細(xì)菌劃線分離與純培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)4：細(xì)菌劃線分離與純培養(yǎng)2021/5/91123Fcous 1.掌握需氧菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)。2．了解細(xì)菌的分離培養(yǎng)原則及常用的方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.融化培養(yǎng)基，傾注平板。2.用普通瓊脂平板每人做一次劃線分離培養(yǎng)。（病料）3.用普通肉湯做一管大腸桿菌的移植培養(yǎng)。注：上述接種的培養(yǎng)基注明班組后進(jìn)行培養(yǎng)。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、作業(yè)1.為什么要進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)？2.進(jìn)行分離培養(yǎng)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？3.細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法有哪些？（重點(diǎn)敘述平板劃線法）2021/5/92“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四小結(jié)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中，細(xì)菌的分離培養(yǎng)是重要的基本技術(shù)之一。從混雜微生物中獲得單一菌株純培養(yǎng)的方法稱為分離。純培養(yǎng)是指一株菌種或者一個(gè)培養(yǎng)物中所有的細(xì)菌都是由一個(gè)細(xì)胞分裂、繁殖產(chǎn)生的后代。12分離培養(yǎng)的目的在于從被檢的材料中，或者從眾多雜菌中分離出純的病原菌。細(xì)菌分離培養(yǎng)應(yīng)先從被檢材料或者病料中分離培養(yǎng)出單個(gè)菌落，然后取可疑菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，再將純培養(yǎng)物移植培養(yǎng)。2021/5/93“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)3需氧性細(xì)菌分離培養(yǎng)法1、平板劃線分離法2、傾注平皿分離法3、芽孢需氧菌分離培養(yǎng)法4、利用化學(xué)藥品的分離培養(yǎng)法5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離法6、瓊脂斜面分離法7、瓊脂平板涂布分離法8、營(yíng)養(yǎng)肉湯分離法2021/5/94“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)4厭氧性細(xì)菌分離培養(yǎng)法1、生物學(xué)方法植物組織（馬鈴薯、燕麥、發(fā)芽谷物）動(dòng)物組織（新鮮動(dòng)物組織、加熱的肌肉）2、化學(xué)方法焦性沒(méi)食子酸法、硫乙醇酸鈉法3、物理學(xué)方法利用加熱、密封、抽氣等物理方法，驅(qū)除或者隔絕環(huán)境及培養(yǎng)基中的氧氣，造成厭氧環(huán)境。2021/5/95“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)5兼性厭氧性細(xì)菌分離培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)中，有少數(shù)細(xì)菌（如牛型布氏桿菌）在含有5%--10%二氧化碳的環(huán)境下才能生長(zhǎng)。2021/5/96“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法菌種被其他雜菌污染時(shí)或混合菌懸液常用平板劃線法進(jìn)行純種分離。此方法是借助將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散的由單個(gè)微生物繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化目的。2021/5/97“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法1、劃線分離的培養(yǎng)基必須事先倒好，需充分冷卻待平板稍干后才可使用。2、為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每一個(gè)平皿傾倒約20ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面應(yīng)光滑。3、劃線分離主要有連續(xù)劃線和分區(qū)劃線兩種。2021/5/98“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本穿刺接種法:用于觀察細(xì)菌動(dòng)力傾注培養(yǎng)法:用于細(xì)菌計(jì)數(shù)液體培養(yǎng)基接種法斜面接種法2021/5/99“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)7細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境2021/5/910“”實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法三段分區(qū)法四段分區(qū)法2021/5/911實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)分區(qū)劃線法(3區(qū))第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)2021/5/912實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)連續(xù)劃線法2021/5/9132021/5/914斜面接種法及接種后菌落生長(zhǎng)示意圖

2021/5/915實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：★培養(yǎng)溫度：37℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）★培養(yǎng)時(shí)間：18～24h2021/5/916實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察記錄細(xì)菌生長(zhǎng)情況的觀察觀察瓊脂平板表面生長(zhǎng)的各種菌落，注意其大小、形狀、邊緣、表面結(jié)構(gòu)、透明度、顏色等性狀。2021/5/917實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在固體培養(yǎng)基觀察記錄菌落★定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)?！锞涮卣鳎捍笮?、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性★菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物2021/5/918細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺線邊緣模糊。無(wú)鞭毛細(xì)菌：只沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線邊緣清晰。2021/5/919實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)三小結(jié)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象混濁沉淀：多見(jiàn)于鏈狀排列的細(xì)菌菌膜：多見(jiàn)于厭氧菌2021/5/9202021/5/921單菌落（clone)菌苔(lawn)2021/5/922液體培養(yǎng)時(shí)的群體形態(tài)