微生物檢驗 15鏈球菌屬的檢驗

雷曉穎衛(wèi)生微生物檢驗系-9410室Email:leixy@PhoneQ/微信：181807790鏈球菌檢驗實驗目的熟悉鏈球菌的形態(tài)、染色及培養(yǎng)特征。掌握鏈球菌各鑒別試驗原理、方法及用途。實驗內(nèi)容實驗課前一天來接種：

用接種環(huán)將A群、B群、甲型、肺炎鏈球菌分別接種一管肉湯培養(yǎng)基，37oC培養(yǎng)24h，備用。觀察四種菌分別在兩種平板上菌落形態(tài)，挑取典型菌落做革蘭氏染色，鏡下觀察各菌形態(tài)特征。1桿菌肽敏感試驗2CAMP試驗3鏈激酶試驗4菊糖發(fā)酵試驗5Optochin敏感試驗6膽鹽溶菌試驗1、桿菌肽敏感試驗原理：

A群鏈球菌對桿菌肽非常敏感，而其他鏈球菌對桿菌肽通常耐藥，故此試驗可鑒別鏈球菌。步驟：

用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻密集涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的桿菌肽紙片貼于血瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。結(jié)果：抑菌圈直徑＞10mm為桿菌肽敏感試驗陽性，抑菌環(huán)＜=10mm說明對桿菌肽耐受。2、CAMP試驗原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，此種物質(zhì)可促進金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩種細菌交界處溶血力增強，形成箭頭形透明溶血區(qū)。其它鏈球菌一般不產(chǎn)生CAMP因子。步驟：在血瓊脂平板上，先以β溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌與前一劃線作垂直接種，兩線不能相交，相距3mm～5mm左右。35℃孵育18h～24h觀察結(jié)果。同時設陽性（B群鏈球菌）對照和陰性（A群鏈球菌）對照。結(jié)果：在兩種細菌的交界處出現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)為陽性，否則為陰性。金葡菌B群A群3、鏈激酶試驗原理：致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種侵襲性酶，鏈激酶可激活血漿中的血漿素原使其轉(zhuǎn)變?yōu)檠獫{素，血漿素可溶解纖維蛋白。血漿溶解的時間越短說明鏈激酶越多。內(nèi)容：取人血漿0.2ml加入含無菌生理鹽水0.8ml的試管中，隨后各加入待檢菌（A群和B群）24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml?；靹蚝蠹?.25%CaCl20.25ml，置37℃水浴鍋中，20min觀察結(jié)果。結(jié)果：15min內(nèi)完全溶解凝固的血漿為強陽性，

至24h仍不溶解為陰性。4、菊糖發(fā)酵試驗原理：

肺炎鏈球菌能發(fā)酵菊糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基pH降低，是培養(yǎng)基變黃色，而甲型溶血性鏈球菌因不分解菊糖，不產(chǎn)酸，培養(yǎng)管不變色。步驟：

將待檢菌接種于菊糖發(fā)酵管中，37℃孵育18h～24h觀察結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色為陽性，不變色為陰性。

5Optochin試驗原理：肺炎鏈球菌對敏感，而甲型鏈球菌對其不敏感，故可用于鑒別。步驟（可貼于桿菌肽試驗的平板上）

用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張Optochin紙片，37℃孵育18h～24h，觀察抑菌環(huán)的大小。結(jié)果：抑菌圈直徑＞14mm為敏感，抑菌環(huán)＜=14mm為不敏感6、膽鹽溶菌試驗原理：

肺炎鏈球菌產(chǎn)生的自溶酶，膽汁或膽鹽能降低細菌細胞膜上的表面張力、活化肺炎鏈球菌的自溶酶，促進細菌細胞膜破損或菌體裂解自溶。步驟：

在血瓊脂平板上選擇出待檢的呈草綠色溶血的可疑菌落，