溶出度的方法學(xué)驗證

關(guān)于溶出度的方法學(xué)驗證第1頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月1.方法學(xué)驗證定義：方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗證內(nèi)容，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。第2頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。方法驗證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。為什么要進行方法學(xué)驗證？第3頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月第4頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月2.溶出度方法驗證具體內(nèi)容溶出度方法驗證與含量測定基本相同：

專屬性回收率精密度線性方法驗證溶液穩(wěn)定性耐用性第5頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月值得注意：在方法學(xué)驗證中，試驗所用的溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)，即應(yīng)考查輔料、膠囊殼在溶出介質(zhì)中的干擾，藥物在溶出介質(zhì)中的線性、回收率及穩(wěn)定性等。含量測定回收率一般選用測試濃度的80～120％，高、中、低濃度規(guī)定為80%、100%、120%；對于溶出度范圍則規(guī)定為限度的20%，高、中、低三濃度設(shè)為：50%、限度規(guī)定、100%。第6頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月干擾試驗：測定干擾性試驗在2%以下可忽略不計，2-5%之間可適當(dāng)將限度提高，超過5%則測定方法不可取，如果是空膠囊產(chǎn)生的應(yīng)進行膠囊的消除試驗（不大于標(biāo)示量2%可忽略不計，大于標(biāo)示量25%，試驗無效）。空膠囊測定：UVHPLC第7頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月3.溶出介質(zhì)選擇pH值溶出介質(zhì)1.02.2鹽酸溶液3.8、4.0醋酸鹽緩沖液4.55.8醋酸鹽或磷酸鹽緩沖液6.88.0磷酸鹽緩沖液第8頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月1．鹽酸溶液

取下表中規(guī)定量的鹽酸，加水稀釋至1000ml，搖勻，即得。

pH值1.01.21.31.41.51.61.71.81.92.02.12.2鹽酸(ml)9.007.656.054.793.732.922.341.841.461.170.920.70第9頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月2．醋酸鹽緩沖液

2mol/L醋酸溶液：取120.0g（114ml）冰醋酸用水稀釋至1000ml，即得。取下表中規(guī)定物質(zhì)的取樣量，加水溶解并稀釋至1000ml，搖勻，即得。pH值3.84.04.55.55.8醋酸鈉取樣量(g)0.671.222.995.986.232mol/L醋酸溶液取樣量(ml)22.620.514.03.02.1第10頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月3．磷酸鹽緩沖液

0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液：取27.22g磷酸二氫鉀，用水溶解并稀釋至1000ml。0.2mol/L氫氧化鈉溶液：取8.00g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至1000ml。取250ml0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液與下表中規(guī)定量的0.2mol/L氫氧化鈉溶液混合后，再加水稀釋至1000ml，搖勻，即得。pH值4.55.55.86.06.26.46.60.2mol/L氫氧化鈉溶液（ml）09.018.028.040.558.082.0pH值6.87.07.27.47.67.88.00.2mol/L氫氧化鈉溶液（ml）112.0145.5173.5195.5212.0222.5230.5第11頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月3.4注釋溶出曲線一般要考察至少3種介質(zhì)，對于仿制藥，在標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)中的溶出曲線必做，如果標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)與上述常用介質(zhì)不一致，與標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)最接近的介質(zhì)不再做。溶出介質(zhì)第一次配制時，要測定pH值，與標(biāo)準(zhǔn)值的差值應(yīng)不超過0.1。溶出介質(zhì)使用前要加熱或超聲脫氣。測定溶出曲線時取樣點不宜過多，通常為5～6個點，例如：5、10、15、30、45、60分鐘；小規(guī)格的制劑因采用100～250

ml溶出介質(zhì)，所以溶出曲線一般可選3～4個時間點。第12頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月4.溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）及其轉(zhuǎn)速的選擇

槳法——片劑，以50轉(zhuǎn)/分為主轉(zhuǎn)籃法——膠囊劑，以100轉(zhuǎn)/分為主。一般認(rèn)為槳法50轉(zhuǎn)/分相當(dāng)于轉(zhuǎn)籃法100轉(zhuǎn)/分第13頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月5.溶出度測定方法的驗證第14頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月溶出度測定取本品6粒，采用2010版藥典附錄ⅩC第二法。以0.1M

鹽酸溶液500ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液10ml，0.22μmPES濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照紫外分光光度法，必要時對溶液稀釋，以溶出介質(zhì)為參比，在286nm測定吸收度。以0.002%w/v的ABC標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度作對照，計算每粒的溶出量。例：ABC溶出度的方法學(xué)驗證第15頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月1

專屬性專屬性試驗的目的是考察輔料和膠囊殼對溶出度測定有沒有干擾。HPLC法判斷標(biāo)準(zhǔn)：空白溶液在主成分的位置不出峰；供試品溶液色譜峰的理論板數(shù)、拖尾因子要符合要求；對照品溶液和供試品溶液的峰面積相差不超過10%?？瞻兹芤汗┰嚻啡芤簩φ掌啡芤旱?6頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月UV法：

溶出度-待測溶液的制備空白溶劑0.1MHCl溶液陰性對照取處方量的空白輔料適量（29.59mg），置100ml量瓶中，用0.1MHCl溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液?？漳z囊殼取6粒膠囊，盡可能除盡內(nèi)容物，置同一溶出杯中，按溶出度項下方法溶出，經(jīng)30分鐘時取樣10ml，用0.22μmPES濾膜過濾，取續(xù)濾液。對照品溶液稱取ABC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，取1ml至50ml量瓶中，用0.1MHCl溶解并稀釋至刻度，搖勻供試品溶液取本品1粒，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅩC第二法），以0.1MHCl500ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液10ml濾過，取續(xù)濾液。第17頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月分別取上述溶液適量，做紫外檢測，記錄紫外吸收值，結(jié)果如下：專屬性-陰性對照試驗濃度（mg/ml)吸光度平均標(biāo)示吸光度干擾量(%)對照品溶液-10.0200.5650.5550.54對照品溶液-20.0200.555輔料0.003專屬性-空膠囊殼干擾試驗?zāi)z囊殼-1膠囊殼-2膠囊殼-3膠囊殼-4膠囊殼-5膠囊殼-6校正值(%)A0.0100.0090.0080.0080.0080.0101.5平均吸光度0.01第18頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)果表明空白溶劑、空膠囊殼、空白輔料及本品中其他組分對本品中ABC的測定無干擾，該法專屬性較強，可用于本品中ABC的溶出度檢查。第19頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月2系統(tǒng)精密度HPLC法：取專屬性項下的對照品溶液，連續(xù)進樣6次。結(jié)果見下表。要求：峰面積RSD不超過2.0%；保留時間RSD不超過1.0%。進樣次數(shù)123456RSD(%)峰面積

保留時間

第20頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月UV法取20120206批供試品，照溶出度測定項下方法溶出并測定，按紫外吸收值計算RSD，結(jié)果見下表：溶出度-進樣精密度試驗結(jié)果

進樣次數(shù)123456吸光度0.5470.5470.5470.5470.5470.547平均值0.547RSD(%)0進樣精密度的RSD<2%，符合規(guī)定。第21頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月3線性與范圍取對照品適量，按標(biāo)準(zhǔn)方法配制一系列濃度的溶液，通常不少于6份，例如：10%、25%、50%、75%、100%（標(biāo)準(zhǔn)濃度）、150%。HPLC法要求：最低濃度樣品的色譜圖中，信噪比要不低于10:1；以峰面積對濃度濃度進行線性回歸，線性相關(guān)系數(shù)r（保留4位有效數(shù)字）不小于0.999或R2不小于0.998；y軸截距的絕對值應(yīng)不超過100%濃度樣品峰面積的2%。第22頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月UV法取ABC對照品，精密稱定10.17mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，得1mg/ml的儲備液。取5ml，至50ml量瓶中，0.1MHCl定容，得到ABC濃度為101.7ug/ml的母液。分別精密量取上述母液5ml、4ml、3ml、2ml、1ml、0.5ml置10ml量瓶中，用0.1MHCl稀釋到刻度，搖勻，得到濃度為50.85μg/ml、40.68μg/ml、30.51μg/m、20.34μg/ml、10.17μg/ml、5.09μg/ml的溶液。分別取上述溶液適量，照溶出度測定項下方法測定，記錄紫外吸收。將所測得的吸收值(A)與對應(yīng)濃度(C)進行線性回歸，得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如下：第23頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月溶出度-標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)濃度（ug/ml)5.0910.1720.3430.5140.6850.85吸光度0.1460.2930.5820.8611.1471.432線性方程y=0.028x+0.0068相關(guān)系數(shù)R2=1結(jié)果表明：ABC的0.1MHCl溶液在5～50μg/ml范圍內(nèi)線性良好。第24頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月取膠囊1粒置量瓶中加標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溶劑適量超聲溶解，定量稀釋至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定濃度4濾膜吸附（此項試驗要在準(zhǔn)確度和精密度之前做）

供試品溶液配制：搖勻分為兩份濾過，棄去不同的體積，分別取續(xù)濾液測定離心，取上清液測定第25頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月比較峰面積的變化，結(jié)果見下表。

樣品峰面積吸附量（%）離心

棄3ml

棄5ml

棄7ml

吸附量應(yīng)不大于標(biāo)示量的2%。濾膜對樣品基本無吸附作用，即對實驗結(jié)果的測定無干擾。第26頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月

5準(zhǔn)確度（要保證主成分能夠完全溶解）方法１：取對照品適量，依法配制成相當(dāng)于標(biāo)示量50%、80%（一般為標(biāo)準(zhǔn)限度）和100%的供試品溶液，均加入處方量的輔料（包括膠囊殼），必要時超聲使主成分溶解，每個濃度平行配制三份，依法測定含量。結(jié)果見下表。第27頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月溶出度回收率試驗結(jié)果

樣品加入量（mg）測得量（mg）回收率（%）平均值（%）５０％１２３８０％１２３１００％１２３判斷標(biāo)準(zhǔn)：3個濃度的平均回收率均為98.0%～102.0%；RSD≤2.0%（n=9）。第28頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月精密稱取ABC對照品10mg，置100ml量瓶中，加0.1MHCl溶解并稀釋到刻度，搖勻，得到100μg/ml的對照品儲備液。另取處方量的空白混合輔料適量，分別置9個50ml的量瓶中，分別向其中3份精密加入ABC對照品儲備液5.0ml（加入空白輔料73.99mg），另外3份精密加入ABC對照品儲備液8.0ml（加入空白輔料118.38mg）和另外3份精密加入ABC對照品儲備液10.0ml（加入空白輔料147.98mg），加0.1MHCl稀釋至刻度，振搖濾過，取續(xù)濾液照溶出度測定，計算回收率，以以下式計算回收率：第29頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)果如下溶出度-回收率試驗濃度水平加入量(mg)測得量(mg)回收率（%）平均值SDRSD(%)50%0.5040.49798.6099.200.010.950.4970.49599.640.4970.499100.3480%0.8060.79199.460.7950.78298.360.7950.78098.14100%0.9941.003100.870.9940.98098.580.9940.98298.76溶出度測定的各濃度回收率均在98～102%之間，RSD小于2%，符合規(guī)定第30頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月只能說明用方法１，測定的準(zhǔn)確度良好，不能說明將樣品加入溶出儀中，溶出后的溶液的測定準(zhǔn)確度是良好的啊，因為兩種方法可能溶出的輔料量都不一樣，怎么辦？方法２：空白制劑（不含主藥）＋對照品溶出，測定回收率。稱取阿莫西林對照品３０.０ｍｇ各６份，分別加至已裝有1粒不含阿莫西林的輔料膠囊的溶出杯中，按溶出度測定方法測定，計算回收率。第31頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月6穩(wěn)定性(并非對照品溶液的穩(wěn)定性）

（可以同時做四種介質(zhì)）

取膠囊1粒，置量瓶中，加質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溶劑適量，超聲使充分溶解后定量稀釋至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液室溫放置，分別于0、2、4、6、8、12小時進樣。要求：峰面積RSD不超過2.0%

第32頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月穩(wěn)定性取溶出度測定3.2.P.5.2.7項下的供試品溶液適量，用0.22μmPES濾膜濾過，取續(xù)濾液于室溫下放置，分別于0、2、4、6、8和10小時照溶出度測定項下方法測定，記錄吸光度，結(jié)果見下表：溶出度-溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果時間0h2h4h6h8h10h平均值SDRSD（%）吸光度0.560.560.5640.5620.560.5610.560.0020.29結(jié)果表明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

HPLC法同ＵＶ法。第33頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月7重復(fù)性方法1：以6個單獨制劑分別測定溶出度，計算RSD或可信限。但是此時受制劑個體間差異影響測定結(jié)果。比如測定重復(fù)性不好，可能是因為制劑的含量差異引起的。

第34頁，課件共38頁，創(chuàng)作于2023年2月重復(fù)性方法2:取約相當(dāng)于ABC10mg的批供試品，置10ml量瓶