大腸埃希桿菌性胃腸炎

關(guān)于大腸埃希桿菌性胃腸炎第1頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月概述腸桿菌科(enterobacteriaceae)包括一大群生物學性狀相似的革蘭陰性桿菌。這類細菌大多數(shù)寄居在人和動物腸道中，可隨人及動物的排泄物廣泛分布于水、土壤和腐物中。其中有些細菌對人類有明顯的致病作用，如沙門菌屬、志賀菌屬和某些病原性大腸埃希桿菌等；而大多數(shù)是腸道的正常菌群，一般不致病，但是當宿主機體狀態(tài)改變或細菌進入腸道以外的部位，也可作為條件致病菌而引起多種疾病，如菌血癥、腦膜炎、肺炎、腎盂腎炎或傷口感染等疾病。第2頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月概述近年由于抗生素、激素及免疫抑制藥等的廣泛使用，條件致病菌所致疾病日益增多，已成為醫(yī)學領(lǐng)域的重要問題。大腸埃希桿菌(Escherichiacoli)俗稱大腸桿菌，是人類和動物的腸道正常菌群的主要成員，每克糞便中約含109個大腸埃希桿菌。隨糞便排出后，廣泛分布于自然界，一旦水、牛乳、食品及其他物品檢出大腸埃希桿菌，即意味著這些物品直接或間接地被糞便污染，故在衛(wèi)生學上被作為衛(wèi)生監(jiān)督的指示菌。正常情況下，大腸埃希桿菌不致病，而且還能合成維生素B和K，產(chǎn)生大腸菌素，對機體有利。第3頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月概述但當機體抵抗力下降或侵入腸外組織或器官時，可作為條件致病菌而引起腸道外感染。有些血清型的大腸埃希桿菌可引起腸道感染。此外，某些大腸埃希桿菌還被用于分子生物學的實驗研究。引起人類腹瀉的大腸埃希桿菌總稱為病原性大腸埃希桿菌，依其發(fā)病機制，可分為致病性大腸埃希桿菌(pathogenicE.coli)、產(chǎn)毒性大腸埃希桿菌(toxingenicE.coli，TEC)、侵襲性大腸埃希桿菌(enteroinvasiveE.coli，IEC)、出血性大腸埃希桿菌(hemorrhagicE.coli，HEC)、集聚性大腸埃希桿菌(aggregativeE.coli，EAEC)。第4頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月流行病學本病的傳染源主要是病人和病原攜帶者，病人有急性期病人和慢性期病人。暴發(fā)大多由于受污染的食物和水而傳播。另外某些動物，主要是家畜、家禽等也可作為本病的傳染源。本病是一種世界流行性疾病，以熱帶和亞熱帶地區(qū)、衛(wèi)生條件比較落后地區(qū)發(fā)病高。溫帶和寒帶地區(qū)發(fā)病有明顯季節(jié)性。第5頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月病因本菌為革蘭陰性桿菌，大小為(1.1～1.5)m×(2.0～6.0)m(活菌)或(0.4～0.7)m×(1.0～3.0)m(染色菌)。多數(shù)菌株有周身鞭毛，能運動，周身還有菌毛，無芽孢。某些菌株有包膜。菌毛位于菌體表層，纖維狀附著物，屬疏水蛋白質(zhì)成分，具有較好的抗原性，可刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。為兼性厭氧菌，15～45℃可發(fā)育，最適宜生長溫度為37℃，最適宜pH為7.4～7.6。在腸道菌選擇培養(yǎng)基上，因能發(fā)酵乳糖產(chǎn)糖，使指示劑變色而形成有色菌落。第6頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月病因而腸桿菌科中的致病菌多數(shù)不分解乳糖，菌落無色，此點對腸桿菌科致病菌的分離有選擇作用。發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇等多種糖醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣；對蔗糖、衛(wèi)矛醇、棉籽糖、鼠李糖等因菌株而異。IMVC試驗為--，脲酶、苯丙氨酸、丙二酸鹽等陰性。抗原構(gòu)造較復雜，主要有O、H、K3種抗原。O抗原為耐熱多糖磷脂復合物，目前已有171種，是血清分型的基礎(chǔ)；H抗原為不耐熱的蛋白質(zhì)，至今已建立了56個抗原；K抗原為包膜抗原，至今已知有100種。第7頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月病因本菌在自然界水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在溫度較低的糞便中存活更久。易產(chǎn)生耐藥性。耐藥性的產(chǎn)生，主要是由帶有耐藥因子(R因子)的質(zhì)粒的傳遞而獲得。第8頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制

1.侵襲力大腸埃希桿菌具有K抗原和菌毛。K抗原有抗吞噬作用，有抵抗補體和抗體的作用；菌毛能幫助細菌的黏附作用。產(chǎn)毒性大腸埃希桿菌的這種纖毛樣菌毛稱定居因子或定植因子(colonizationfactor)，包括CFAI、CFAⅡ。它們由細菌質(zhì)?？刂疲梢酝ㄟ^質(zhì)粒傳遞給其他菌株，抗原性很強，能刺激宿主機體產(chǎn)生特異性抗體。有侵襲力的菌株可以侵犯腸道黏膜表層引起炎癥。

2.腸毒素ETEC在生長繁殖過程中釋放出來的毒素稱大腸埃希桿菌腸毒素。第9頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制按其對熱的穩(wěn)定性分為：耐熱腸毒素(heat-stableenterotoxin，ST)、不耐熱腸毒素(heat-labileenterotoxir，LT)。ST與LT均由染色體外的遺傳物質(zhì)質(zhì)粒所編碼，控制合成。EFEC某些菌株產(chǎn)生細胞毒性物質(zhì)。

(1)不耐熱腸毒素(LT)：類似霍亂弧菌的腸毒素，可刺激小腸上皮細胞腺苷環(huán)化酶，使ATP轉(zhuǎn)化為cAMP，促進小腸液體過度分泌，超過腸道再吸收能力，以致出現(xiàn)腹瀉。耐熱腸毒素(ST)是通過激活細胞上的鳥苷酸環(huán)化酶，使胞內(nèi)cGMP量增加，導致液體平衡紊亂而引起腹瀉。第10頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制

(2)內(nèi)毒素：大腸埃希桿菌細胞壁有內(nèi)毒素活性，其毒性部位為脂類A；O特異多糖有助于細菌抗宿主的防御功能。

3.黏附素黏附素(BFP)即以前所稱的致病性大腸埃希桿菌黏附因子(EAF)，是該菌的一個大質(zhì)粒所編碼的一種菌毛，與黏附作用密切相關(guān)。由BFP介導的黏附為局部黏附，細菌不是均勻地分布在細胞表面，而是呈叢狀或微菌落樣存在于細胞上。同時，這種黏附為遠距離黏附，細菌菌體并不直接與細胞接觸，兩者靠菌毛相連。第11頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制

4.緊密素緊密素以前曾稱為EAE蛋白，是腸致病性大腸埃希桿菌的一種次要外膜蛋白，分子量為94kD。與耶爾森菌的侵襲素N末端區(qū)域有高度的同源性。其編碼基因eaeA位于菌體的染色體上。新近發(fā)現(xiàn)出血性大腸埃希桿菌等也有eaeA的類似結(jié)構(gòu)。緊密素是致病性大腸埃希桿菌近距離黏附和侵入宿主細胞的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。它與宿主細胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合后，導致細胞內(nèi)Ca2濃度上升及蛋白質(zhì)的磷酸化等作用，使得細胞支架發(fā)生重排，在細菌黏附處形成一個致密的纖維樣肌動蛋白墊，從而使細菌侵入細胞。第12頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制此時感染的細胞表現(xiàn)為刷狀緣脫落，并失去微絨毛。

5.eaeA基因族應(yīng)用TnphoA插入含質(zhì)粒的EPEC誘發(fā)突變，結(jié)果在329株鑒定出有22株無侵襲力，其中5株TnphoA插入在染色體的eaeA基因中，證明侵襲力與緊密貼著、緊密素的產(chǎn)生有關(guān)。另有2株TnphoA插入在eaeA的下方，則失去對上皮細胞緊貼能力，但仍能產(chǎn)生緊密素。這說明在：

EPEC中存在一個eae基因簇，在eaeA下方的基因稱為eaeB。通過遺傳學研究，結(jié)合上述致病因素，Donnenberg提出EPEC致病機制共分3期進行。第13頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)病機制第1期由EAF質(zhì)粒上bfpA編碼的BFP介導，使細菌相互黏附并黏附于微絨毛上。同時質(zhì)粒及染色體位點導致初期的局部黏附。第2期染色體基因啟動信號轉(zhuǎn)換，導致蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸化、細胞內(nèi)鈣濃度升高、早期細胞支架破壞、微絨毛改變以及液體分泌。第3期隨感染的進展，eae基因簇被激活，產(chǎn)生的緊密素使細菌與上皮細胞膜緊貼，使細胞支架破壞增強。細菌黏附下方肌動蛋白、肌球蛋白等大量集聚。此時一部分細菌侵入上皮細胞。第14頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)由于5種不同類型的大腸埃希桿菌各菌型間的毒力、侵襲情況不同及機體抵抗力的差異，臨床表現(xiàn)亦不一致。一類是細菌只附著于腸黏膜上生長繁殖并產(chǎn)生腸毒素，通過活化腸壁細胞的腺苷環(huán)化酶，當胞內(nèi)環(huán)磷腺苷(cAMP)水平升高時，可促進小腸腸液分泌亢進(LT)，而ST毒素引起的腸液分泌亢進是環(huán)化鳥苷(cGMP)介導。同時腸毒素亦能損傷周圍血管的上皮，引起腹瀉，排出大量水樣便(臨床上類似霍亂樣疾病)。另一類型是細菌能侵入腸黏膜上皮細胞，大量繁殖并能產(chǎn)生毒性物質(zhì)引起一種網(wǎng)狀液體溢出物流進腸腔，最后上皮細胞破裂，導致腸黏膜壞死和產(chǎn)生潰瘍，大便則帶膿血(臨床類似痢疾樣疾病)。第15頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)主要病變以回腸為主。

1.潛伏期短者僅數(shù)小時，大腸埃希桿菌性食物中毒，可在2h內(nèi)出現(xiàn)嘔吐、腹瀉。一般潛伏期為1～3天。

2.臨床表現(xiàn)(1)輕型：一般不發(fā)熱，以食欲減退、腹瀉為主要表現(xiàn)。每天大便3～6次不等，常呈黃色或綠色消化不良樣稀便，多呈混有少量泡沫的稀湯樣便，并伴有腹脹、腹痛及惡心。

(2)中型：可有低熱，除具有輕型癥狀外并有惡心嘔吐，腹瀉次數(shù)較頻，多呈水樣便，可有輕度脫水及酸中毒癥狀。第16頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)

(3)重型：體溫呈不規(guī)則熱型，38～40℃持續(xù)數(shù)天，每天腹瀉10～20次，常為黃綠色水樣便，混有少量黏液，可有腥臭味，亦見有牛奶色或米湯樣便，與霍亂基本相似，多有惡心嘔吐，嬰幼兒常出現(xiàn)驚厥。由于大量吐瀉呈現(xiàn)明顯脫水和酸中毒癥狀，可出現(xiàn)急性腎衰。在孟加拉國ETEG腹腹瀉幼兒中約有30%出現(xiàn)中等或嚴重脫水，成人病例中嚴重脫水者更多，常不能與霍亂區(qū)別，若治療不及時，嬰幼兒患者可在數(shù)天內(nèi)死亡。EIEC腹瀉與急性菌痢相似。第17頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)EHEC感染癥的主要癥狀，是血便和劇烈的腹痛。EAEC引起的腹瀉呈持續(xù)性(＞14天)，有血性便，并有發(fā)熱(38℃)和嘔吐等癥狀。

3.脫水與電解質(zhì)紊亂(1)脫水：根據(jù)體內(nèi)失水程度可分為輕、中、重3度。輕度脫水眼窩稍凹陷，脈搏尚屬正常；中度脫水除眼窩、前囟凹陷外，伴有皮膚缺乏彈性，易抓起，皮膚恢復時間為2～5s，指紋皺癟，脈細數(shù)；重度脫水者發(fā)紺，皮膚抓起不易恢復，血壓下降，常出現(xiàn)微循環(huán)障礙，肌肉痙攣，脈微弱，出現(xiàn)尿少或尿閉。第18頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)

(2)酸中毒：呼吸明顯加深，CO2結(jié)合力在18mmol/L以下，口唇呈櫻桃紅色，呼吸中常有酮味，重癥者出現(xiàn)煩躁、嗜睡、昏迷、驚厥，甚至休克。CO2結(jié)合力在11.25mmol/L以下。

(3)低鉀血癥：經(jīng)補液治療后，血液濃縮現(xiàn)象得到糾正，尿量增加，加速血鉀的排泄，同時輸入的葡萄糖合成糖原時需將鉀移入細胞內(nèi)，促使血清鉀降低而出現(xiàn)缺鉀癥狀。明顯的低血鉀癥狀多在腹瀉1周后出現(xiàn)，嚴重者出現(xiàn)軟癱甚至呼吸肌麻痹、心律失常、昏迷，可危及生命。第19頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床表現(xiàn)

(4)低鈣血癥：常發(fā)生在輸血或糾正酸中毒后?；純撼霈F(xiàn)哭鬧不安、四肢肌肉緊張、手足抽搐、驚厥和腱反射亢進。第20頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月并發(fā)癥惡心嘔吐，腹瀉次數(shù)較頻，多呈水樣便。由于大量吐瀉呈現(xiàn)明顯脫水和酸中毒癥狀，可出現(xiàn)急性腎衰。若治療不及時，嬰幼兒患者可在數(shù)天內(nèi)死亡。第21頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查

1.采集標本以無菌棉拭子蘸取腹瀉病患者糞便，如無糞便，以浸濕磷酸鹽緩沖液的直腸拭子插入肛門4～6cm(嬰幼兒2～3cm)處，在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)擦取直腸表面黏液后取出，盛于運送或保存液中，如不能及時送檢，樣品應(yīng)在4℃冷藏保存，但以不超過8h為宜。

2.增菌和分離培養(yǎng)對于大腸埃希桿菌的分離應(yīng)在初代分離時選用弱選擇性培養(yǎng)基，如伊紅亞甲藍、中國藍薔薇酸式山梨醇麥康凱平板。劃線分離，35～37℃培養(yǎng)18～24h后，觀察菌落形態(tài)特征，選取紫紅色或暗紅色、大小1～3mm、邊緣整齊有光澤、中央凸起的單個菌落進行鑒定，鑒定程序見圖1。第22頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查

3.鑒定(1)初步鑒定：根據(jù)菌落特征、涂片染色的菌形及染色反應(yīng)，取純培養(yǎng)物細菌作圖1所示生化反應(yīng)，凡符合于表1所示結(jié)果可初步鑒定為大腸埃希桿菌。

(2)最后鑒定：一般常規(guī)檢驗做到上述初步鑒定即可，必要時可按《伯杰系統(tǒng)細菌學手冊》所列生化反應(yīng)做出最后鑒定，其中主要的鑒定試驗為：觸酶陽性，氧化酶陰性；發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸，不發(fā)酵肌醇；IMVC反應(yīng)分別為，，-，-(占94.6%)；脲酶陰性，H2S陰性，苯丙氨酸脫氨酶陰性，硝酸鹽還原陽性，動力多數(shù)陽性。第23頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查簡便的方法是采用腸桿菌科試劑盒，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果編碼后做出最后鑒定。

(3)鑒定試驗：某些大腸埃希桿菌，尤其是無動力的不發(fā)酵乳精株，應(yīng)與志賀菌相鑒別，二者的主要鑒別試驗可用醋酸鈉和葡萄糖銨利用試驗及黏質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸3種試驗。大腸埃希桿菌均為陽性，而志賀菌為陰性。①致病性大腸埃希桿菌：

A.假定試驗：于鑒別平板上菌落生長稠密處挑取培養(yǎng)物，以EPEC的3種多價O血清作玻片凝集試驗。如與某一種多價O血清凝集，再與該多價血清所包含的O單價血清做試驗。第24頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查如與某個O單價血清凝集，再挑取3～5個單個菌落，與該血清作凝集試驗。

B.生化試驗：選擇O單價血清強凝集的菌落接種三糖鐵瓊脂，懸掛靛基質(zhì)試紙片，經(jīng)36℃培養(yǎng)18～20h。凡是乳糖、蔗糖產(chǎn)酸，葡萄糖產(chǎn)酸并多數(shù)產(chǎn)氣，H2S陰性，靛基質(zhì)陽性的菌株，可證實為大腸埃希桿菌。如果靛基質(zhì)為陰性時，還必須V-P試驗為陰性，且不能在西蒙枸櫞酸鹽瓊脂上生長，方可證實為大腸埃希桿菌。

C.血清學證實試驗：刮取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，用生理鹽水制成菌懸液，稀釋至與MacFarland3號比濁管相當?shù)臐舛取５?5頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查0單價血清如果原效價在1∶(160～320)，則可l∶40稀釋(用0.5%鹽水)。在10mm×75mm試管內(nèi)，將稀釋的抗血清與菌懸液等量混合，于50.6℃水溫中16h后觀察結(jié)果。如果出現(xiàn)凝集，可證實為該O因子。②出血性大腸埃希桿菌：已知為出血性腸炎患者的糞便，可劃線接種以山梨醇代替乳糖的麥康凱瓊脂平板。經(jīng)培養(yǎng)后，挑選3～5個山梨醇不發(fā)酵的菌落，以O(shè)157血清(最好同時再以H7血清)作玻片凝集試驗和單管凝集試驗以確定診斷。

第26頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查分離的菌株應(yīng)接種三糖鐵瓊脂，懸掛靛基質(zhì)試紙片，經(jīng)36℃培養(yǎng)18～20h。典型的生化特性為乳糖、蔗糖產(chǎn)酸，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S陰性，靛基質(zhì)陽性。并接種山梨醇發(fā)酵管，為遲緩發(fā)酵。③毒性大腸埃希桿菌：

A.生化試驗：于鑒別平板上挑取可凝菌落5個，一般挑取乳糖發(fā)酵的典型菌落，分別接種三糖鐵瓊脂，懸掛靛基質(zhì)試紙片，經(jīng)36℃培養(yǎng)18～20h。凡是乳糖、蔗糖產(chǎn)酸，葡萄糖產(chǎn)酸并多產(chǎn)氣，H2S陰性，靛基質(zhì)陽性的菌株，可證實為大腸埃希桿菌。第27頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查如果靛基質(zhì)為陰性時，還必須V-P試驗陰性，且不能在西蒙枸櫞酸鹽瓊脂上生長，方可證實為大腸埃希桿菌。

B.腸毒素試驗：產(chǎn)毒性大腸埃希桿菌主要靠腸毒素試驗證實。腸毒素試驗的方法甚多，國內(nèi)目前以雙相瓊脂擴散試驗測定LT，以乳鼠灌胃試驗測定ST，有時亦采用家兔結(jié)扎回腸段試驗以測定LT和ST。當前已有采用基因診斷法測定這兩種腸毒素。

a.雙向瓊脂擴散試驗：將被檢菌株按5點環(huán)形接種于Elek培養(yǎng)基上，以同樣操作，共做兩份，于36℃培養(yǎng)48h。第28頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查在每株菌的菌苔上放一片多黏菌素B紙片，于36℃經(jīng)5～6h，使腸毒素滲入瓊脂中。在離菌苔各5mm處的中央，挖一個直徑4mm的圓孔，并用一滴瓊脂墊底。在孔內(nèi)滴加LT抗毒素30l，并用已知產(chǎn)LT和不產(chǎn)毒菌株作對照。于36℃培養(yǎng)15～20h觀察結(jié)果。在菌斑和抗毒素孔之間出現(xiàn)白色沉淀帶者為陽性，否則為陰性。

b.乳鼠灌胃試驗：將被檢菌株接種于Honda產(chǎn)毒肉湯內(nèi)，于36℃培養(yǎng)24h，3000r/min離心30min，取上清液經(jīng)薄膜濾器過濾，60℃加熱30min，每毫升濾液內(nèi)加入2%伊文思藍溶液0.02ml。第29頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查將此濾液用塑料小管注入1～4天齡的乳鼠胃內(nèi)0.1ml，同時接種3～4只。禁食3～4h后用氯仿麻醉，取出全部腸管，稱量腸管(包括積液)重量及剩余的體重。腸管重量與剩余體重之比大于0.09為陽性，0.07～0.09為可疑。

c.家兔結(jié)扎回腸段試驗：將被檢菌株接種于Honda產(chǎn)毒肉湯，于36℃培養(yǎng)24h，3000r/min離心30min，取上清液經(jīng)薄膜濾器過濾。濾液分成兩份，一份不加熱，供測LT用；另一份60℃加熱30min，供測ST用。取體重2kg家兔，禁食1天。第30頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查麻醉后剖腹，取出回腸段，按10～15cm為一段，分段結(jié)扎。取一段注射肉湯2ml作為陰性對照，另一段注射已知產(chǎn)毒菌肉湯培養(yǎng)物的濾液2ml作為陽性對照。其他各段分別注射待試菌株肉湯培養(yǎng)物的濾液2ml，將腹壁縫合。測定ST時，于注射后6～8h剖腹檢查；測定LT時，于注射后18h剖腹檢查。抽取各腸段內(nèi)的濾液，測定其容量，并測定腸段的長度。積液量(ml)與腸段長度(cm)之比大于1為陽性。

d.血清學試驗：腸毒素試驗陽性菌株可用ETEC有關(guān)的多價O血清及單價血清作玻片凝集試驗，以確定其O抗原。第31頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查④侵襲性大腸埃希桿菌：

A.生化試驗：于鑒別平板上挑取菌落3～5個，一般應(yīng)多挑取與志賀菌相似的不發(fā)酵乳糖的菌落，但發(fā)酵乳糖的優(yōu)勢菌落亦可適當挑取。將挑取的菌落接種半固體管，36℃培養(yǎng)18～24h。有動力的菌株一般可以棄去，除非經(jīng)血清學鑒定為0124。留下無動力的菌株，接種三糖鐵瓊脂，懸掛靛基質(zhì)試紙片，36℃培養(yǎng)18～20h。同時并作賴氨酸脫羧酶試驗。EIEC的典型生化特性為：乳糖、蔗糖不產(chǎn)酸或產(chǎn)酸，葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，H2S陰性，靛基質(zhì)陽性，賴氨酸脫羧酶陰性，除O124外均無動力。第32頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查賴氨酸脫羧酸試驗亦可以放在血清學試驗以后做。

B.血清學試驗：挑取三糖鐵瓊脂培養(yǎng)物，用EIEC的兩個多價O血清作玻片凝集試驗，以確定其O抗原的成分。

C.豚鼠角膜試驗：將菌液滴入豚鼠眼內(nèi)2～5天內(nèi)觀察是否有紅腫、流淚、充血癥狀。

D.ELISA試驗：用已知EIEC或志賀菌屬的有毒菌株免疫家兔，所得之免疫血清用同型的無毒菌株吸收。用ELISA法測定，EIEC各型的有毒菌株及志賀菌屬各型的有毒菌株均為陽性。第33頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查此法系檢測被檢菌的侵襲性多肽，亦可采用基因探針法檢測。⑤集聚性大腸埃希桿菌：集聚性大腸埃希桿菌(EAEC)的重要特征是在Hap-2細胞周圍形成特征性的集聚性黏附。Yamamoto發(fā)現(xiàn)在37℃培養(yǎng)時，EAEC的此種聚集性黏附可發(fā)生在某些液體培養(yǎng)基的生長表面，形成很厚的黏附聚集性菌塊。在25℃或42℃則無此現(xiàn)象，液體培養(yǎng)基以L或M-H培養(yǎng)基最佳，以此可作為EAEC的初步鑒定手段。液體培養(yǎng)基中菌塊形成試驗：大腸埃希桿菌接種于M-H液體培養(yǎng)基(Difco)，35～37℃溫育18～24h，凡表面(部分下沉管底)形成菌塊者為陽性，均勻混濁無菌塊者為陰性。第34頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室檢查1996年王梅等對腸道凝聚性-黏附性大腸埃希桿菌進行簡易篩查試驗，將M-H培養(yǎng)基上的菌塊形成試驗與Hep-2細胞黏附試驗進行對比，發(fā)現(xiàn)兩者的一致率達77%，如包括彌散型和局限型在內(nèi)則達88.5%。表明菌塊形成試驗是可靠的初步篩查EAggEC的方法。第35頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月診斷在流行期間，凡是腹瀉的嬰幼兒，應(yīng)首先考慮為大腸埃希桿菌性胃腸炎，先隔離治療，等待病原學檢查確診。在非流行期，特別是散發(fā)病例，僅靠臨床常難以診斷，必須結(jié)合病原學、血清學檢查確診。第36頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別診斷引起腹瀉的病因比較復雜，有細菌、病毒、寄生蟲等，某些化學藥品亦可導致腹瀉。大腸埃希桿菌腸炎應(yīng)注意與下列疾病鑒別。

1.細菌性痢疾由志賀菌屬引起，腹瀉以膿血或黏液狀便較常見，量少，并常有里急后重，多有寒熱。糞便鏡檢可發(fā)現(xiàn)大量膿細胞、紅細胞和吞噬細胞。嬰幼兒中毒型菌痢或非典型菌痢應(yīng)以病原學診斷來鑒別。

2.霍亂弧菌引起感染后，先發(fā)生劇烈的腹瀉而后嘔吐，很少惡心，嘔吐物及腹瀉大便呈米泔水樣，量多，無里急后重，少數(shù)患者有少量血便。第37頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別診斷脫水重者常引起肌肉痛性痙攣，皮膚皺癟，體表溫度低于正常，鏡檢可發(fā)現(xiàn)運動極活潑的弧菌，應(yīng)進一步作細菌培養(yǎng)鑒別。

3.副溶血弧菌性食物中毒由副溶血性弧菌引起，主要因進食被該細菌污染的食物(多與海產(chǎn)品有關(guān))，起病急驟，先以畏寒、陣發(fā)性腹痛(上腹部絞痛)開始，相繼嘔吐腹瀉，多呈水樣便或血水樣便，多為同餐者先后發(fā)病，應(yīng)進行細菌培養(yǎng)鑒別。

4.沙門菌食物中毒進食被鼠傷寒沙門菌污染食物引起。起病急，常伴有寒熱、腹痛、氣脹、惡心、嘔吐、腹瀉，呈水樣便并有惡臭，早期出現(xiàn)菌血癥，多有同餐者集體發(fā)病。第38頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別診斷依靠病原學、血清學診斷鑒別。

5.病毒性腹瀉由腸道病毒感染引起的腹瀉，其特點是高度傳染性。輪狀病毒、小圓病毒等感染早期有嘔吐，相繼腹瀉，多呈水樣便并有黏液，多發(fā)生在秋冬季。其他病毒性腹瀉多見于夏秋季，有惡心嘔吐，除消化道癥狀外，常有呼吸道癥狀，咽炎，并發(fā)輕癱，常累及頸肌、背肌。周歲內(nèi)小兒多見有綠色水樣便或蛋花樣水便。抗生素治療一般無效，病程多在5～7天自愈。用血清學及病毒分離進一步鑒別。第39頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別診斷

6.空腸彎曲菌性腸炎空腸彎曲菌引起輕癥與病毒性腸炎相似，重癥與潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩病相似。有發(fā)熱，腹瀉水樣或黏液樣便，有惡臭，呈膽汁色，重癥有膿血便，似菌痢多在1周恢復。兒童患者常有腹絞痛，高熱時可發(fā)生驚厥。發(fā)病多與接觸家禽、家畜或飲用未消毒牛奶、生水有關(guān)。暗視野鏡檢可發(fā)現(xiàn)射箭樣活潑動力的彎曲菌，細菌培養(yǎng)進一步診斷。

7.耶爾森菌腸炎多見于兒童發(fā)病，與食物、水污染有關(guān)。腹痛、腹瀉、低熱、呈水樣便，可有敗血癥，可并發(fā)結(jié)節(jié)性紅斑、假性闌尾炎、關(guān)節(jié)炎。第40頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月鑒別診斷細菌培養(yǎng)可進一步鑒別。

8.其他應(yīng)注意與賈第鞭毛蟲、阿米巴痢疾引起的腹瀉鑒別，糞便鏡檢可發(fā)現(xiàn)阿米巴原蟲或賈第鞭毛蟲。第41頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月治療

1.治療原則急性腸炎自愈傾向頗強，其基本治療方針是補液和對癥處理。老年和嬰幼兒患者，以及有基礎(chǔ)疾患和重癥患者應(yīng)給予抗生素，以改善臨床癥狀和縮短排菌期。值得注意的是，抗生素體外敏感試驗往往與臨床療效不一致。除非必須經(jīng)靜脈補液者，通常以口服補液為好，WHO推薦的葡萄糖電解質(zhì)口服液為每升茶水或開水中含氯化鈉3.5g，碳酸氫鈉2.5g，氯化鉀1.5g，葡萄糖20g(蔗糖40g或米粉30g也可)。大腸埃希桿菌腸炎，輕癥僅對癥處理即可，懷疑有菌血癥及重癥病例可給予諾氟沙星多黏菌素或復方磺胺甲噁甲噁甲噁唑。第42頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月治療ETEC處理主要是糾正水、電解質(zhì)平衡失調(diào)。對上述藥物耐藥者可用氧氟沙氟沙氟沙星或環(huán)丙沙星。一般在腹瀉原因不明時可選用氟喹諾酮類藥物。

2.治療方案(1)一般嬰兒首先減少哺乳量，給口服葡萄糖液及生理鹽水，兒童及成人給易消化食物，適當補充維生素C等。

(2)體液療法：按患者脫水的性質(zhì)及程度，補充電解質(zhì)溶液及葡萄糖溶液。目前推廣應(yīng)用一種葡萄糖、電解質(zhì)口服補液鹽(ORS)的補液袋甚方便。嬰幼兒第1天補液量按脫水程度每天給予100～200ml/kg。第43頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月治療在補液中隨時觀察患兒眼窩凹陷程度、皮膚彈性度及尿量多少來調(diào)節(jié)含鈉溶液的比例及輸液量。有酸中毒者按CO2結(jié)合力情況給予5%碳酸氫鈉液及時糾正酸中毒。對病期長或營養(yǎng)不良嬰幼兒，可適量給予輸血漿(25～50ml/次)，每周2次。

(3)中醫(yī)中藥針灸取合谷、足三里、大腸俞及止瀉穴。推拿、捏脊止瀉。按辨證施治采用中藥方，脾虛瀉者用益氣健脾方劑：參苓白術(shù)散加減；屬實熱瀉者用清熱利濕方劑：葛根苓連湯加減。第44頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月治療

(4)抗菌選用較敏感藥物足量連用5天。常用藥有諾氟沙星、氧氟沙氟沙氟沙星、多西環(huán)素、復方磺胺甲噁甲噁甲噁唑、新霉素、卡那霉素、多黏菌素B、慶大霉霉素、氨芐西林、呋喃唑酮等。有腎損害者用慶大霉霉素與卡那霉素時要謹慎。在治療同時應(yīng)加強護理，對患兒應(yīng)勤換尿布，每次大便后用溫水沖洗臀部，保持清潔衛(wèi)生，預防皮膚感染。第45頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月預后及早發(fā)現(xiàn)治療，無并發(fā)癥出現(xiàn)，預后良好。第46頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月預防

1.管理傳染源(1)早期發(fā)現(xiàn)：通過自報、互報、門診、巡診等辦法，早期發(fā)現(xiàn)病人。已有疫情發(fā)生的場所，對炊管人員、給水人員、食品加工銷售人員和保育人員應(yīng)特別加強醫(yī)學觀察，經(jīng)常了解大便情況，必要時作糞便檢查，及時發(fā)現(xiàn)病人和病原攜帶者。對出院患者要定期隨訪，了解大便情況，有無癥狀與體征，及時檢出復發(fā)者及慢性病人。

(2)隔離與治療：由病人或攜帶者作為傳染源的腹瀉病，病人應(yīng)立即送醫(yī)院實施腸道隔離、治療。第47頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月預防治療要及時、徹底，確已痊愈后，方可出院。隔離期間要對病人加強衛(wèi)生宣教和管理，病人應(yīng)遵守各項規(guī)定，自覺注意不與健康人接觸，不隨便傾倒排泄物，以防污染環(huán)境。

2.切斷傳播途徑(1)搞好給水衛(wèi)生：衛(wèi)生部門要定期對水源水質(zhì)和消毒效果進行檢查。分散式給水要選好水源，飲用水(包括伙房用水、洗漱用水)必須消毒處理。用含氯消毒劑時，要注意有效氯含量和消毒時余氯應(yīng)保持0.2～0.3mg/L。

(2)管好飲食衛(wèi)生：

第48頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月預防①經(jīng)常對炊事人員進行詢問與體格檢查，發(fā)現(xiàn)可疑病人立即送醫(yī)院檢查處理。炊管人員工作前和飯前(包括做飯前)便后要堅持洗手，工作時穿