不同煎煮方式對復(fù)方丹參湯劑丹酚酸B溶出的影響

不同煎煮方式對復(fù)方丹參湯劑丹酚酸 B溶出的影響隨著人們就醫(yī)理念的改變，中醫(yī)療法得到臨床廣泛關(guān)注。中藥湯劑具有起效快、吸收快、作用持久、并發(fā)癥少等優(yōu)勢。但中藥湯劑的傳統(tǒng)煎煮方式操作較為復(fù)雜，以水為溶媒，需準確控制時間、次數(shù)、劑量、溫度及儲存條件，耗時長且費力，煎煮所得湯劑保存難度較大，不利于患者服用[2-3] 。臨床早期煎煮湯劑主要以高壓式單煎為主，隨著醫(yī)療技術(shù)、煎藥機的不斷發(fā)展與更新，臨床研究制出兩煎常壓煎藥機，并逐漸應(yīng)用于中藥湯劑煎煮中 [4]。但臨床研究人員對不同煎煮方法制備的湯劑質(zhì)量具有不同看法。為此，研究采用砂鍋煎煮、高壓煎藥機煎煮、兩煎常壓煎藥機煎煮 3種煎煮方法對我院常用的復(fù)方丹參湯劑進行煎煮與制備，并分析其有效成分含量，以保證湯劑制備質(zhì)量。儀器與材料1.1 儀器YFML20型常壓煎藥機（北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司）；GNG型電氣式高壓煎藥機； AE240型電子天平，Agilent1100型高效液相色譜儀。1.2材料復(fù)方丹參湯劑包括梔子、丹參及地黃等10味中藥材，所有藥材均由安徽新興中藥材飲片有限公司提供，經(jīng)我院經(jīng)驗資深的中藥醫(yī)師鑒定，符合中國藥典相關(guān)要求。丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所） ，乙腈、甲醛為色譜純；水作為超純水，其他試劑均作為分析純。方法2.1復(fù)方丹參湯劑煎煮制備①砂鍋煎煮：根據(jù)處方量稱取中藥材，加1.2L水進行30min浸泡，使用武火將藥材加熱煮沸，后使用文火煎煮30min，對所得藥液進行過濾得到煎液，藥渣加1L水再次進行煎煮20min，煮沸后濾出煎液，將2次煎液混合，濃縮為600mL并進行分包裝，每袋100mL，注明批次，在室溫條件下進行保存，備用；重復(fù)制備5批。②高壓煎藥機煎液：根據(jù)處方量稱取中藥材，加2.2L水進行30min浸泡，在110℃溫度下進行加熱煮沸50min，將煎液濾出，濃縮成600mL并進行分包裝，每袋100mL，注明批次，在室溫條件下進行保存，備用；重復(fù)制備5批。③兩煎常壓煎藥機煎液：根據(jù)處方量稱取中藥材，加1.2L水進行30min浸泡，加熱煎煮并煮沸30min，將煎液濾出；藥渣加1L水進行第2次煎煮，煮沸20min，后將煎液濾出，將2次煎液合并，濃縮成600mL并進行分包裝，每袋100mL，注明批次，在室溫條件下進行保存，備用；重復(fù)制備5批。2.2 色譜測定條件 型號：LunaC18柱（4.6mm×250mm，5μL），流動相為乙腈 -甲醛-甲酸-水（10∶[KG-*3/5]30∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]59 ），檢測波長為286mm，流速為1.0mL/min，進樣量為 10μL。丹酚酸 B的計算理論板數(shù)≥2000。2.3對照品溶的制備精密稱取10mg丹酚酸B對照品，放于50mL量瓶內(nèi)，加適量水進行稀釋到刻度并搖勻，得到對照品。2.4供試品溶液的制備精密量取1mL復(fù)方丹參湯劑，放于50mL量瓶內(nèi)，加適量水進行稀釋到刻度并搖勻，使用0.45μm微孔濾膜對藥液進行過濾， 所得續(xù)濾液即為供試品。2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取10mg丹酚酸B對照品，置于20mL量瓶內(nèi)，加適量水進行稀釋到刻度并搖勻，作為對照品儲備溶液。精密稱取定量對照品儲備溶液，加水分別稀釋為5、25、100、125、200、300、400、500mg/L等一系列溶液，依次分開進樣，橫坐標為丹酚酸B對照品質(zhì)量濃度，縱坐標為峰面積，線性回歸方程Y=817.33X-766.22，r=0.999，表示丹酚酸B對照品質(zhì)量濃度范圍為21～417mg/L，與峰面積存在良好線性關(guān)系。2.6精密度試驗根據(jù)要求精密稱取10μL丹酚酸B對照品溶液，進行 6次重復(fù)進樣，結(jié)果顯示丹酚酸 B?φ掌販迕婊?積分值RSD為1.57%，儀器具有良好的精密度。2.7 重復(fù)性試驗 根據(jù)試驗要求稱取同一批次兩煎常壓煎藥機煎液，參照上述 2.4中供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，參照2.2色譜條件進行測定，結(jié)果顯示丹酚酸B對照品的平均質(zhì)量濃度為 2.782g/L，RSD為1.02%，說明重復(fù)性試驗具有良好的重復(fù)性。2.8 穩(wěn)定性試驗

根據(jù)試驗要求精密稱取

10μL2.4

項供試品溶液，分別在

0、1、3、5、7、9、12h

進行進樣，結(jié)果顯示峰面積RSD為0.54%，說明12h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較好。2.9 加樣回收試驗 根據(jù)要求精密量取 9份同一批次2.782g/L 復(fù)方丹參湯劑， 1mL/份，分別放于 50mL量瓶內(nèi)，分成三組，每組分別加入 0.8mL、1.0mL、1.2mL的2.748g/L丹酚酸B對照品溶液，對丹酚酸 B含量進行測定，經(jīng)計算低質(zhì)量濃度、中質(zhì)量濃度及高質(zhì)量濃度的 RSD，平均加樣回收率分別為 1.81%、96.06%、1.62%、98.48%，0.77%、98.48%。2.10 樣品測定 稱取砂鍋煎煮、高壓煎藥機煎煮、兩煎常壓煎藥機煎煮所得的復(fù)方丹參湯劑，各

5份，分別參照

1.2.4中供試品溶液制備方法進行供試品溶液制備，參照

2.2色譜條件進行峰面積測定，使用外標法對供試品溶液內(nèi)丹酚酸含量進行計算，平均質(zhì)量濃度結(jié)果分別顯示為2.534、2.673、2.766，RSD結(jié)果分別為 3.31%、1.16%、1.25%。討論中藥湯劑是指中藥粗顆粒、中藥飲片加水煎煮并煮沸后，清除藥渣、濾取藥液所得的液體制劑，被廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床指標。中藥湯劑能充分滿足中醫(yī)辨證治療需求，患者服用后可快速吸收，且起效快、作用強，可加快病情好轉(zhuǎn)速度 [5]。臨床制備中藥湯劑多采用煎煮方法，包括砂鍋煎煮、高壓煎藥機煎煮、兩煎常壓煎藥機煎煮等；部分研究人員針對不同煎煮方法制備的中藥湯劑質(zhì)量存在爭議。研究結(jié)果顯示，三種煎煮方法所煎煮溶液的高效液相色譜儀結(jié)果顯示，其所含成分一致；但兩煎常壓煎藥機煎煮法制備的藥液內(nèi)具有較高的丹酚酸 B含量，高壓煎藥機煎煮所得藥液內(nèi)丹酚酸 B含量低于兩煎常壓煎藥機煎煮法，砂鍋煎煮法所得藥液內(nèi)丹酚酸 B含量最低。分析原因為兩煎常壓煎藥機煎煮法具有一定的機械裝置，可對藥渣殘留藥汁進行擠壓，充分擠壓出藥渣內(nèi)所含有效成分，增加藥液濃度，促使藥液藥效得到最佳發(fā)揮；兩煎常壓煎藥機是在一定的密閉系統(tǒng)內(nèi)進行藥物煎煮，可避免或減少藥物有效成分揮發(fā)；同時兩煎常壓煎藥機經(jīng) 2次藥物煎煮，可充分提取藥物有效成分。傳統(tǒng)1次煎煮所得藥物有效成分的有效提取率約為50%，2次可提高至75%～80%，3次可提高至90%～95%，避免有效成分流失[6]。藥物煎煮過程中，其有效成分由藥材組織水擴散到藥材外部溶液，在藥材內(nèi)外液濃度達到平衡時，有效成分停止溶出，在此情況下濾出藥液并加入清水，可形成新的?舛炔睿?利于臨床繼續(xù)提取藥物有效成分[7]。高壓煎藥機在藥材煎煮期間存在一定局限性，無法進行攪拌，藥物只能煎煮1次，有效成分提取率較低。高壓煎藥機的工作壓力高達152～203kPa，溫度高達 105～120℃；而兩煎常壓煎藥機可在常壓條件下進行煎煮，溫度不高于 100℃，可在保留先煎后下的傳統(tǒng)煎煮操作情況下，進