作物微生物環(huán)境74培養(yǎng)基的配制實(shí)訓(xùn)

作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/張偉彬/2014.03教學(xué)單元7

作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境教學(xué)單元子單元2

微生物生態(tài)子單元3

微生物在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用單元小結(jié)子單元1認(rèn)識(shí)農(nóng)業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)教學(xué)單元7

主要內(nèi)容技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制人類(lèi)要利用微生物，就必須要培養(yǎng)微生物。而要想培養(yǎng)微生物，就必須給微生物提供各式各樣的營(yíng)養(yǎng)，這就需要用到培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的配制是微生物培養(yǎng)工作中的一項(xiàng)基本技能。掌握選用和設(shè)計(jì)培養(yǎng)基的原則及配制過(guò)程就極其重要。配制培養(yǎng)基的原則：目的明確、營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)、經(jīng)濟(jì)節(jié)約

物理化學(xué)條件適宜配制培養(yǎng)基的步驟：稱量、熔化、調(diào)PH、分裝、加塞、包扎、

滅菌、擱置斜面、倒平板、無(wú)菌檢查作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)一、目的要求1、明確培養(yǎng)基的制備和高壓蒸汽滅菌的原理。2、通過(guò)對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。

二、基本原理

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，又稱普通培養(yǎng)基。其配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g 瓊脂15—20g水1000mlPH7.4—7.6其中，牛肉膏提供碳源、能源；蛋白胨提供氮源；NaCl提供無(wú)機(jī)鹽；瓊脂作為凝固劑；PH：微堿。作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)三、器材：

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、試管、三角燒瓶、量筒、天平、滅菌鍋、棉花、牛皮紙等。

四、操作步驟

1．稱量：按配方比例依次準(zhǔn)確稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。稱取瓊脂備用。一些不易稱量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸紙上稱量，然后連同硫酸紙一起放入燒杯中。

2．溶化：加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，將牛肉膏用水洗下后，取出硫酸紙棄去。在石棉網(wǎng)上加熱攪拌，待藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積，全溶后稍放冷。

作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

3．調(diào)PH：用酸度計(jì)或精密pH試紙測(cè)定其pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH值，直至pH達(dá)7.6。反之，則用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。注意pH值調(diào)節(jié)不要過(guò)頭，以免回調(diào)，回調(diào)將會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。對(duì)于有些pH值要求較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計(jì)進(jìn)行。一般pH值調(diào)節(jié)要比要求的pH值調(diào)高0.2，因?yàn)楦邏赫羝麥缇螅琾H常會(huì)降低。必要時(shí)培養(yǎng)基可用濾紙或脫脂棉過(guò)濾。技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟4．分裝：將配制的培養(yǎng)基分裝入試管和三角燒瓶（250ml）內(nèi)，固體培養(yǎng)基裝試管高度的1/5左右，滅菌后制成斜面；裝入三角瓶的量以三角瓶容積的一半為限

技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

5．加塞：在管（瓶）口塞上棉塞，既保證通氣又可阻止外界微生物進(jìn)入造成污染。6．包扎：若干試管一捆，棉塞外包一層牛皮紙，三角燒瓶棉塞外包一層牛皮紙，以防冷凝水潤(rùn)濕棉塞，用繩子扎好。注明日期、姓名。

棉塞的制作方法技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

7．滅菌：1）加水首先將滅菌鍋內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，以水面與三角架相平為宜。立式鍋是直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下1／3處。有加水口者由加水口加入至止水線處。2）裝料放回內(nèi)層桶并裝入待滅菌物品。不要太擠，試管口不要與桶壁接觸。3）加蓋擺正鍋蓋，對(duì)齊螺口，然后以同時(shí)旋緊兩兩對(duì)稱的兩個(gè)螺栓的方式擰緊所有螺栓，切勿漏氣。4）排氣打開(kāi)排氣閥，通電加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出。

技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

7．滅菌：5）升壓待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，整個(gè)滅菌鍋成為密閉狀態(tài)，蒸汽不斷增多，此時(shí)壓力和溫度都上升，當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，開(kāi)始計(jì)時(shí)并維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)訓(xùn)用121℃、20min滅菌。

6）降壓達(dá)到所需滅菌時(shí)間后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)壓力自然下降到0后，打開(kāi)排氣閥。放凈余下的蒸汽后，旋松螺栓，打開(kāi)鍋蓋，取出已滅菌的器皿及培養(yǎng)基，排掉鍋內(nèi)剩余水，以免日久腐蝕。

技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

8．?dāng)R置斜面將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在木條上。

擱置斜面技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

9．倒平板將培養(yǎng)基溶化，待冷至55－60℃時(shí)，將幾種培養(yǎng)基分別倒平板，每種培養(yǎng)基倒三皿。有兩種方法：手持法:將瓶口在火焰上滅菌，左手將培養(yǎng)皿蓋在火焰附近打開(kāi)一縫，迅速倒入培養(yǎng)基約15ml，加蓋后，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，平置于桌面上，待凝后即可成平板。皿架法：將平皿疊放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夾住管塞并打開(kāi)培養(yǎng)皿，再注入培養(yǎng)基，搖均后制成平板。

皿架法手持法技能訓(xùn)練7-1培養(yǎng)基的配制作物生產(chǎn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)/教學(xué)資源庫(kù)作物生長(zhǎng)環(huán)境課程/作物生長(zhǎng)的微生物環(huán)境技能實(shí)訓(xùn)1/培養(yǎng)基的配制

四、操作步驟

10．無(wú)菌檢查將已滅菌的培養(yǎng)基冷卻后置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。若無(wú)菌生長(zhǎng)，則放入冰箱或陰涼處保存?zhèn)溆谩?/p>

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