高中生物人教版高中生物技術實踐專題微生物的培養(yǎng)與應用土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

【2017·全國Ⅰ(節(jié)選），37】某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}:(1)有些細菌能分解尿素,有些細菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生

。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是

,但可用葡萄糖作為碳源,進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是

(答出兩點即可)

脲酶分解尿素的細菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機物為細胞生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料挑戰(zhàn)高考(2)為了篩選可分解尿素的細菌,在配制培養(yǎng)基時,應選擇

(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作為氮源,不選擇其他兩組的原因是

。

尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用復習課土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)四川省中江中學周玲

最新考綱

細解考點

微生物的分離和培養(yǎng)（Ⅱ）通過尿素分解菌的分離實驗掌握微生物的分離技術

某種微生物數(shù)量的測定（Ⅱ）通過尿素分解菌的計數(shù)方法理解微生物的計數(shù)方法培養(yǎng)基對微生物的選擇作用（Ⅱ）考綱解讀全國卷三年3考高考指數(shù)★★★★★知識網(wǎng)絡知識網(wǎng)絡篩選分解尿素的菌株有利于目的菌株生長抑制或阻止其他微生物生長人為條件統(tǒng)計菌落的數(shù)目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)對照設置實驗流程土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

鑒定方法實驗原理土壤取樣→配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基→系列稀釋→涂布平板與培養(yǎng)→菌落計數(shù)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若指示劑變紅,pH升高,說明該細菌能分解尿素(1)能合成脲酶的細菌才能分解尿素;(2)配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌題型1：篩選分解尿素的菌株【例1】分離土壤中分解尿素的細菌，對培養(yǎng)基的要求是（）①加尿素②不加尿素③加瓊脂糖④不加瓊脂糖

A.①③⑤⑦B.②④⑥⑧C.①③⑤⑧D.①④⑥⑦⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸鹽⑧不加硝酸鹽 C選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它微生物生長的培養(yǎng)基?！咀兪健?/p>

甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（）A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B．甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是自養(yǎng)微生物D．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它微生物生長的培養(yǎng)基。D顯微鏡直接計數(shù)法間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)原理利用特定的血細胞計數(shù)板,在顯微鏡下計數(shù)一定體積的樣品中微生物的數(shù)量公式題型2：統(tǒng)計菌落數(shù)目（重點）當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。顯微鏡直接計數(shù)法和間接計數(shù)法的比較每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×MC代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)M代表稀釋倍數(shù)缺點結果不能區(qū)分死菌與活菌當兩個或多個菌體連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。比實際值偏高比實際值偏低顯微鏡直接計數(shù)法間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)【例2】國家飲用水標準規(guī)定，每升飲用水中大腸桿菌不超過3個。某小組欲通過實驗來檢測自來水中大腸桿菌的含量，已知大腸桿菌在伊紅—美藍培養(yǎng)基培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈黑紫色。請根據(jù)下列有關實驗步驟回答問題：（1）接種：在如圖的系列稀釋操作中（101、102、103表示稀釋倍數(shù)），依次將1mL液體移入下一個盛有

mL蒸餾水的試管中．過程a所用的接種方法為

。9釋涂布平板法（2）觀察與計數(shù)：通過一段時間的培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計培養(yǎng)皿表面深紫色菌落的數(shù)目，結果如圖所示，則每升自來水樣本中含有大腸桿菌______個．【例2】國家飲用水標準規(guī)定，每升飲用水中大腸桿菌不超過3個。某小組欲通過實驗來檢測自來水中大腸桿菌的含量，已知大腸桿菌在伊紅—美藍培養(yǎng)基培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈黑紫色。請根據(jù)下列有關實驗步驟回答問題：3×107【例3】下列是關于“檢測土壤中細菌總數(shù)”實驗操作的敘述，其中錯誤的是（）A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C.將實驗組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時D.確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進行計數(shù)提醒：細菌一般在30～37℃下培養(yǎng)1～2天；放線菌一般在25～28℃下培養(yǎng)5～7天；霉菌(真菌)一般在25～28℃下培養(yǎng)3～4天。D提醒：樣品稀釋液的最佳濃度為獲得每個平板上有30～300個菌落，細菌一般為104、105、106倍的稀釋液，放線菌一般為103、104、105倍的稀釋液，真菌一般為102、103、104倍的稀釋液。

設置對照的主要目的是排除

中

對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。（1）如判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：

。實驗組非測試因素將未接種的培養(yǎng)基在相同的條件下進行培養(yǎng)題型3：設置對照（2）判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：_

。對照培養(yǎng)基(營養(yǎng)物質(zhì)齊全)接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目[例4]（2016全國卷Ⅰ,39節(jié)選,9分）空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下:①配制培養(yǎng)基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);②制作無菌平板;③設置空白對照組和若干實驗組,進行相關操作;④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間,統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉栴}:(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于

。若要完成步驟②,該培養(yǎng)基中的成分X通常是

。

(2)步驟③中,實驗組的操作是

。

牛肉膏、蛋白胨瓊脂將實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上,開蓋暴露一段時間自變量因變量易錯混淆對照實驗和重復實驗比較項目對照實驗重復實驗設置目的

排除無關變量對實驗結果的影響

設置措施實例

排除偶然因素對實驗結果的影響常設置空白對照設置幾個相同平板檢測培養(yǎng)基滅菌是否合格取多個平板計數(shù),并取平均數(shù)重溫高考演練模擬1.(2018·全國Ⅰ卷)將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基?；卮鹣铝袉栴}:(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應加入鏈霉素以抑制

的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。

細菌選擇(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì),營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有

(答出兩點即可)。氮源進入細胞后,可參與合成的生物大分子有

(答出兩點即可)。

碳源、無機鹽蛋白質(zhì)、核酸(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是

,該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是

。

碘液淀粉遇碘液顯藍色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解,形成透明圈(4)甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結果:甲同學涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133;乙同學涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。有人認為