酶標(biāo)記物的制備和載體

酶標(biāo)記物的制備和載體免疫學(xué)檢驗技術(shù)職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫—*—

提問酶標(biāo)記物的制備和載體什么樣的酶最適合做酶標(biāo)？1）活性高，純度高2）專一性強3）性質(zhì)穩(wěn)定，易與Ag或Ab偶聯(lián)4）測定方法簡便易行、敏感、精確5）酶和底物對人體無害、價廉易得—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物（1）辣根過氧化物酶（HRP）及底物1）來源：植物辣根（可食用→安全、價廉、易得）2）結(jié)構(gòu)：糖蛋白（主酶：與酶活性無關(guān)，275nm有吸收峰）+亞鐵血紅素（輔酶：發(fā)揮酶活性，403nm有吸收峰）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物3）質(zhì)量評價指標(biāo)：純度值（RZ）+活性純度值：λ403nm/λ275nm，高純度HRP，RZ＞3.0?；钚裕?分鐘將1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。4）特點：HRP性質(zhì)穩(wěn)定、容易保存、易于提取等（ELISA中應(yīng)用最多）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物5）催化反應(yīng)DH22H20+H2O2D+HRPDH2為供氫體，習(xí)慣稱為底物，H2O2為受氫體?！?—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物6）底物：鄰苯二胺（OPD）、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）等。OPD：不穩(wěn)定，有致癌性。OPD2H20+H2O2橙黃色+HRPH2SO4棕黃色（492nm）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物TMB：穩(wěn)定，無致癌性，ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。TMB2H20+H2O2藍(lán)色+HRPH2SO4黃色（450nm）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體常用的酶及底物（2）堿性磷酸酶（AP）及底物1）來源：大腸桿菌、小牛腸黏膜2）特點：穩(wěn)定性差、難純化3）底物：對-硝基苯磷酸酯（p-NPP）對硝基苯磷酸酯（p-NPP）對硝基酚（黃色）APNaOH黃色（405nm）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體酶標(biāo)抗體（抗原）的制備（以將HRP標(biāo)記到Ab上為例）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體（1）改良過碘酸鈉法過碘酸鈉將羥基氧化為醛基，-CHO和-NH2，兩者可形成-CH2-NH-。封閉酶上-NH2：二硝基氟苯；釋放酶上-NH2：硼氫化鈉酶標(biāo)抗體（抗原）的制備（以將HRP標(biāo)記在Ab上為例）動畫：改良過碘酸鈉法制備酶標(biāo)抗體—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體（2）戊二醛交聯(lián)法戊二醛的兩個醛基分別與HRP和Ab上的氨基結(jié)合。酶標(biāo)抗體（抗原）的制備（以將HRP標(biāo)記到Ab上為例）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體5種標(biāo)記產(chǎn)物1）酶-抗體2）酶-酶3）抗體-抗體4）游離酶（增加非特異性顯色）5）游離抗體（降低非特異性顯色）酶標(biāo)抗體的純化—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體方法：層析、飽和硫酸銨沉淀法等酶標(biāo)抗體的純化微課：酶標(biāo)記物的制備（YY的奇遇3）—*—

酶標(biāo)記物的制備和載體1）活性鑒定：雙擴等2）酶標(biāo)記率的測定：分光光度法測定酶標(biāo)記物中酶和抗體（抗原）蛋白的含量，E/P一般為1-2。酶標(biāo)抗體的鑒定—*—

提問酶標(biāo)記物的制備和載體假設(shè)已得到純化的酶標(biāo)抗體，此抗體的抗原是一種可溶性抗原，請問可以用何種方法鑒定此抗體是否失去與抗原結(jié)合的免疫活性？怎么鑒定酶的活性是否存在？出現(xiàn)沉淀線沉淀線顯色—*—

提問酶標(biāo)記物的制備和載體固相載體的要求有哪些？1）結(jié)合抗體或抗原的容量大；2）與抗原或抗體結(jié)合穩(wěn)定且不易脫落；3）不影響所固定的抗體或抗原的活性；4）固化方法應(yīng)簡便、快速?！?—

酶標(biāo)記物的制備和載體固相載體（1）塑料制品聚苯乙烯或聚氯乙烯→微量反應(yīng)板（96孔）、小