酶類(lèi)-概述與分類(lèi)

病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色

酶類(lèi)概述與分類(lèi)

酶類(lèi)

酶具有膠體性質(zhì),不耐熱,容易被強(qiáng)酸或強(qiáng)堿滅活。根據(jù)構(gòu)成酶的蛋白質(zhì)不同,酶分為兩類(lèi),一類(lèi)是單純蛋白的酶,如各種水解酶；另一類(lèi)是復(fù)合蛋白的酶,如線(xiàn)粒體內(nèi)的氧化還原酶,復(fù)合蛋白的酶是由酶蛋白和輔酶結(jié)合而成,酶蛋白與輔酶兩者同時(shí)存在時(shí)才能起到酶的作用。酶類(lèi)

概述

酶(enzyme)是生物體內(nèi)具有催化作用的特殊蛋白質(zhì),在細(xì)胞各個(gè)部位都有酶的存在。人體內(nèi)不斷地新陳代謝反應(yīng),都要靠酶的作用。動(dòng)物體內(nèi)無(wú)數(shù)的化學(xué)反應(yīng),包括合成和分解反應(yīng)都是由酶來(lái)催化的,如果沒(méi)有酶的存在,體內(nèi)生物化學(xué)反應(yīng)就不能進(jìn)行。類(lèi)

酶和底物形成復(fù)合物

酶類(lèi)

酶對(duì)孵育液的作用有較嚴(yán)格的選擇性,即一種酶只能對(duì)一種底物起催化作用,如琥珀酸脫氫酶只能催化琥珀酸鈉的脫氫過(guò)程。有些酶特異性較低,可以催化同一種化合物,如水解酶中的堿性磷酸酶和酸性磷酸酶都可催化β-甘油磷酸鈉,分解出磷酸,但在催化時(shí)各有不同的最適pH。

酶類(lèi)

影響酶活性的因素,如:①溫度:酶活性有它的最適溫度。所謂最適溫度,就是在此溫度范圍內(nèi)可以達(dá)到最大的酶反應(yīng)。酶反應(yīng)最適溫度約為37℃,若溫度增高,反應(yīng)速度加快；溫度降低,反應(yīng)則減慢。但若溫度高達(dá)60℃時(shí),大部分的酶會(huì)變性而失活。②底物濃度:酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度與參加反應(yīng)的物質(zhì)濃度成正比,即所作用的底物濃度越高,反應(yīng)越快,但達(dá)到一定濃度后,如再增加其濃度,反應(yīng)速度也趨于恒定。

酶類(lèi)

③pH:大部分酶的活性受孵育液pH所影響,在適宜的pH范圍內(nèi),酶反應(yīng)具有最大速度。高于或低于此值,反應(yīng)速度都會(huì)下降,通常稱(chēng)此pH為酶反應(yīng)的最適pH每一種酶只有在最適pH范圍內(nèi)活性最大。例如：堿性磷酸酶的最適pH為9.2~9,4,酸性磷酸酶的最適pH為4.8~5.2，其他各種酶的最適pH為7.2~7.6。

酶類(lèi)

能使酶的活性增高的物質(zhì)稱(chēng)為激活劑(activator),某些金屬離子或其他基團(tuán)可作為酶的激活劑,例如鎂離子可激活堿性磷酸酶,鈣離子可激活酯酶。能使酶活性降低的物質(zhì)稱(chēng)為抑制劑(inhibitor),某些金屬離子或氧化還原試劑都是酶的抑制劑,如顯示酸性磷酸酶時(shí)在孵育液內(nèi)加入0.01mol/L的氟化鈉即可抑制該酶活性。又如顯示乙酰膽堿酯酶,在孵育液內(nèi)加入10-5mol/L的四異丙基焦磷酰胺(tetra-isopropylpyrophosphoramide)即可抑制假性膽堿酯酶而顯示乙酰膽堿酯酶。

酶類(lèi)

酶的分類(lèi)

國(guó)際酶學(xué)會(huì)議根據(jù)酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)把酶分為六類(lèi),其分類(lèi)如下:1.氧化還原酶(oxido-reductases)這是一類(lèi)轉(zhuǎn)移電子,催化作用物的氧化還原反應(yīng)的酶，屬這類(lèi)的有脫氫酶,如琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶等。氧化酶如DOPA氧化酶和細(xì)胞色素氧化酶等。2.轉(zhuǎn)移酶(transferases)是一類(lèi)催化不同物質(zhì)分子間某種基團(tuán)的交換或轉(zhuǎn)移的酶,如γ-谷胺酰轉(zhuǎn)肽酶和磷酸化酶。3.水解酶(hydrolases)是一類(lèi)增加或除去水,催化水解反應(yīng)的酶,屬這類(lèi)酶的有堿性磷酸酶和酸性磷酸酶等。4.裂合酶(cases)是催化一種化合物分裂為兩種化合物,或由兩種化合物合成一種化合物的酶,如亮氨酸氨基肽酶和碳酸酐酶。5.異構(gòu)酶是催化同分異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)化的酶。如6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶。6.合成酶是催化兩分子化合物相互結(jié)合，同時(shí)使三磷酸腺苷分子（或其他三磷酸核苷）中的高能磷酸鍵斷裂的酶。如三磷酸胞苷合成酶等。酶類(lèi)

二、酶的顯示方法顯示酶的組織化學(xué)方法常用以下幾種：1.金屬沉淀法此法一般應(yīng)用于磷酸酶的顯示,其原理是切片上的酶水解底物β-甘油磷酸鈉,釋放出磷酸,磷酸與相應(yīng)的金屬陽(yáng)離子如鈣或鉛結(jié)合而產(chǎn)生不溶性的金屬磷酸鹽沉淀,此磷酸鹽沉淀通常是無(wú)色的,但用硫化銨處理后使它轉(zhuǎn)變?yōu)樽睾谏牧蚧锒@色如顯示堿性磷酸的Gomori鈣鉆法。酶類(lèi)

2.同時(shí)偶聯(lián)法此法是顯示各種酶類(lèi)最重要的方法,其原理是同時(shí)使用一種適宣的底物和一種重氮鹽(或六偶氮對(duì)品紅),由于切片上的酶在水解底物時(shí),生成無(wú)色的初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物,后者立即與重氮鹽(或六偶氮對(duì)品紅)偶聯(lián),生成最終反應(yīng)產(chǎn)物,這最終產(chǎn)物是有顏色的不溶性沉淀。例如顯示酸性磷酸酶的萘酚AS-TR磷酸酯法,偶聯(lián)后所形成的沉淀牢固,顏色鮮艷。酶類(lèi)