藥學(xué)本科畢業(yè)論文-TQ0701對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

PAGE本科畢業(yè)論文論文題目TQ0701對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用英文題目ProtectiveeffectsofTQ0701oncerebralischemicreperfusioninjuryinrats專業(yè)中藥學(xué)院部中藥院TQ0701對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用目錄TOC\o"1-2"\h\z\u摘要 1前言 3第一章材料 61.1藥物和試劑 61.2主要儀器 71.3動(dòng)物 7第二章方法 82.1TQ0701iv對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能和腦組織梗塞率的影響 82.2TQ0701iv對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織學(xué)的影響 92.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 9第三章結(jié)果 103.1TQ0701對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能和腦組織梗塞率的影響 103.2TQ0701對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織學(xué)的影響 10第四章討論 12參考文獻(xiàn) 14致謝 16畢業(yè)論文PAGE16TQ0701對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用摘要：目的:探討新型的化合物TQ0701對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的有效性，從而為該化合物的機(jī)制研究以及臨床應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)思路。方法:將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（依達(dá)拉奉3mg/kg）、TQ0701低劑量組(1.5mg/kg)、中劑量組(3mg/kg)、高劑量組(6mg/kg)各10只。假手術(shù)組僅進(jìn)行手術(shù)而不造成缺血狀態(tài)，其余各組均采用Longa線栓法制備大鼠MCAO模型，在缺血2h后進(jìn)行再灌注。給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組分別在缺血前30min以及再灌注0、2h尾靜脈注射TQ0701和依達(dá)拉奉，假手術(shù)組和模型組則給予等量的0.9%氯化鈉溶液。再灌注24h后觀察大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織梗塞百分率和病理組織學(xué)的改變。結(jié)果:模型組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和腦組織梗塞百分率同假手術(shù)組、陽(yáng)性對(duì)照組以及TQ0701三個(gè)劑量組相比有顯著差異，陽(yáng)性對(duì)照組與TQ0701三個(gè)劑量組相比未見(jiàn)顯著差異。同時(shí)電鏡觀察結(jié)果也發(fā)現(xiàn)TQ0701三個(gè)劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與模型組相比神經(jīng)細(xì)胞病理改變較輕。結(jié)論：化合物TQ0701對(duì)急性腦梗死有明顯的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：TQ0701；腦缺血再灌注；依達(dá)拉奉；ProtectiveeffectsofTQ0701oncerebralischemicreperfusioninjuryinratsAbstract:Aim:ToinvestigatetheeffectsofTQ0701bydynamicchangesofinfarctvolumesandneurologicaldeficitscoresonlocalcerebralischemic-reperfusioninjuryinrats.Method:MaleSDratswererandomlydividedintosham-operatedcontrolgroup(n=10),normalsalinecontrolgroups(n=10),edaravone-treatedgroup(3mg/kg)(n=10)andTXL-treatedgroups(6mg/kg,3mg/kgand1.5mg/kg)(n=10each).Animalsinthelatterfourgroupsweresubjectedtotransientfocalischemiabythemiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)for120minutes.TheratswerepretreatedwithnormalsalineorTXL30minbeforeischemicand0min,2hoursafterreperfusion.After24hoursofreperfusion,infarctvolumesweredeterminedby2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride(TTC)andneurologicalscoreswereinvestigated.Results:InfarctvolumesinTQ0701-treatedgroupsweresignificantlydecreasedcomparedwiththoseincontrolgroupsat24afterMCAO,andtheneurologicaldeficitscoresinTQ0701-treatedgroupsweresynchronouslyimproved.Conclusion:TheseresultsshowthattreatmentwithTQ0701canattenuatebraininjuryandTQ0701maybeapotentialneuroprotectiveagentincerebralischemia-reperfusion.Keywords:TQ0701;cerebralischemicreperfusion;edaravone前言目前，腦血管病嚴(yán)重危害人類健康，已成為三大死亡原因之一，其中缺血性腦血管病約占56.6%～80%。因此對(duì)于腦血管病治療藥物的研究與開(kāi)發(fā)具有很大的實(shí)際價(jià)值和前景。隨著對(duì)急性腦缺血再灌注和缺氧復(fù)氧損傷研究的進(jìn)展，對(duì)腦梗塞的病理生理機(jī)制有了新的認(rèn)識(shí)。大量研究已經(jīng)證實(shí)了急性缺血后恢復(fù)血液灌流，會(huì)使病變加劇而發(fā)生再灌注損傷。目前主要從細(xì)胞內(nèi)鈣離子、NMDA受體、自由基、花生四烯酸代謝、缺血區(qū)酸堿平衡破壞、基因表達(dá)及蛋白質(zhì)的磷酸化等方面，對(duì)腦缺血再灌注損傷的機(jī)理和防治開(kāi)展了廣泛而深人的研究。下面就幾個(gè)最基礎(chǔ)的病理生理機(jī)制進(jìn)行探討。1.鈣與缺血缺氧性腦損傷細(xì)胞內(nèi)鈣作為第二信使、代謝調(diào)節(jié)因子和膜穩(wěn)定劑在細(xì)胞正常機(jī)能活動(dòng)中起重要作用，亦可介導(dǎo)多種病理情況下的細(xì)胞死亡。生理情況下，鈣在細(xì)胞內(nèi)外存在很大的濃度差，這依賴于膜正常通透性及胞漿鈣外排機(jī)制來(lái)維持，后一過(guò)程需消耗能量。腦缺血缺氧時(shí)主要由于ATP供應(yīng)不足、N-甲基-D-門(mén)冬氨酸(NMDA)受體過(guò)度興奮介導(dǎo)與其偶聯(lián)的鈣通道開(kāi)放、膜通透性增大及封阻機(jī)制障礙而致細(xì)胞外鈣內(nèi)流增加、胞漿鈣外排障礙，造成細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增高[1]。細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，一方面使血管收縮、進(jìn)一步加重腦缺血缺氧；同時(shí)引起細(xì)胞代謝、結(jié)構(gòu)與功能多方面的異常改變，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。2.自由基連鎖反應(yīng)腦缺血再灌注時(shí)，可通過(guò)黃嘌呤氧化酶、線粒體系統(tǒng)、白細(xì)胞系統(tǒng)、花生四烯酸相關(guān)酶系統(tǒng)、一氧化氮合成酶(NOS)系統(tǒng)等使自由基大量產(chǎn)生，同時(shí)自由基防御系統(tǒng)功能受損，動(dòng)態(tài)平衡被打亂。自由基具有很高的化學(xué)活性，可快速攻擊其它化合物的分子并產(chǎn)生更多的自由基，自由基破壞膜結(jié)構(gòu)中蛋白成分、引起膜脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致膜損傷、線粒體功能障礙、溶酶體破裂、細(xì)胞溶解和組織水腫等一系列損害作用，稱之為自由基連鎖反應(yīng)[2-4]。近年大量研究證實(shí)，氧自由基介導(dǎo)的自由基連鎖反應(yīng)是導(dǎo)致腦缺血缺氧與再灌注復(fù)氧損傷的主要原因。3.興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性作用生理情況下，興奮性氨基酸作為正常的神經(jīng)遞質(zhì)，在神經(jīng)元之間的信息傳遞中發(fā)揮重要作用。突觸前膜釋放的谷氨酸（GIU）主要通過(guò)神經(jīng)細(xì)胞膜上的高親和性攝取系統(tǒng)攝取滅活，細(xì)胞外液GIU濃度維持在1umol/L左右。病理狀態(tài)下，GIU通過(guò)使神經(jīng)元過(guò)度興奮而發(fā)揮其神經(jīng)毒作用。在腦缺血缺氧時(shí)，GIU大量釋放，同時(shí)其再攝取機(jī)制受阻，在突觸中堆集，使NMDA受體過(guò)度興奮，啟動(dòng)NMDA受體的控鈣通道而使外鈣大量?jī)?nèi)流，由此引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。目前認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)鈣超載是介導(dǎo)興奮性氨基酸遞質(zhì)神經(jīng)毒性作用的關(guān)鍵因素。GIU主要與局灶性或不完全性腦缺血性損傷有關(guān)[5]。4.腦內(nèi)NO的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用NO在腦缺血損傷中的作用可能是雙重性的。它一方面可通過(guò)舒張腦血管和抑制血小板聚集，下調(diào)NMDA受體，從而改善組織灌流、對(duì)缺血邊緣區(qū)腦組織施加直接保護(hù)作用，減輕缺血性損害；另一方面可通過(guò)形成自由基或其它途徑，而產(chǎn)生神經(jīng)毒性，加重缺血損傷，促使缺血區(qū)邊緣腦組織向梗死發(fā)展。5.花生四烯酸代謝失衡腦缺血再灌注時(shí)，通過(guò)AA代謝產(chǎn)生大量的TXA2、PGF2及白三烯(LT)C4、B4等物質(zhì)。同時(shí)，由于合成酶抑制或內(nèi)皮細(xì)胞損傷而致與TXA2、PGF2具有對(duì)抗作用的PGI2產(chǎn)生減少，造成TXA2/PGI2比值失衡。TXA2、PGF2和白三烯等可致血小板聚積、腦血管痙攣和血管通透性增加，加重腦缺血和腦水腫形成，導(dǎo)致缺血后遲發(fā)性低灌注損傷[6]：LTB4和12-羥花生四烯酸對(duì)白細(xì)胞浸潤(rùn)和激活起著放大作用。并且，AA自身代謝過(guò)程中，可產(chǎn)生大量O2-，從不同途徑導(dǎo)致組織損傷。可見(jiàn)，AA代謝失衡在腦缺血再灌注損傷中起著非常重要的作用。依達(dá)拉奉首先由日本三菱東京制藥株式會(huì)社開(kāi)發(fā)，2001年6月剛剛在日本上市。1984年日本三菱東京制藥株式會(huì)社根據(jù)酚類化合物具有強(qiáng)的自由基清除作用的原理,經(jīng)過(guò)多次篩選,終于研發(fā)出一種神經(jīng)元保護(hù)劑(自由基清除劑)依達(dá)拉奉。它是一種安替吡啉的代謝產(chǎn)物，其在體內(nèi)以陰離子形式存在，血腦屏障通透性高，靜脈給藥可清除大腦內(nèi)具有高度細(xì)胞毒性的羥自由基。因此，該藥最早用于腦缺血性病變急性期治療。研究表明，作為自由基清除劑，依達(dá)拉奉可有效改善腦組織缺血再灌注損傷。腦缺血再灌注后，過(guò)多的氧自由基導(dǎo)致腦組織直接損傷及細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和完整性，引起細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞毒性水腫增加。研究證實(shí)，依達(dá)拉奉能減少神經(jīng)元NO合成酶，增加內(nèi)皮型NO合酶，抑制腦線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開(kāi)放，起到腦組織保護(hù)作用。另外，依達(dá)拉奉還能明顯抑制缺血區(qū)腦水腫，減少缺血再灌注引起的白三烯合成[7]。可見(jiàn)，依達(dá)拉奉能對(duì)缺血再灌注損傷的腦組織起到理想的保護(hù)作用。隨著該藥的腦保護(hù)作用逐漸得到臨床肯定，其適應(yīng)癥進(jìn)一步擴(kuò)大，如治療心肌缺血、肺缺血、腎臟缺血、肝臟缺血和腸缺血等，其相關(guān)研究已取得較大進(jìn)展。鑒于依達(dá)拉奉良好的腦保護(hù)作用，在依達(dá)拉奉的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，合成了新型化合物TQ0701。本課題就是主要觀察TQ0701對(duì)于腦缺血的保護(hù)作用，從而為該化合物的機(jī)制研究以及臨床應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)思路。第一章材料1.1藥物和試劑1.1.1TQ0701原料：提供單位：江蘇正大天晴制藥有限公司規(guī)格：純度為98.0％以上配制方法：按(1.2mgTQ0701原料)：(1mL0.9%氯化鈉溶液)的比例配制成原液。TQ0701高劑量組，給予大鼠iv0.5mL/100g體重的原液；中劑量組需將原液用0.9%氯化鈉溶液稀釋一倍，給藥體積同上；低劑量組將原液稀釋兩倍，給藥體積同上1.1.2依達(dá)拉奉(Edaravone)原料：提供單位：江蘇正大天晴制藥有限公司規(guī)格：純度為98.0％以上配制方法：按(0.6mg依達(dá)拉奉原料)：(1mL0.9%氯化鈉溶液)的比例配制成溶液。大鼠iv0.5mL/100g體重1.1.3水合氯醛(TCA):提供單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司規(guī)格：分析純配制方法：用0.9%氯化鈉溶液配制成10%的溶液，大鼠ip0.5mL/100g體重1.1.4紅四氮唑(TTC)：提供單位：上海靈錦精細(xì)化工有限公司規(guī)格：分析純配制方法：用PBS溶液配制成1%的溶液，4℃避光保存1.1.5PBS溶液(g/L)：配制方法：每升蒸餾水加入NaCl8.00g，KCL0.20g，Na2HPO4·H2O0.156g，KH2PO40.20g，充分溶解%氯化鈉溶液：提供單位：中國(guó)大冢制藥有限公司規(guī)格：250ml/瓶1.1.7肝素鈉注射液提供單位：常州千紅生化制藥有限公司規(guī)格：2mL:12500單位配制方法：臨用前加0.9%氯化鈉溶液將肝素配制成125μ/mL溶液1.1.8無(wú)水乙醇：提供單位：無(wú)錫市亞盛化工有限公司規(guī)格：分析純配制方法：用蒸餾水配制成75%的溶液1.1.9甲醛溶液提供單位：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司規(guī)格：分析純配制方法：用蒸餾水配制成10%的溶液，避光保存1.1.10HE染色試劑盒：提供單位：南京建成生物工程研究所1.2主要儀器1.2.1電熱恒溫水浴鍋：江蘇省東臺(tái)市電器廠1.2.2分析天平：北京賽多利斯天平有限公司1.3動(dòng)物SD大鼠，雄性，220～260g，清潔級(jí)，生產(chǎn)許可證由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(豫)2005-0001；使用許可證由中國(guó)藥科大學(xué)新藥篩選中心提供，使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2004-0010。第二章方法2.1TQ0701iv對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能和腦組織梗塞率的影響取SD大鼠60只，雄性，體重220～260g，按體重隨機(jī)分為6組，分別為假手術(shù)組，模型組（均給以等量0.9%氯化鈉溶液），陽(yáng)性對(duì)照組（依達(dá)拉奉3mg/kg），TQ0701高、中、低三個(gè)劑量組（6、3、1.5mg/kg）。以上各組給藥容量均為0.5mL/100g。參考Longa[8～10]等人的方法，采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）模型。大鼠用10%水合氯醛（300mg/kg）ip麻醉后仰臥恒溫手術(shù)臺(tái)上。從頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，向外牽引二腹肌及胸鎖乳突肌，由頸總動(dòng)脈分叉處向頭端依次游離，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈的分支：枕骨下動(dòng)脈和甲狀腺上動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)端結(jié)扎，切斷頸外動(dòng)脈使其主干游離備用，然后分離頸內(nèi)動(dòng)脈，用絲線在頸外動(dòng)脈根部打一松扣，夾閉頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。將尼龍線（長(zhǎng)5cm，直徑0.28mm）經(jīng)頸外動(dòng)脈主干切口，緩慢向頸內(nèi)動(dòng)脈入顱方向推進(jìn)，以頸總動(dòng)脈分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)18mm左右時(shí)感到阻力，即達(dá)到了較細(xì)的大腦中動(dòng)脈內(nèi)，阻斷了MCA的所有血供來(lái)源，扎緊頸外動(dòng)脈根部松扣。2h后，拔出尼龍線，扎緊動(dòng)脈殘端。縫合皮膚，完成MCAO導(dǎo)致局灶性腦缺血—再灌注模型。假手術(shù)組大鼠麻醉后，僅暴露頸內(nèi)外動(dòng)脈分叉，不閉塞MCA。TQ0701三個(gè)劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組分別在缺血前30min以及再灌注0、2h尾靜脈注射TQ0701和依達(dá)拉奉，假手術(shù)組和模型組則給予等量的0.9%氯化鈉溶液。術(shù)后24h按Bederson的方法對(duì)動(dòng)物的行為缺陷進(jìn)行分級(jí)評(píng)分，標(biāo)準(zhǔn)如下[11]：0分：無(wú)神經(jīng)功能缺失癥狀；1分：提大鼠尾，見(jiàn)癱瘓側(cè)前肢回收屈曲不能正常伸向地面；2分：向癱瘓側(cè)推時(shí)感阻力較對(duì)側(cè)明顯降低；3分：大鼠爬行時(shí)向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)；4分：伴有意識(shí)障礙。MCAO24h后，斷頭處死大鼠，取出全腦（去除小腦）。在視交叉及其前后各2mm處，做冠狀切片5片，于1%TTC中避光37℃孵育30min，再分離蒼白區(qū)（梗塞區(qū)）和非蒼白區(qū)（正常區(qū)），計(jì)算梗塞百分比如下：梗塞百分比(%)=蒼白區(qū)重量/(蒼白區(qū)重量+非蒼白區(qū)重量)×100%2.2TQ0701iv對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織學(xué)的影響取SD大鼠60只，雌性，220～260g，隨機(jī)分為6組，分組給藥及手術(shù)方法如前。MCAO后24h斷頭處死大鼠，取出全腦（去除小腦），于10%甲醛溶液中固定。標(biāo)本于臘制模具中切片后作HE染色，對(duì)大腦皮層海馬進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示。采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比較,兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。第三章結(jié)果3.1TQ0701對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能和腦組織梗塞率的影響由表1可見(jiàn)：模型組的MCAO大鼠腦卒中評(píng)分明顯增加，梗死面積也明顯增大（P<0.01vs假手術(shù)組）。TQ0701給藥組6、3、1.5mg/kgiv能顯著降低MCAO大鼠的腦卒中評(píng)分，并能夠明顯減少局灶性腦缺血大鼠腦的梗死面積（P<0.01，P<0.05vs模型組）。三個(gè)劑量是隨著濃度增大作用增強(qiáng)。依達(dá)拉奉3mg/kgiv也能顯著改善MCAO大鼠的腦卒中評(píng)分，減少梗死面積（P<0.01vs模型組）。表1.TQ0701對(duì)局灶性腦缺血大鼠行為學(xué)評(píng)分、梗死面積的影響（，n=10）組別劑量（mg/kg）行為學(xué)評(píng)分梗死面積（％）假手術(shù)組－0.0±0.0△△－模型組－3.3±0.541.4±3.5陽(yáng)性對(duì)照組31.7±0.8△△19.7±2.5△△TQ0701給藥組61.5±0.6△△20.1±3.0△△31.9±0.7△△25.9±6.3△△1.52.6±0.7△36.0±5.6△△P<0.05,△△P<0.01vs模型組3.2TQ0701對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織學(xué)的影響假手術(shù)組：10例腦組織神經(jīng)元基本正常，核居中，未見(jiàn)神經(jīng)元明顯病變、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)改變。模型組：10例腦組織大腦皮質(zhì)神經(jīng)元均見(jiàn)中－重度變性、壞死（＋＋～＋＋＋），神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，胞體腫脹，尼氏小體減少或消失，出現(xiàn)不同程度的核深染、核固縮、核溶解，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，其中5例見(jiàn)篩狀軟化灶形成。陽(yáng)性對(duì)照組：10例腦組織中有8例未見(jiàn)明顯神經(jīng)元變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)改變。2例腦組織神經(jīng)元輕度變性、壞死（＋），神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，胞體腫脹，尼氏小體減少或消失，有不同程度的核深染、核固縮、核溶解。該組神經(jīng)元數(shù)目較模型組多。TQ07016mg/kgiv組：10例腦組織中有7例腦組織未見(jiàn)神經(jīng)元變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)改變。3例腦組織神經(jīng)元見(jiàn)輕－中度變性、壞死（＋～＋＋），神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，胞體腫脹，尼氏小體減少或消失，出現(xiàn)不同程度的核深染、核固縮、核溶解。該組神經(jīng)元數(shù)目較模型組多。TQ07013mg/kgiv組：10例腦組織中有6例腦組織未見(jiàn)神經(jīng)元變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)改變。4例腦組織神經(jīng)元見(jiàn)輕－中度變性、壞死（＋～＋＋），神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，胞體腫脹，尼氏小體減少或消失，出現(xiàn)不同程度的核深染、核固縮、核溶解。該組神經(jīng)元數(shù)目較模型組多。TQ07011.5mg/kgiv組：10例腦組織中有4例腦組織未見(jiàn)神經(jīng)元變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)改變。6例腦組織神經(jīng)元見(jiàn)輕－中度變性、壞死（＋～＋＋），神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，胞體腫脹，尼氏小體減少或消失，出現(xiàn)不同程度的核深染、核固縮、核溶解，其中2例見(jiàn)篩狀軟化灶形成。與模型組相比，TQ0701對(duì)大鼠腦缺血所致神經(jīng)元變性、壞死有一定的治療作用。TQ0701三個(gè)劑量組中，大腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞和腦實(shí)質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的核固縮、核溶解程度比模型組明顯減輕，軟化灶減少，其中高、中劑量效果比較顯著，而低劑量組的效果相對(duì)不明顯。依達(dá)拉奉3mg/kgiv也對(duì)腦缺血造成的腦組織損傷有明顯保護(hù)作用。第四章討論機(jī)體組織器官正常代謝、功能的維持，有賴于良好的血液循環(huán)，各種原因造成的局部組織器官缺血可使組織細(xì)胞發(fā)生缺血性損傷。缺血性腦血管病又稱腦梗死，指腦的主要供血?jiǎng)用}發(fā)生狹窄或閉塞，引起相應(yīng)部位腦組織的缺血或壞死，其發(fā)病率、死亡率、復(fù)發(fā)率、致殘率均非常高，且并發(fā)癥多[12]。近年來(lái)，人們對(duì)腦缺血的病理生理提出了多種學(xué)說(shuō)，為解釋腦缺血機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。缺血后，在一定條件下恢復(fù)血液再灌注后，部分細(xì)胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞不僅未減輕反而更加嚴(yán)重，這種現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷。目前，缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制尚未充分闡明，大量實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，其主要與自由基損傷、高能磷酸化合物缺乏、細(xì)胞內(nèi)鈣超載等有關(guān)。自由基損傷是其主要損傷途徑之一。腦缺血再灌注后出現(xiàn)一系列的病理生理改變包括能量耗竭、細(xì)胞內(nèi)酸中毒、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、自由基損害、興奮性氨基酸毒性所致的NMDA受體的激活、一氧化氮（NO）的作用等，而這些損傷機(jī)制并不是獨(dú)立發(fā)揮作用的，在很大程度上是相互重疊和密切聯(lián)系的[13，14]。腦缺血的治療目標(biāo)是盡早恢復(fù)血流，改善半暗區(qū)的血液供應(yīng)，抑制缺血再灌所致的損害。Koizumi首先于1986年介紹了一種不開(kāi)顱的方法，即血管內(nèi)線栓閉塞法（線栓法)MCA阻塞(MCAO)模型，隨之1989年Longa等將該方法加以改進(jìn)。由于該方法具有不開(kāi)顱，手術(shù)時(shí)間短，動(dòng)物存活時(shí)間長(zhǎng)，缺血部位恒定，且可以準(zhǔn)確控制缺血及再灌時(shí)間，所以線栓法MCAO模型是目前最廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究的一種模型。我們采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法（MCAO）制備大腦中動(dòng)脈阻塞－再灌注模型，損傷小，穩(wěn)定性高，方法比較可靠。腦缺血再灌注損傷時(shí)最明顯的組織學(xué)變化是腦水腫及腦細(xì)胞的壞死。腦水腫的產(chǎn)生是膜脂質(zhì)過(guò)氧化使膜的結(jié)構(gòu)破壞和鈉泵功能障礙的結(jié)果。大鼠局部腦缺血再灌注實(shí)驗(yàn)證明，TQ0701能夠降低缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和減少梗塞范圍。同時(shí)組織病理學(xué)報(bào)告證明TQ0701對(duì)大鼠腦缺血所致神經(jīng)元變性、壞死有一定的治療作用。因此，TQ0701對(duì)大鼠腦缺血-再灌注損傷有良好的保護(hù)作用，有一定的研究開(kāi)發(fā)前景。參考文獻(xiàn)[1]MarksAR.Intracellularcalcium-releasechannels:regulatorofcelllifeanddeath[J].AmJPhysiology,1997;272:H597.[2]HastedE,BergJ,LongmontIA.Failureofhaloperidoltoprotectagainstcerebralinjurywhengivenafterthestartofhypoxia[J].ActaNeuralScand,1991;83:286.[3]ClarkWM,MaddenKP,RatlineR,etal.Reductionofcentralnervoussystermischemicinjuryinrabbitsusingleukocyteadhesionantibodytreatment[J].Stroke,1991;22:887.[4]WangPY,KaoCH,MuiMY,etal.Leukocyteinfiltrationinacutehemisphericstroke[J].Stroke,1993;24:236.[5]NedergandM.Mechanismsofbraindamageinfocalcerebralischemia[J].ActaNeuralScand,1988;77:8121.[6]潘力雄,蠔志彬,陳以慈.c-fos蛋白在大鼠腦缺血再灌流海馬中的表達(dá)及其與黃蓮素抗腦缺血的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,1996;13:57.[7]SatohK,IkedaY,ShiodaS,etal.Edaravonescavengesnitricoxde[J].RedoxRep,2002,7(4):219-222.[8]張均田主編.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法（下冊(cè)）[M].北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998.1240～1247.[9]徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第三版）[M]，北京：人民衛(wèi)生出版社2002.1065～1067.[10]吳雪豐，王秋娟，樓鳳昌.銀杏內(nèi)酯對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001,32(2):141～145.[11]王志萍，曾因明.線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型的研究進(jìn)展[J].《國(guó)外醫(yī)學(xué)》麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè)，2005，26（3）：144～146.[12]魯敏華，宋水江.補(bǔ)體與缺血性腦血管病[J].國(guó)際腦血管病雜志，2007，15（9）：696～699.[13]蔡紫峰，楊卓．腦缺血損傷的研究進(jìn)展[J].繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2004,18(4):53～55.[14]張立群，陳潔麗，程焱，等.尼莫地平對(duì)局灶性腦缺血鼠腦血影蛋白的影響[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2001，18(5)：300～301.基于C8051F單片機(jī)直流電動(dòng)機(jī)反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機(jī)MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對(duì)良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機(jī)溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機(jī)的通用控制模塊的研究基于單片機(jī)實(shí)現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟停自校正（STR）調(diào)節(jié)器單片機(jī)控制的二級(jí)倒立擺系統(tǒng)的研究基于增強(qiáng)型51系列單片機(jī)的TCP/IP協(xié)議棧的實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的蓄電池自動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)基于32位嵌入式單片機(jī)系統(tǒng)的圖像采集與處理技術(shù)的研究基于單片機(jī)的作物營(yíng)養(yǎng)診斷專家系統(tǒng)的研究基于單片機(jī)的交流伺服電機(jī)運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)基于單片機(jī)的泵管內(nèi)壁硬度測(cè)試儀的研制基于單片機(jī)的自動(dòng)找平控制系統(tǒng)研究基于C8051F040單片機(jī)的嵌入式系統(tǒng)開(kāi)發(fā)基于單片機(jī)的液壓動(dòng)力系統(tǒng)狀態(tài)監(jiān)測(cè)儀開(kāi)發(fā)模糊Smith智能控制方法的研究及其單片機(jī)實(shí)現(xiàn)一種基于單片機(jī)的軸快流CO〈,2〉激光器的手持控制面板的研制基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究基于CYGNAL單片機(jī)的在線間歇式濁度儀的研制基于單片機(jī)的噴油泵試驗(yàn)臺(tái)控制器的研制基于單片機(jī)的軟起動(dòng)器的研究和設(shè)計(jì)基于單片機(jī)控制的高速快走絲電火花線切割機(jī)床短循環(huán)走絲方式研究基于單片機(jī)的機(jī)電產(chǎn)品控制系統(tǒng)開(kāi)發(fā)基于PIC單片機(jī)的智能手機(jī)充電器基于單片機(jī)的實(shí)時(shí)內(nèi)核設(shè)計(jì)及其應(yīng)用研究基于單片機(jī)的遠(yuǎn)程抄表系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的煙氣二氧化硫濃度檢測(cè)儀的研制基于微型光譜儀的單片機(jī)系統(tǒng)單片機(jī)系統(tǒng)軟件構(gòu)件開(kāi)發(fā)的技術(shù)研究基于單片機(jī)的液體點(diǎn)滴速度自動(dòng)檢測(cè)儀的研制基于單片機(jī)系統(tǒng)的多功能溫度測(cè)量?jī)x的研制基于PIC單片機(jī)的電能采集終端的設(shè)計(jì)和應(yīng)用基于單片機(jī)的光纖光柵解調(diào)儀的研制氣壓式線性摩擦焊機(jī)單片機(jī)控制系統(tǒng)的研制基于單片機(jī)的數(shù)字磁通門(mén)傳感器基于單片機(jī)的旋轉(zhuǎn)變壓器-數(shù)字轉(zhuǎn)換器的研究基于單片機(jī)的光纖Bragg光柵解調(diào)系統(tǒng)的研究單片機(jī)控制的便攜式多功能乳腺治療儀的研制基于C8051F020單片機(jī)的多生理信號(hào)檢測(cè)儀基于單片機(jī)的電機(jī)運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)設(shè)計(jì)Pico專用單片機(jī)核的可測(cè)性設(shè)計(jì)研究基于MCS-51單片機(jī)的熱量計(jì)基于雙單片機(jī)的智能遙測(cè)微型氣象站MCS-51單片機(jī)構(gòu)建機(jī)器人的實(shí)踐研究基于單片機(jī)的輪軌力檢測(cè)基于單片機(jī)的GPS定位儀的研究與實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的電液伺服控制系統(tǒng)用于單片機(jī)系統(tǒng)的MMC卡文件系統(tǒng)研制基于單片機(jī)的時(shí)控和計(jì)數(shù)系統(tǒng)性能優(yōu)化的研究基于單片機(jī)和CPLD的粗光柵位移測(cè)量系統(tǒng)研究單片機(jī)控制的后備式方波UPS提升高職學(xué)生單片機(jī)應(yīng)用能力的探究基于單片機(jī)控制的自動(dòng)低頻減載裝置研究基于單片機(jī)控制的水下焊接電源的研究基于單片機(jī)的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于uPSD3234單片機(jī)的氚表面污染測(cè)量?jī)x的研制基于單片機(jī)的紅外測(cè)油儀的研究96系列單片機(jī)仿真器研究與設(shè)計(jì)基于單片機(jī)的單晶金剛石刀具刃磨設(shè)備的數(shù)控改造基于單片機(jī)的溫度智能控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)基于MSP430單片機(jī)的電梯門(mén)機(jī)控制器的研制基于單片機(jī)的氣體測(cè)漏儀的研究基于三菱M16C/6N系列單片機(jī)的CAN/USB協(xié)議轉(zhuǎn)換器基于單片機(jī)和DSP的變壓器油色譜在線監(jiān)測(cè)技術(shù)研究基于單片機(jī)的膛壁溫度報(bào)警系統(tǒng)設(shè)計(jì)基于AVR單片機(jī)的低壓無(wú)功補(bǔ)償控制器的設(shè)計(jì)基于單片機(jī)船舶電力推進(jìn)電機(jī)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)基于單片機(jī)網(wǎng)絡(luò)的振動(dòng)信號(hào)的采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的大容量數(shù)據(jù)存儲(chǔ)技術(shù)的應(yīng)用研究基于單片機(jī)的疊圖機(jī)研究與教學(xué)方法實(shí)踐基于單片機(jī)嵌入式Web服務(wù)器技術(shù)的研究及實(shí)現(xiàn)基于AT89S52單片機(jī)的通用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的多道脈沖幅度分析儀研究機(jī)器人旋轉(zhuǎn)電弧傳感角焊縫跟蹤單片機(jī)控制系統(tǒng)基于單片機(jī)的控制系統(tǒng)在PLC虛擬教學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用研究基于單片機(jī)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)通信研究與應(yīng)用基于PIC16F877單片機(jī)的莫爾斯碼自動(dòng)譯碼系統(tǒng)設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的模糊控制器在工業(yè)電阻爐上的應(yīng)用研究基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究與開(kāi)發(fā)基于Cygnal單片機(jī)的μC/OS-Ⅱ的研究基于單片機(jī)的一體化智能差示掃描量熱儀系統(tǒng)研究基于TCP/IP協(xié)議的單片機(jī)與Internet互聯(lián)的研究與實(shí)現(xiàn)變頻調(diào)速液壓電梯單片機(jī)控制器的研究基于單片機(jī)γ-免疫計(jì)數(shù)器自動(dòng)換樣功能的研究與實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的倒立擺控制系統(tǒng)設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)單片機(jī)嵌入式以太網(wǎng)防盜報(bào)警系統(tǒng)基于51單片機(jī)的嵌入式Internet系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)單片機(jī)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)在擠壓機(jī)上的應(yīng)用\t"_bla