醌類實(shí)訓(xùn)大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識(shí)

中藥化學(xué)技術(shù)醌類化合物

實(shí)訓(xùn)：大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識(shí)任務(wù)導(dǎo)入大黃系蓼科多年生草本植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖，其主要成分為蒽醌類化合物。

1.用索氏提取器提取大黃中的總蒽醌類化合物。2.配制不同pH的緩沖溶液，用pH梯度萃取法分離大黃提取液中不同酸性的游離蒽醌。3.用堿液、醋酸鎂、Molish反應(yīng)分別檢識(shí)大黃提取物。4.用薄層色譜技術(shù)檢識(shí)提取物。實(shí)訓(xùn)操作實(shí)訓(xùn)操作步驟

（一）提取與分離1.水解藥材稱取大黃粗粉30g，加20%H2SO4水溶液100mL左右，在水浴上100℃加熱3～4h，抽濾，濾餅水洗至近中性，抽干，分散，于70℃左右干燥。2.提取總游離蒽醌成分干燥后的藥渣，粉碎，裝入濾紙筒，密封，放入索氏提取器中，加入乙醚80～100mL，連續(xù)回流提取3～4h，得乙醚提取液。乙醚提取液用5%NaOH溶液萃取3～5次（注意萃取振搖一次必須放氣），最后一次堿水層為淡紅色（乙醚與堿水比例1︰1、1︰0.5、1︰0.5、…。），合并堿水層，用濃HCl調(diào)pH2～3，靜置，析出蒽醌總苷元結(jié)晶，放置1～2h。將蒽醌總苷元結(jié)晶抽濾，80℃烘干。稱重，計(jì)算產(chǎn)率%。（產(chǎn)率%=蒽醌總苷元結(jié)晶g/大黃藥材g×100%）。實(shí)訓(xùn)操作步驟3.pH梯度萃取法分離苷元（1）配制緩沖溶液配制pH8和pH9.9的緩沖液（2）大黃酸的分離：蒽醌總苷元加50～100ml乙酸乙酯溶解，置500mL分液漏斗中，加入pH8的緩沖液溶液萃取，萃取液用濃HCl調(diào)pH2～3，靜置，析出大黃酸結(jié)晶，抽濾，5ml蒸餾水洗滌，抽干，即得。（3）大黃素的分離：分離大黃酸后的乙酸乙酯液，以pH9.9的緩沖液溶液萃取，操作同上。（4）蘆薈大黃素的分離：分離大黃素后的乙酸乙酯液，再以5%NaOH溶液振搖萃取，操作同大黃酸的分離。（5）大黃素甲醚和大黃酚的分離：分離蘆薈大黃素后的乙酸乙酯液，再以5%NaOH溶液振搖萃取至淡紅色（乙酸乙酯與堿水比例1︰1、1︰0.5、1︰0.5、…），合并堿水層，同上操作。實(shí)訓(xùn)操作步驟（二）提取物的鑒別1.堿液試驗(yàn)取各大黃提取物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇使溶解，加數(shù)滴10％氫氧化鈉試劑，羥基蒽醌應(yīng)顯紅色。2.醋酸鎂試驗(yàn)取各大黃提取物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇使溶解，加數(shù)滴0.5％醋酸鎂乙醇試劑，羥基蒽醌應(yīng)顯橙、紅、紫等顏色。3.Molish反應(yīng)取水解液用20％氫氧化鈉中和為pH7，分置于試管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45°，沿管壁滴加2ml濃硫酸，勿振搖，觀察兩液面交界處顏色變化。同時(shí)可用大黃酚和大黃素甲醚等作對(duì)照。實(shí)訓(xùn)操作步驟（二）提取物的鑒別4.薄層色譜檢識(shí)吸附劑：硅膠CMC-Na板（10×20cm）。100℃活化1h后使用。試液：分別自制大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的乙醇溶液（每1ml含1mg）。對(duì)照品：以上各成分對(duì)照品乙醇混合溶液（每1ml各含1mg）。展開劑：石油醚（30℃～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）。顯色劑：在可見光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置，然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5%醋酸鎂甲醇溶液，斑點(diǎn)應(yīng)顯紅色。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)訓(xùn)思考1.pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些天然藥物中成分的分離？2.大黃中羥基蒽醌化合物的極性、酸性與結(jié)