粉溶解；最后加入甲醇，混合后裝入棕色瓶中，保存7日后過濾即成原液染色時取原液0.5～1ml，加pH6.8磷酸鹽緩沖液10ml，即成應用液?！裢科状脊潭ǎ场祄in——置于染色液中染３０～６０min－水洗——吸干——鏡檢(玫瑰紫為佳)●對細胞核與寄生蟲效果好目前二十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點（３）瑞－姬氏復合染色法●瑞－姬氏復合染液：瑞氏染粉5.0g，姬姆薩氏染粉0.5g，甲醇500ml。將兩種染粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，傾入棕色瓶中，用剩余甲醇再研磨，最后一并裝入瓶中保存7日后過濾即成?！裢科渭尤疽骸?.5～１min后加等量緩沖液——５～１０min——吸干——鏡檢。目前二十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀0.3g加磷酸氫二鈉0.2g再加蒸餾水至1000ml,配制成磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH,如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。目前二十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點二、血液常規(guī)檢驗目前二十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞沉降率的測定紅細胞壓積容量測定紅細胞滲透脆性的測定血液凝固時間測定血紅蛋白(Hb)含量測定血細胞檢驗血小板計數(shù)紅細胞計數(shù)白細胞計數(shù)白細胞分類計數(shù)內(nèi)容目前二十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點定義:血液加入抗凝劑后，一定時間內(nèi)紅細胞向下沉降的毫米數(shù)，叫做紅細胞沉降速度，簡稱血沉（ESP）。紅細胞沉降率測定目前三十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗魏氏法先向10ml刻度試管中加入3.8%枸櫞酸1ml，再自靜脈采血4ml，顛倒混合數(shù)次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝劑至刻度0處，擦去管外血液，在室溫條件下，垂直放于血沉管架上，經(jīng)15、30、45、60min，分別觀察并記錄細胞沉降數(shù)值。▲方法

1魏氏血沉管長30cm，內(nèi)徑2.5mm管上有0~200的刻度，每一刻度的距離為1mm，其溶積為1ml。目前三十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗“六五”型血沉管法于血沉管中加入抗凝劑（草酸鈉0.015~0.02g，枸櫞酸鈉粉末0.04~0.05g）,自頸靜脈直接采血至刻度“0”處，立即充分混合，于室溫垂直立于試管架上，鏡15、30、45、60min各觀察一次，并記錄紅細胞沉降的數(shù)值?！椒?/p>

2“六五”型血沉管法內(nèi)徑0.9cm，全長17~20cm，管上有100個刻度容積為10ml。目前三十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗各種動物的正常血沉值動物種類15min30min45min60min測定方法馬驢黃牛水牛奶牛山羊豬31329.80.33497530.80.785396.7650.752055110.70.891.61.20.630六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法六五型法①測定血沉時必須用新配制的抗凝血；②血液與抗凝劑混合要充分，柱面上不應有氣泡，它可使血沉變慢；③用魏氏法測定時，事先應檢查血沉架是否好用，以防漏液；④測定時室溫以20℃左右為宜，溫度過低可以減慢血沉。血沉值沒有獨立的診斷意義。血沉加快，見于馬傳染性貧血、梨形蟲病、結核、鼻疽、豬瘟、化膿性炎癥、風濕癥等。血沉減慢，見于大出汗、多尿、劇烈腹瀉、馬流行性腦脊髓炎、破傷風、牛瓣胃阻塞、腹痛癥等。臨床意義目前三十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點定義:是指壓緊的紅細胞在全血中所占的百分率,是鑒別貧血的一項不可缺少的指標,簡稱比容。紅細胞壓積容量測定目前三十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞壓積容量測定管（溫氏測定管）長約11cm,內(nèi)徑約2.5mm，管壁刻有0-10cm刻度，分度刻度1mm。用毛細玻璃吸管或長針頭吸滿抗凝全血，將血液自上而下擠入溫氏測定管內(nèi)，至刻度10處；3000rpm離心30-40min。讀取紅細胞柱層的刻度數(shù)，即為紅細胞壓積容量數(shù)值，數(shù)值用百分率表示?！椒壳叭屙揬總數(shù)一百一十六頁\編于十點1、壓積升高2、壓積降低各種貧血生理性升高病理性升高各種脫水每超出高限一個小格（１mm)一天的補液量＝８００－１０００毫升臨床意義目前三十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點定義:是指紅細胞在低滲氯化鈉溶液中的抵抗力，故又稱為紅細胞抵抗。紅細胞滲透脆性的測定目前三十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點取10ml刻度試管22支，分別標明管號，每管分別加入個濃度低滲氯化鈉溶液5ml，再加入10%紅細胞生理鹽水懸浮液2滴，混勻。室溫下放置10-15min，離心5min并觀察結果。抗凝血1份，先用生理鹽水將紅細胞洗滌1次，然后做成10%紅細胞生理鹽水懸浮液備用。配制1%NaCl溶液，以0.02%為濃度梯度配制從0.76%-0.34%共22份濃度的低滲溶液。分別裝入100ml細口瓶中備用，每6-8周更換一次。溶液變?yōu)闇\桃紅色，管底有大量紅細胞沉淀，即開始溶血，此管的鹽水濃度代表紅細胞的最小抵抗；溶液呈深紅色，管底無紅細胞沉淀，即完全溶血，此管的鹽水濃度代表紅細胞最大抵抗?！椒壳叭隧揬總數(shù)一百一十六頁\編于十點增高降低缺鐵性貧血免疫性溶血性貧血臨床意義目前三十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點定義:是指血液自血管流出直到完全凝固所需的時間，用以測定血液的凝固能力。血液凝固時間測定目前四十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點頸靜脈采血，見到出血后立即用秒表記錄時間。取血一滴，滴在玻片一端，隨即玻片稍稍傾斜，滴血一端向上。此時未凝固血液自上而下流動，形成一條血線，放在室溫下的平皿內(nèi)，防止血液中水分蒸發(fā)，靜置2min，之后每隔30s用針尖跳動血線一次，待針頭挑起纖維絲時，即停止秒表，記錄時間，即為血凝時間。▲方法玻片法簡單易行，但不及試管法準確試管法采血前準備刻度小試管3支，并預先放在25-37℃恒溫水浴箱內(nèi)。頸靜脈采血，剪刀出血立即開始計時。隨之將血液分別加入3支試管內(nèi)，每支試管各加1ml，再將試管放回水浴箱。放置3min后，先從第一管做起，每隔30s逐次傾斜試管一次，直到翻轉(zhuǎn)試管血液不能流出為止，并記錄時間。3支小試管的平均時間即為血凝時間。適用于出血性疾病的研究與診斷目前四十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點延長縮短重度貧血血斑病肝臟病炭疽病偶見于纖維素性肺炎臨床意義目前四十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗紅細胞遇酸溶解，游離出血紅蛋白，并被酸化為褐色的酸性血紅素，稀釋后與標準色柱比色，即可求得血紅蛋白的含量。血紅蛋白試紙測定法器材應備有測定血紅蛋白試紙和4g%~15g%血紅蛋白標準比色板。測定時，取試紙一條，吸附被檢血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附標準色板的小孔下，肉眼與色板色澤進行比較，選擇顏色相同或近似者，即得100ml血液所含血紅蛋白的克數(shù)。血紅蛋白測定沙利氏血紅蛋白測定法沙利氏血紅蛋白計由比色架、標準比色柱、血紅蛋白測定管及血紅蛋白吸管組成。測定管有兩個刻度標志，一側的2~24刻度表示100ml血液中含有的血紅蛋白克數(shù)；另一側有20~160刻度，表示100ml血液中所含血紅蛋白的百分數(shù)。目前四十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點在血紅蛋白稀釋管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度10%處。用血紅蛋白吸管吸取血液至20mm3刻度處，，拭凈管外附著血液，迅速將試管內(nèi)血液緩緩吹入血紅蛋白洗試管內(nèi)的鹽酸溶液中，再吸取上層鹽酸溶液反復吹洗數(shù)次，勿使產(chǎn)生氣泡。移去血紅蛋白吸管，用小玻璃棒攪拌或輕輕搖振，使血液與鹽酸溶液混合而呈褐色。將測定管插入比色架內(nèi)，靜置10min。慢慢分次沿測定管壁滴加蒸餾水，邊加邊混勻，邊比色，直至血紅蛋白測定管液體的顏色與標準比色柱一致為止，讀取測定管液體凹面最低處的刻度數(shù)，即為100ml血液內(nèi)所含血紅蛋白的克數(shù)或百分數(shù)?！椒壳八氖捻揬總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗動物種類血紅蛋白值（克/100毫升）馬、騾11.0（9.0~13.0）牛10.0（9.0~11.0）水牛8.3（8.0~9.0）羊9.8（7.8~11.6）豬10.5（9.5~12.0）雞12.5（10.0~14.5）血紅蛋白增高見于各種原因引起的血液濃縮，如腹瀉、嘔吐、大汗、多尿及腸梗阻等。血紅蛋白減少見于各種貧血，如馬鼻疽、牛結核、牛羊肝片吸蟲病、仔豬蛔蟲等。臨床意義目前四十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞計數(shù)白細胞計數(shù)白細胞分類計數(shù)血細胞檢驗目前四十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗紅細胞計數(shù)是將一定量的供檢全血經(jīng)一定倍數(shù)（200倍）稀釋后，在血細胞計數(shù)板的計數(shù)室內(nèi)，數(shù)一定體積的紅細胞數(shù)，然后再推算出1mm3血液內(nèi)的紅細胞數(shù)。紅細胞計數(shù)

（redbloodcellcount，RBC）目前四十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

臨床上最常用的是改良紐巴（Neubauer）氏計數(shù)板，它是由一塊特制的玻璃板構成，玻璃板中間有橫溝將其分為三個狹窄的平臺，兩邊的平臺較中間的平臺高0.1mm。中央平臺又有一縱溝相隔，其上各刻有一個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分為9個大方格，每一大方格面積為1.0mm2，深度為0.1mm；四角每一大方格劃分為16個中方格，為計數(shù)白細胞用。中央一大方格用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，共計400個小方格，此為紅細胞計數(shù)之用。血細胞計數(shù)板目前四十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

用5ml吸管吸取紅細胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至2020mm3刻度處（或吸血至刻度10處，紅細胞稀釋液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數(shù)次，以洗出沙利氏管內(nèi)粘附的血細胞，然后試管口加塞，顛倒混合數(shù)次，再用毛細吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計數(shù)室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計數(shù)室中。注意充液不可過多或過少，過多則溢出而流入兩側槽內(nèi)，過少則計數(shù)池中形成氣泡，致使無法計數(shù)。目前四十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

計數(shù)時，先用低倍鏡，光線要稍暗些，找到計數(shù)室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在此中央大方格內(nèi)選擇四角與最中的五個中方格（或用對角線的方法數(shù)五個中方格），每個中方格有16個小方格，所以共計數(shù)80個小方格。計數(shù)時注意壓在左邊雙線上的紅細胞計在內(nèi)，壓在右邊雙線上的紅細胞則不計數(shù)在內(nèi)；同樣，壓在上線的計入，壓在下線的不計入，此所謂“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的計數(shù)法則。目前五十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點計算1mm3血液中紅細胞個數(shù)=X/80×400×200×10。X:5個中方格(即80個小方格)內(nèi)的紅細胞總數(shù)。400:一個大方格，即1mm2面積內(nèi)共有400個小方格。200:稀釋倍數(shù)。10:血蓋片與計數(shù)板的實際高度是1/10mm，乘10后則為1.0mm。上式簡化后為:1mm3紅細胞數(shù)=X×10，000目前五十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點充液量不可過多或過少，過多可使血蓋片浮起，過少則計數(shù)室中形成小的空氣泡，使計數(shù)結果偏低甚至無法計數(shù)。顯微鏡臺應保持水平，否則計數(shù)室內(nèi)的液體流向一側而計數(shù)不準。沙利氏吸血管或試管，每次用完后，先用清水吸吹數(shù)次，然后用蒸餾水、酒精、乙醚，按次序分別吸吹數(shù)次，干后備下次使用。血細胞計數(shù)板用蒸餾水沖洗后，用絨布輕輕擦干即可，切不可用粗布擦試，也不可用酒精、乙醚等溶液沖洗。注意事項目前五十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗健康動物紅細胞數(shù)（萬/立方毫米）動物種類平均數(shù)值變動范圍馬650600~700牛（包括水牛）600550~700綿羊900800~1100山羊13001000~1600豬600500~700雞350250~500紅細胞增多

可見于因各種原因引起的脫水，進而使血液濃縮，表現(xiàn)為紅細胞相對增多，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的滲出期等。紅細胞減少

多見于各種類型貧血，如馬傳染性貧血、牛梨形蟲病、仔豬營養(yǎng)性貧血、新生幼畜溶血病、牛血紅蛋白尿病等。此外好，紅細胞生成不足或破壞增多，亦可導致紅細胞數(shù)減少。臨床意義目前五十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點白細胞計數(shù)

whitebloodcellcount，WBC

一定量的血液用冰醋酸溶液稀釋后，可將紅細胞破壞，然后再細胞計數(shù)板的技術室內(nèi)計數(shù)一定容積的白細胞數(shù)，一次推算出每立方毫米內(nèi)白細胞總數(shù)。目前五十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點用1ml吸管吸取白細胞稀釋液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，反復吸吹數(shù)次，以洗凈管內(nèi)所粘附的白細胞，充分振蕩混合。再用毛細吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計數(shù)室內(nèi)，靜置1～2min，低倍鏡檢查。將計數(shù)室四角四個大方格內(nèi)的全部白細胞依次數(shù)完，注意壓在左線和上線的計入，壓在右線和下線的不計入。目前五十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點1mm3血液中白細胞數(shù)=x/4×20×10X：四角四個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)。x/4：一個大方格（面積為1mm2）內(nèi)的白細胞數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計數(shù)板的實際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中白細胞數(shù)=x×50計算目前五十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗健康動物白細胞數(shù)（個/立方毫米）動物種類平均數(shù)值變動范圍馬80007000~9000黃牛、奶牛75007000~8000水牛88008000~9000綿羊85008000~9500山羊100007000~13000豬1300011000~16000雞2000018000~30000白細胞增多可見于多數(shù)細菌性感染和炎癥，如豬丹毒、豬肺疫、結核、馬鼻疽、馬腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病時以白細胞的顯著增多為特征。白細胞減少主要見于某些病毒性傳染病，如豬瘟、流感等；某些重度疾病的后期；長期應用某些藥物（如氯霉素等）；梨形蟲病等。臨床意義目前五十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點白細胞分類計數(shù)

differentialcountofwhitebloodcell，DC

外周血液中的白細胞主要有5中，即嗜中性白細胞、嗜酸性白細胞、嗜堿性白細胞、淋巴細胞、單核細胞，它們各有其特定的生理機能，在正常時這5種白細胞之間有一定的比例。但在病理情況下，白細胞總數(shù)的變化反映機體防御機能的一般狀態(tài)，各種白細胞之間百分比的變化，則反映機體防御機能的特殊狀態(tài)。由于白細胞總數(shù)的增減并不一定表示各類白細胞平均增多或減少，常常僅限于某一種或兩種白細胞數(shù)的變化，從而引起白細胞之間百分比的相對改變。因此，白細胞計數(shù)對疾病的診斷具有一般意義，而白細胞分類計數(shù)則具有具體意義，在分析臨床意義時，必須把二者結合起來。

目前五十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點鏡檢技術將被檢血液涂片，經(jīng)瑞氏染色或姬姆薩染色，水洗，干燥后鏡檢。先用低倍鏡全面觀察血片上細胞分布情況及染色質(zhì)量，然后選擇染色良好，細胞分布均勻的部分，用油鏡進行分類。由于比重大的細胞(粒細胞，單核細胞等)多分布在血片的邊緣和尾部，比重小的細胞(如小淋巴細胞等)則多分布在血片的頭部和中間。為減少這種細胞分布的固有誤差并避免重復計數(shù)，血片必須按一定方向曲折移動而分類計數(shù)。目前五十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點計數(shù)時，為避免重復和遺漏，可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計數(shù)法推移血片，記錄每一區(qū)的各種白細胞數(shù)。每張血片最少計數(shù)100個細胞(如果計數(shù)200-300個白細胞，當然其百分率更為準確)，連續(xù)觀察2～3張血片，求出各種白細胞的百分比。記錄時，可用白細胞分類計數(shù)器，也可事先設計一表格，用畫“正”字的方法記錄，以便于統(tǒng)計百分數(shù)。

目前六十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點各類白細胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認各種白細胞時，必須掌握其主要特征，如細胞大小，核的形狀結構及染色性，胞漿顏色、有無顆粒及顆粒特點等。在同一張血片上對照比較，互相鑒別。1．嗜中性白細胞。圓形，直徑約10—15μm。胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細小顆粒(染色不佳時則看不清楚)。核染成深紫色，其形狀多樣，核微呈腎形，染色稍淡的稱幼年核，呈帶形或S形，兩邊平行的稱桿狀核，分成2—3葉，在葉之間有細絲相連的稱分葉核。有時因核葉重疊看不到細絲，但核量較多，染色質(zhì)致密，也可認為是分葉核。2．嗜酸性白細胞。大小，形態(tài)與嗜中性白細胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒(馬的這種嗜酸性顆粒明顯大于其它家畜)。核多數(shù)為兩葉。3．嗜堿性白細胞。大小、形態(tài)與嗜中性白細胞相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍色顆粒，常遮蓋在核上。核分葉不明顯。4．淋巴細胞。分大小兩種，小淋巴細胞圓形，直徑約7—10μm，核染成深紫色，圓形或腎形。胞漿很少，常僅呈一小片月牙狀，染成藍色。大淋巴細胞直徑約10—19μm，核圓形或腎形。胞漿相對較多，染成天藍色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。5．單核細胞。是外周血液中最大的細胞，直徑約為12—24m。核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則，呈腎形，多角形，折疊狀等。胞漿較多，染成淺灰藍色，有時內(nèi)含少量灰塵樣淡紅色小顆粒。目前六十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點馬牛羊駱駝雞豬目前六十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗臨床意義健康動物各類白細胞分類數(shù)值（%）動物種類嗜堿性細胞嗜酸性細胞嗜中性細胞淋巴細胞大單核細胞幼稚型桿狀核分葉核馬牛水牛豬羊0.50.50.50.50.54.54.010.02.55.50.51.04.04.04.55.01.053.033.035.035.033.035.056.047.053.057.03.02.03.03.03.0白細胞增多嗜中性白細胞增多：見于豬、牛巴氏桿菌病、馬腺疫、肺炎及化膿性感染等。嗜酸性白細胞增多：見于某些蠕蟲病、過敏性疾病及濕疹等。淋巴細胞增多：見于結核、鼻疽、布氏桿菌病、豬瘟及牛梨形蟲病。單核細胞增多：見于敗血性疾病，某些梨形蟲病及李氏桿菌等。白細胞減少嗜中性白細胞減少：見于病毒性傳染病、藥物中毒（如長期服用抗生素）、各種疾病的垂危期。嗜酸性白細胞減少：見于敗血癥、某些病毒病及牛梨形蟲病等。淋巴細胞減少：多為嗜中性白細胞增多而造成的相對性變化。目前六十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液檢驗在分析嗜中性白細胞增、減變化時，還應注意嗜中性白細胞的成熟情況。若未成熟的嗜中性白細胞增多，即出現(xiàn)嗜中性髓樣細胞、幼稚型和桿狀核嗜中性白細胞的比例增多，則稱為核左移。若血液內(nèi)分葉核嗜中性白細胞大量增多，而且核的分葉數(shù)目也增多，則稱為核右移。白細胞總數(shù)增多的同時，出現(xiàn)核左移，表示骨髓造血機能加強，機體處于積極防御階段；而白細胞總數(shù)減少時見有核左移，則表示骨髓造血機能減退，機體的抗病力降低。至于核右移，乃骨髓造血功能衰退的標志，多因機體高度衰竭而引起，常提示預后慎重。臨床意義目前六十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點尿素能溶解紅細胞及白細胞而保存完整形態(tài)的血小板，經(jīng)稀釋后再細胞計數(shù)室內(nèi)直接計數(shù)，以求得1mm3血液內(nèi)的血小板數(shù)。稀釋液中的枸櫞酸鈉有抗凝作用，甲醛可以固定血小板的形態(tài)。血小板計數(shù)(plateletcount)目前六十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點用1ml吸管吸取稀釋液0.38ml置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，吸吹數(shù)次，充分混允。靜置20min以上，使紅細胞溶解。充分混勻后再用毛細吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計數(shù)室內(nèi)，靜置10min，高倍鏡觀察。任選計數(shù)室內(nèi)一個大方格，按計數(shù)法計數(shù)。血小板在高倍鏡下，呈橢圓形、原形或不規(guī)則折光小體，注意切勿誤將塵埃等異物計入。目前六十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

1mm3血液中血小板數(shù)=x×20×10X：一個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計數(shù)板的實際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中血小板數(shù)=x×200計算目前六十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點臨床意義血小板減少：血小板增多：生成減少破壞增多消耗過多原發(fā)性增多繼發(fā)性增多急性感染、急性出血急性溶血再生障礙性貧血、急性白血病放化療等原發(fā)性血小板減少性紫癜/脾功能亢進血管內(nèi)凝血、血栓性血小板減少性紫癜/目前六十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點光學顯微鏡的使用1.物鏡轉(zhuǎn)換器2.接物鏡3.游標卡尺4.載物臺5.聚光器6.彩虹光闌

7.光源8.鏡座

9.電源開關10.光源滑動變阻器

11.粗調(diào)螺旋12.微調(diào)螺旋13.鏡臂14.鏡筒15.目鏡

16.標本移動螺旋目前六十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點目前七十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點操作步驟----1.觀察前準備顯微鏡從顯微鏡柜或鏡箱內(nèi)拿出時，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩(wěn)地將顯微鏡搬運到實驗桌上。將顯微鏡放在自己身體的左前方，離桌子邊緣約10cm左右，右側可放記錄本或繪圖紙。調(diào)節(jié)光照:不帶光源的顯微鏡，可利用燈光或自然光通過反光鏡來調(diào)節(jié)光照，光線較強的天然光源宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡，但不能用直射陽光，直射陽光會影響物像的清晰并刺激眼睛。將10×物鏡轉(zhuǎn)入光孔，將聚光器上的虹彩光圈打開到最大位置，用左眼觀察目鏡中視野的亮度，轉(zhuǎn)動反光鏡，使視野的光照達到最明亮最均勻為止。自帶光源的顯微鏡，可通過調(diào)節(jié)電流旋鈕來調(diào)節(jié)光照強弱。凡檢查染色標本時，光線應強；檢查未染色標本時，光線不宜太強?？赏ㄟ^擴大或縮小光圈、升降聚光器、旋轉(zhuǎn)反光鏡調(diào)節(jié)光線。目前七十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點2.低倍鏡觀察鏡檢任何標本都要養(yǎng)成必須先用低倍鏡觀察的習慣。因為低倍鏡視野較大，易于發(fā)現(xiàn)目標和確定檢查的位置。將標本片放置在載物臺上，用標本夾夾住，移動推動器，使被觀察的標本處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)旋鈕，使物鏡調(diào)至接近標本處，用目鏡觀察并同時用粗調(diào)節(jié)旋鈕慢慢下降載物臺，直至物像出現(xiàn)，再用細調(diào)節(jié)旋鈕使物像清晰為止。用推動器移動標本片，找到合適的目的像并將它移到視野中央進行觀察。目前七十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點3.高倍鏡觀察在低倍物鏡觀察的基礎上轉(zhuǎn)換高倍物鏡。較好的顯微鏡，低倍、高倍鏡頭是同焦的，在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。然后從目鏡觀察，調(diào)節(jié)光照，使亮度適中，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)旋鈕，慢慢下降載物臺直至物像出現(xiàn)，再用細調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至物像清晰為止，找到需觀察的部位，并移至視野中央進行觀察,并準備用油鏡觀察。目前七十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點4．油鏡觀察用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。從側面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標本相接，應特別注意不能壓在標本上，更不可用力過猛，否則不僅壓碎玻片，也會損壞鏡頭。從目鏡內(nèi)觀察，進一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野出現(xiàn)物像為止，然后用細調(diào)節(jié)器校正焦距。如油鏡已離開油面而仍未見物像，必須再從側面觀察，將油鏡降下，重復操作至物像看清為止。目前七十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點5.觀察完后復原下降載物臺，將油鏡頭轉(zhuǎn)出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙醚乙醇混合液擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦拭2—3下即可，（注意向一個方向擦拭）。將各部分還原，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺通光孔相對，而是成八字形位置，再將載物臺下降至最低，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，最后用柔軟紗布清潔載物臺等機械部分，然后將顯微鏡放回柜內(nèi)或鏡箱中。目前七十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點三、血液分析儀及其在獸醫(yī)臨床上的應用

血液分析儀是目前臨床血液檢驗常用檢測儀器。20世紀40年代后期，美國人庫爾特（）發(fā)明電子血細胞計數(shù)儀并申請專利。其特點是檢測速度快、精確度高、操作簡便。目前，各類血液分析儀主要能完成兩大功能：①細胞計數(shù)功能。②細胞分類功能。血液分析儀檢測原理主要是電阻抗法。

目前七十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點電阻抗法血液分析儀器組成

①信號發(fā)生器：通過小孔的各種血細胞都能產(chǎn)生電阻信號，信號電平的高低與細胞的大小成正比。②放大器：血細胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖信號非常微弱，需通過電子放大器，將微伏級信號放大為伏級脈沖信號，才可觸發(fā)電路。③閾值調(diào)節(jié)：在計數(shù)不同細胞時，應調(diào)節(jié)閾值電平，以給出合適的閾值度，使計數(shù)結果盡量符合實際水平。④甄別器：各種微粒(血細胞、細胞碎片、雜質(zhì)等)通過小孔時均可產(chǎn)生相應脈沖信號；甄別器則根據(jù)閾值提供的參考電平，將低于參考電平的各種非計數(shù)目標的假信號去掉，以提高計數(shù)的準確性。⑤整形器：經(jīng)放大和甄別后的細胞脈沖信號，波形不一致，必須經(jīng)過整形器調(diào)整為一致標準的平頂波形后，才可觸發(fā)計數(shù)電路。⑥計數(shù)系統(tǒng)：血細胞產(chǎn)生的脈沖信號，經(jīng)過放大、甄別、整形后，送入計數(shù)系統(tǒng)；儀器對大小不同的脈沖進行選擇，區(qū)分出不同類型的細胞并分別進行計數(shù)。

目前七十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點電阻抗法檢測原理

又稱庫爾特原理(Coulterprinciple)目前七十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點目前七十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點白細胞計數(shù)和分類計數(shù)原理

儀器將體積為35～450fL的血細胞，分為256個通道（channel）。每個通道：1.64fl。根據(jù)細胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細胞體積分布直方圖(Histogram)。經(jīng)溶血素處理脫水后，血細胞體積大小發(fā)生了變化！第一群（35～90fl）小細胞區(qū)：淋巴細胞（體積最小）。第二群（90～160fl）單個核細胞區(qū)，（中間細胞）：單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、原始、幼稚細胞、異常細胞等。第三群（160fl以上）大細胞區(qū)：嗜中性粒細胞（體積最大）。目前八十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點3590160300400450(fl)正常白細胞分類模式圖（直方圖）%目前八十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點目前八十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點紅細胞檢測原理

紅細胞計數(shù)和血細胞比容測定與白細胞計數(shù)相似100200300400(fl)%目前八十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血小板檢測原理

血小板計數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細胞在一個系統(tǒng)中進行檢測%

102030(fl)直方圖在2～28fl，主要在2～

15fl（不同儀器不一）目前八十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點四、血液生化檢驗目前八十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點分光光度法原理

分光光度法，常被用來測定溶液中存在的光吸收物質(zhì)的濃度，其基本原理是根據(jù)Lambert和Beer定律。目前八十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點目前八十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

Lambert定律

一束平行單色光垂直照射于一均勻物質(zhì)（溶液）時，由于溶液吸收一部分光能，使光的強度減弱，若溶液的濃度不變，則溶液的厚度愈大，光線強度的減弱也愈顯著。設：入射光強度為I0L表示溶液的厚度（即光程）出射光（透過光）強度為I根據(jù)輻射能理論推導，I0與I之間關系為lg（I0/I）=K1L（1）K1是常數(shù)，受光線波長、溶液性質(zhì)、溶液濃度的影響。目前八十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點

Beer定律

當一束單色光通過一溶液時，光能被溶液介質(zhì)吸收一部分，若溶液的厚度不變，則溶液濃度C愈大，光吸收愈大，透射光線強度的減弱也愈顯著，光強度減弱的量與溶液濃度增加量成正比

lg（I0/I）=K2C（2）K2為吸收系數(shù)，是常數(shù)，溶液對光吸收的大小與溶液濃度C成正比。目前八十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點Lambert-Beer定律（又稱吸收定律）

上二式合并（即（l）與（2）合并）

lg（I0/I）=CL令A=lg（I0/I），T=I/I0

；則A=CL，A=-lgT。T為透光率，A為吸光度（光密度、消光度）。其中為常數(shù)，又稱消光系數(shù)（extinctioncoefficient），表示物質(zhì)對光線吸收的能力，其值因物質(zhì)種類和光線波長而異。對于相同物質(zhì)和相同波長的單色光則消光系數(shù)不變。目前九十頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點分光光度計的結構

光源：鎢燈和氫燈（或氘燈）單色器：分解為單一波長光的裝置狹縫：調(diào)節(jié)入射單色光的強度，形成平行光線吸收池：又稱比色杯、比色皿、比色池，裝待測溶液用檢測系統(tǒng)：感受光能，轉(zhuǎn)化為電能，輸出A值、T值。目前九十一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點幾類分光光度計22PC型可見光分光光度計UNICO2000型目前九十二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點S54型紫外分光光度計UV8500型紫外分光光度計目前九十三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點比色杯（比色皿）玻璃比色杯石英比色杯熒光比色杯目前九十四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點比色杯使用注意事項

1、拿取比色皿時，只能用手指接觸兩側的毛玻璃，避免接觸光學面,光玻璃面對著光路。

2、不得將光學面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時，液面高于光路,高度為比色皿的2/3處即可，光學面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用檫鏡紙擦拭。

3、測定時濃度由低到高，進行潤洗。比色皿在使用后，應立即用水沖洗干凈。必要時可用1：1的鹽酸浸泡，然后用水沖洗干凈。

4、不能將比色皿放在火焰或電爐上進行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤；

5、在測量時如對比色皿有懷疑，可自行檢測。目前九十五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點微量移液器吸嘴裝在吸液桿上，應套牢避免間隙。依據(jù)所需容量旋轉(zhuǎn)手輪，使數(shù)輪顯示所需值。輕輕地將推動按鈕下壓，使推動按鈕推移至第一停點位置。手持取液器垂直浸入溶液中，吸嘴浸入深度為2-4mm，停留2-3秒后緩慢放松按鈕，即回到原來位置，溶液吸入后稍停即可將吸嘴移出液面。將取液器吸嘴置于排液容器內(nèi)。使吸嘴尖緊貼容器內(nèi)壁，按壓推動按鈕至第二停點位置，使溶液排盡，松開按鈕。移液完畢，按壓卸嘴按鈕，將吸嘴脫卸。目前九十六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點分光光度計的使用722型分光光度計目前九十七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點樣品測試操作①打開電源開關，使儀器預熱20分鐘②用“波長設置”按鈕將波長設置在您將要使用的分析波長位置上③打開樣品室蓋，將參比溶液倒入比色皿中放入比色皿架靠近測定者一端位置，并將樣品溶液倒入比色皿中放入比色皿架的其它位置，蓋好樣品室蓋。④拉動比色皿架拉桿一小格使比色皿架擋住光路，按“0%T”鍵調(diào)透射比零⑤推入比色皿架使參比溶液位于光路中，蓋好樣品室蓋，按“100%T”調(diào)100%透射比⑥按“方式鍵”（MODE）將測試方式設置為吸光度方式(A)⑦打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋⑧將參比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”調(diào)A零⑨

將被測溶液拉入光路中，此時，顯示器上所顯示是被測樣品的吸光度參數(shù)⑩實驗完成后，關閉電源，洗凈比色皿，并蓋好蓋布。目前九十八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點光路目前九十九頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點光路目前一百頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點血液葡萄糖測定(費吳氏法)血液非蛋白氮測定血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定（雙縮脲法）血清尿素測定（二乙酰-肟法）目前一百零一頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點(一)血液葡萄糖測定(費吳氏法)原理無蛋白血濾液中的葡萄糖，具有還原性，與堿性高銅混合加熱后，將高銅還原成氧化低銅而呈紅色沉淀，此沉淀物再被磷鉬酸氧化成藍色物質(zhì)。與同樣處理的標準葡萄糖管比色，而求得血糖含量。試劑0.25％苯甲酸溶液葡萄糖貯存標準液(1ml含10mg葡萄糖)

葡萄糖應用標準液(1ml≌0.1毫克葡萄糖)

堿性銅溶液磷鉬酸試劑

10％鎢酸鈉溶液

1/3mol／L硫酸溶液目前一百零二頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點操作方法

鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液50ml：取小燒杯或大試管一支，先加入蒸餾水7ml，再加入新鮮抗凝血1ml，充分混勻，使之溶血。然后，加入10％鎢酸鈉溶液1.0ml，混勻。最后，徐徐加入2／3N硫酸溶液1ml，隨加隨搖，充分混勻。放置5～10min后，用優(yōu)質(zhì)濾紙過濾或離心沉淀，即可獲得無色清亮無蛋白血濾液以供備用。

此法所得無蛋白血濾液近中性，不僅適用于葡萄糖的測定，還可用于非蛋白氮、尿素氮，肌酐等的測定。

目前一百零三頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點步驟測定管標準管空白管1無蛋白血濾液（ml）葡萄糖標準應用液（ml）蒸餾水（ml）堿性銅溶液（ml）2002020200222混合后，在沸水中煮沸8min，取出后浸于冷水中2-3min（不可搖動）3磷鉬酸試劑2ml2ml2ml4混合后，于室溫下靜置2min5蒸餾水加至25ml25ml25ml6混勻，待管內(nèi)二氧化碳逸出后比色，選用620nm濾光板比色，讀取各管密度值取血糖測定管3支，分別標明測定管、標準管及空白管，按表操作。全血血糖含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標準管光密度×0.2×100/0.2目前一百零四頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點臨床意義增高病理性增高糖尿病、甲狀腺機能亢進腎上腺皮質(zhì)機能亢進暫時性增高全麻后、肺炎、腎炎、顱內(nèi)壓增高、中樞神經(jīng)感染缺氧窒息減低生理性減低病理性減低胰島素分泌過多、嚴重貧血腎功能衰竭的慢性腎炎及功能減弱、甲狀腺功能減弱、腦垂休功能減退。多見長時間的劇烈運動過后、過分饑餓及哺乳期竺目前一百零五頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點(二)血液非蛋白氮測定原理血中的非蛋白氮物質(zhì)主要有尿素、尿酸、肌酸和肌醇等，均為蛋白質(zhì)代謝中間產(chǎn)物或最終產(chǎn)物。由于這些化合物不被蛋白沉淀，故測定無蛋白血濾液的含氮量即為非蛋白氮含量。試劑硫酸銨貯存標準液(1ml≌1mg氮)

硫酸銨應用標準液(1ml≌0.03mg氮)50%硫酸溶液碘化汞鉀試劑貯存液碘化汞鉀試劑應用液目前一百零六頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點步驟測定管標準管空白管1無蛋白血濾液（ml）硫酸銨標準應用液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）100.21010.21000.202

將測定管置酒精燈上以小火加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色透明時為止，冷卻30min。3蒸餾水加至（ml）7774碘化汞鉀試劑應用液（ml）3335

混合后，待10min，用480nm波長或藍色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點，分別讀取各管讀數(shù)。此項操作應在20min內(nèi)完成。

操作方法取草酸鉀抗凝全血（不能用雙草酸鹽抗凝血），以鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液后，按表操作。全血非蛋白氮含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標準管光密度×0.03×100/0.1目前一百零七頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點降低增高急、慢性腎炎尿毒癥腎盂積水泌尿系結核、結石阻塞嚴重燒傷大量嘔吐腹瀉腸梗阻血紅蛋白尿甲狀腺機能亢進末期腎上腺機能不全重金屬中毒等中毒性肝炎膽道術后妊娠晚期臨床意義目前一百零八頁\總數(shù)一百一十六頁\編于十點(三)血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定原理蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀/納/銅作用，產(chǎn)生紫色反應，成為雙縮脲反應。根據(jù)顏色的深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標準溶液比色，即可求得血液蛋白質(zhì)含量。試劑27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液雙縮脲試劑目前一百零九頁\總數(shù)