【高中生物】基因工程的基本操作程序（第一課時(shí)） 2022-2023學(xué)年高二生物（人教版2019選擇性必修3）

第3章第2節(jié)人教版選擇性必修3抗蟲棉Bt抗蟲蛋白蘇云金桿菌蘇-基因1蘇-基因2蘇-基因3蘇-基因4Bt基因蘇云金桿菌DNA片段中的部分基因棉-基因1棉-基因2棉-基因3棉-基因4棉花細(xì)胞DNA片段中的部分基因“分子手術(shù)刀”“分子縫合針”實(shí)際操作和這一樣都在體外進(jìn)行嗎？首先要在體外對(duì)含有所需要基因的DNA分子進(jìn)行“切割”、改造和“拼接”；然后，將重組DNA分子導(dǎo)入棉花體細(xì)胞內(nèi)，并使其在細(xì)胞中表達(dá)。體外導(dǎo)入載體棉花細(xì)胞的DNA不進(jìn)行切割DNA連接酶重組DNA限制酶當(dāng)Bt抗蟲蛋白被分解為多肽后，多肽與害蟲腸上皮細(xì)胞的特異性受體結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞膜穿孔，最后造成害蟲死亡。Bt抗蟲蛋白只有在某類昆蟲腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也沒有特異性受體。因此，Bt抗蟲蛋白不會(huì)對(duì)人畜產(chǎn)生上述影響。相關(guān)信息1.目的基因的篩選和獲取2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的檢測(cè)與鑒定第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建二/第一步：目的基因的篩選與獲取一/目錄CONTENTS第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三/第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定四/DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定五/01第一步：目的基因的篩選與獲取一第一步：目的基因的篩選與獲取目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因就是目的基因。主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因注意：不是所有的基因都編碼蛋白質(zhì)或肽鏈。（了解）基因的種類一般分為結(jié)構(gòu)基因、轉(zhuǎn)錄基因和調(diào)控基因。結(jié)構(gòu)基因的功能：具有轉(zhuǎn)錄和翻譯功能，能控制生物性狀（編碼蛋白質(zhì)或肽鏈）。轉(zhuǎn)錄基因的功能：只有轉(zhuǎn)錄功能，沒有翻譯功能。能轉(zhuǎn)錄形成tRNA和rRNA調(diào)控基因的功能：不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，只能調(diào)控其他基因的表達(dá)。一第一步：目的基因的篩選與獲取目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因就是目的基因。主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因注意：不是所有的基因都編碼蛋白質(zhì)或肽鏈。（了解）基因的種類一般分為結(jié)構(gòu)基因、轉(zhuǎn)錄基因和調(diào)控基因。結(jié)構(gòu)基因的功能：具有轉(zhuǎn)錄和翻譯功能，能控制生物性狀（編碼蛋白質(zhì)或肽鏈）。轉(zhuǎn)錄基因的功能：只有轉(zhuǎn)錄功能，沒有翻譯功能。能轉(zhuǎn)錄形成tRNA和rRNA調(diào)控基因的功能：不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，只能調(diào)控其他基因的表達(dá)。如：Bt抗蟲蛋白基因，簡(jiǎn)稱Bt基因Bt抗蟲蛋白使棉花抗蟲轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物一第一步：目的基因的篩選與獲取目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因就是目的基因。主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因如：Bt抗蟲蛋白基因，簡(jiǎn)稱Bt基因Bt抗蟲蛋白使棉花抗蟲轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物……抗逆性毒物降解轉(zhuǎn)基因芥屬能多吸收土壤中5.3倍的有毒金屬硒，而自身卻不會(huì)死亡一第一步：目的基因的篩選與獲取目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因就是目的基因。主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因使棉花抗蟲轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物……抗逆性毒物降解轉(zhuǎn)基因芥屬能多吸收土壤中5.3倍的有毒金屬硒，而自身卻不會(huì)死亡生產(chǎn)藥物重組人胰島素注射液工業(yè)用酶那么，如何篩選目的基因呢？如：現(xiàn)在需要選擇一種抗蟲基因，該如何篩選？Bt毒蛋白基因是從蘇云金芽孢桿菌中分離出來的抗蟲基因。當(dāng)害蟲食用含有轉(zhuǎn)基因的植物時(shí)，Bt基因編碼的蛋白質(zhì)會(huì)進(jìn)入害蟲的腸道，在消化酶的作用下，蛋白質(zhì)能夠降解成相對(duì)分子質(zhì)量比解，最后造成害蟲死亡。由于Bt毒蛋白對(duì)哺乳動(dòng)物無毒害作用，因而廣泛用于抗蟲轉(zhuǎn)基因植物。蛋白酶抑制劑基因廣泛存在于植物中它生的抑制劑可與害蟲消化道中的蛋白酶結(jié)合形復(fù)合物，從而阻斷或降低蛋白酶的活性，使昆蟲不能正常攝取、消化食物中的蛋白質(zhì)。這種復(fù)合物還能刺激昆蟲分泌過量的消化酶，引起害蟲的厭食反應(yīng)。淀粉酶抑制劑基因產(chǎn)生的粉酶抑制劑可以抑制昆蟲消化道中的淀粉酶活性,使害蟲不能消化所攝取的淀粉，從而阻斷害蟲的能量來源。植物凝集素基因控制植物合成一種糖蛋白糖蛋白可與昆蟲腸道黏膜上的某種物質(zhì)結(jié)而影響害蟲對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用。資料卡：可用于轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲基因如何選擇？一第一步：目的基因的篩選與獲取從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。P271.3發(fā)酵工程及其應(yīng)用在培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉之前，用蘇云金桿菌制成的生物殺蟲劑廣泛用于防治棉花蟲害已有多年歷史?！Y選一第一步：目的基因的篩選與獲取從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。P271.3發(fā)酵工程及其應(yīng)用在培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉之前，用蘇云金桿菌制成的生物殺蟲劑廣泛用于防治棉花蟲害已有多年歷史。研究表明，蘇云金桿菌的殺蟲作用與Bt基因有關(guān)?？茖W(xué)家不僅掌握了Bt基因的序列信息，也對(duì)Bt基因的表達(dá)產(chǎn)物—Bt抗蟲蛋白有了較為深入的了解。因此，Bt基因是培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉較為合適的目的基因。還有沒有其他篩選方法？——篩選——篩選一第一步：目的基因的篩選與獲取DNA測(cè)序序列數(shù)據(jù)庫（如GenBank）序列比對(duì)工具（如BLAST）BLAST全稱BasicLocalAlignmentSearchTool，即“基于局部比對(duì)算法的搜索工具”，是生物信息學(xué)常用的工具軟件，可將輸入的核酸或蛋白質(zhì)序列與數(shù)據(jù)庫中的已知序列進(jìn)行比對(duì)，獲得序列相似度等信息，從而判斷序列的來源或進(jìn)化關(guān)系。序列數(shù)據(jù)庫是分子生物信息數(shù)據(jù)庫中最基本的數(shù)據(jù)庫，包括核酸和蛋白質(zhì)兩類，以核苷酸堿基順序或氨基酸殘基順序?yàn)榛緝?nèi)容，并附有注釋信息。明確了目的基因后，該怎么獲得它呢？一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取獲取目的基因的常用方法有：人工合成從基因文庫中獲取利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取2.從基因文庫中獲取將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。（了解）基因文庫基因組文庫cDNA文庫一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取基因組文庫2.從基因文庫中獲取將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。（了解）基因文庫cDNA文庫將某種生物體內(nèi)的DNA全部提取出來，選用適當(dāng)?shù)南拗泼?，將DNA切成一定范圍大小的DNA片段，然后，將這些DNA片段分別與載體連接起來，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，每個(gè)受體菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是說，這個(gè)群體包含了這種生物的所有基因，叫做這種生物的基因組文庫。一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌每個(gè)受體菌都含有了一段不同的DNA片段。這個(gè)群體包含了這種生物的所有基因，叫做這種生物的基因組文庫。該受體菌群為基因組文庫一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取cDNA文庫如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA(也叫cDNA)片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，那么，這個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫。某種生物體內(nèi)的全部DNA某個(gè)時(shí)期基因選擇性表達(dá)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯翻譯翻譯翻譯蛋白質(zhì)CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---某原核細(xì)胞基因非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)不編碼mRNA不編碼mRNA(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列終止子：給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列RNA聚合酶--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列終止子：給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄mRNA某原核細(xì)胞基因--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯蛋白質(zhì)某原核細(xì)胞基因如果該基因?yàn)檎婧思?xì)胞基因有什么不同？CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---某真核細(xì)胞基因非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)不編碼mRNA不編碼mRNA(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子RNA聚合酶外顯子內(nèi)含子外顯子內(nèi)含子外顯子外顯子：編碼蛋白質(zhì)的序列稱為外顯子內(nèi)含子：外顯子之間不能編碼蛋白質(zhì)的序列稱為內(nèi)含子--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄初始mRNA某真核細(xì)胞基因外顯子內(nèi)含子外顯子內(nèi)含子外顯子外顯子：編碼蛋白質(zhì)的序列稱為外顯子內(nèi)含子：外顯子之間不能編碼蛋白質(zhì)的序列稱為內(nèi)含子外顯子和內(nèi)含子均會(huì)被轉(zhuǎn)錄成RNA，再經(jīng)過切去內(nèi)含子對(duì)應(yīng)部位、連接外顯子對(duì)應(yīng)部位等RNA加工過程，形成可以直接用于翻譯的mRNA--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄某真核細(xì)胞基因外顯子內(nèi)含子外顯子內(nèi)含子外顯子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻譯蛋白質(zhì)外顯子和內(nèi)含子均會(huì)被轉(zhuǎn)錄成RNA，再經(jīng)過切去內(nèi)含子對(duì)應(yīng)部位、連接外顯子對(duì)應(yīng)部位等RNA加工過程，形成可以直接用于翻譯的mRNA初始mRNA成熟mRNAcDNA文庫如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA(也叫cDNA)片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，那么，這個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫。--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯蛋白質(zhì)某原核細(xì)胞基因--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯蛋白質(zhì)某原核細(xì)胞基因反轉(zhuǎn)錄GT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTACCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……GT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……cDNA復(fù)制雙鏈DNA受體菌無啟動(dòng)子、終止子等非編碼區(qū)--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄某真核細(xì)胞基因外顯子內(nèi)含子外顯子內(nèi)含子外顯子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻譯蛋白質(zhì)初始mRNA成熟mRNA--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)(編碼mRNA)啟動(dòng)子終止子CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG轉(zhuǎn)錄某真核細(xì)胞基因外顯子內(nèi)含子外顯子內(nèi)含子外顯子RNA加工CA……UAGGAUCCAGAUG翻譯蛋白質(zhì)初始mRNA成熟mRNA反轉(zhuǎn)錄GT……ATCCTAGGTCTACGT……ATCCTAGGTCTACCA……TAGGATCCAGATG復(fù)制受體菌無啟動(dòng)子、終止子等非編碼區(qū)及無內(nèi)含子文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小基因中啟動(dòng)子（具有啟動(dòng)作用的DNA片段）基因中內(nèi)含子（位于編碼蛋白質(zhì)序列內(nèi)的非編碼DNA片段）基因多少小大無有無有某種生物的部分基因某種生物的全部基因一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取2.從基因文庫中獲取將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。（了解）基因組文庫cDNA文庫某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢？某種生物體內(nèi)的全部DNA轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄mRNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄cDNA一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取2.從基因文庫中獲取將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。（了解）基因組文庫cDNA文庫某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢？一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取2.從基因文庫中獲取將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。（了解）基因組文庫cDNA文庫某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢？這還是一件比較復(fù)雜的事情，簡(jiǎn)單地說就是根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，例如根據(jù)基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA以及基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。3.利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲?。ǔＳ梅椒ǎ腄NA文庫中獲取并擴(kuò)增目的基因通常采用PCRPCR（polymerasechainreaction）聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。DNA半保留復(fù)制。體外（PCR擴(kuò)增儀/PCR儀）。對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制。可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。原理：操作環(huán)境：目的：優(yōu)點(diǎn)：模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌參與的組分在DNA復(fù)制中的作用打開DNA雙鏈提供DNA復(fù)制的模板合成DNA子鏈的原料催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸體內(nèi)DNA復(fù)制所需的基本條件解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物體外復(fù)制怎么改進(jìn)？一第一步：目的基因的篩選與獲取——獲取某種生物體內(nèi)的全部DNA適當(dāng)?shù)牟煌拗泼盖懈钆c質(zhì)粒連接受體菌導(dǎo)入受體菌參與的組分在DNA復(fù)制中的作用打開DNA雙鏈提供DNA復(fù)制的模板合成DNA子鏈的原料催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸體內(nèi)DNA復(fù)制所需的基本條件解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物體外復(fù)制怎么改進(jìn)？體外用高溫代替體外需用耐高溫的DNA聚合酶引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸。用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為20?30個(gè)核苷酸。體外復(fù)制的引物一般為DNA單鏈。復(fù)制的原料實(shí)為dNTP（dATP、dTTP、dCTP、dGTP），同時(shí)水解產(chǎn)生能量為合成DNA子鏈提供能量，因此體系中不需要添加ATP。微量離心管緩沖液PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行。真核