實驗動物采血技術給藥技術(一)

一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié)實驗動物的抓取與固定目前一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點小鼠固定盒固定目前二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點大鼠固定盒固定目前三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點二、豚鼠的抓取固定法目前四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點三、家兔的抓取固定法目前五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前六頁\總數(shù)六十三頁\編于二點一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié)

性別鑒定目前七頁\總數(shù)六十三頁\編于二點Female

Male

二、兔的性別鑒定目前八頁\總數(shù)六十三頁\編于二點一、大、小鼠

1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行目前九頁\總數(shù)六十三頁\編于二點日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽到聲音9～11全身被白毛，門齒長出13～15眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨立生活目前十頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點目前十六頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2.根據(jù)體重鑒定日齡⑴小鼠日齡與體重的對應日齡/d初生51015202530體重/g1.84.06.011.015.021.021.0目前十七頁\總數(shù)六十三頁\編于二點⑵大鼠日齡與體重的對應日齡/d初生10203040體重/g6～717～2535～5055～90100～150日齡/d50607080體重/g150～210170～240210～270240～320目前十八頁\總數(shù)六十三頁\編于二點常規(guī)采血方法

一、大、小鼠的采血方法

1．頸靜脈或頸動脈采血

2．股靜脈或股動脈采血

3．心臟采血

4．尾部采血

5．眼眶采血

6．斷頭取血目前十九頁\總數(shù)六十三頁\編于二點頸靜脈或頸動脈采血尾部采血目前二十頁\總數(shù)六十三頁\編于二點心臟采血目前二十一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點二、豚鼠的采血方法

1．耳緣剪口采血

2．心臟采血方法同大、小鼠。

3．股動脈采血方法同大、小鼠。

4．后肢背中足靜脈采血目前二十二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點三、家兔的采血方法

1．心臟采血

2．耳中央動脈采血

3．耳靜脈采血目前二十三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

四、狗、貓的采血方法

1．后肢外側跗外靜脈、內(nèi)側隱靜脈、前肢內(nèi)側皮下頭靜脈采血

2．股動脈采血

3.心臟采血同大、小鼠心臟采血

4．耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血目前二十四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

采血方法的選擇，決定于實驗目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復多次，應自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動脈血液。目前二十五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；采血用具有采用部位一般需要進行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預先加入抗凝劑。采血時要注意目前二十六頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

部位

動物種類ａ．尾靜脈大鼠、小鼠ｂ．耳靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊ｃ．眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠d．舌下靜脈兔e．腹壁靜脈青蛙、蟾蜍f．冠、腳蹼皮下靜脈雞、鴨、鵝１．取少量血目前二十七頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

部位

動物種類ａ．后肢外側皮下小隱靜脈狗、猴、貓ｂ．前肢內(nèi)側皮下頭靜脈狗、猴、貓ｃ．耳中央動脈兔ｄ．頸靜脈狗、貓、兔ｅ．心臟豚鼠、大鼠、小鼠ｆ．斷頭大鼠、小鼠ｇ．翼下靜脈雞、鴨、鴿、鵝ｈ．頸動脈雞、鴨、鴿、鵝２．取中量血目前二十八頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

部位

動物種類ａ．股動脈、頸動脈狗、猴、貓、兔ｂ．心臟狗、猴、貓、兔ｃ．頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊ｄ．摘眼球大鼠、小鼠３．取大量血目前二十九頁\總數(shù)六十三頁\編于二點動物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604.最大安全采血量與最小致死采血量目前三十頁\總數(shù)六十三頁\編于二點給藥途徑與方法

在動物實驗過程中，應根據(jù)不同的實驗目的、動物種類、藥物類型來決定動物的給藥途徑與方法。動物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，不同方法按給藥途徑又分為很多具體類型。注射法分為：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、靜脈注射、關節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。投入法可分為：鼻腔內(nèi)投入、胃腔內(nèi)投入、腸管內(nèi)投入、氣管內(nèi)投入和經(jīng)口腔投入。以下將各種動物的主要給藥途徑和方法做一介紹。目前三十一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

（一）皮下注射皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側，豚鼠在后腿的內(nèi)側或小腹部；大白鼠可在側下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（二）皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射時需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。目前三十二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點（三）肌肉注射

肌肉內(nèi)血管豐富，注射后吸收較快，僅次于靜脈注射；又因感覺神經(jīng)較皮下少，故引起疼痛較輕，臨床上應用較多。1、部位凡是肌肉豐富的部位，均可進行肌肉注射。犬貓在脊柱兩側的腰部肌肉或股部肌肉。2、方法局部消毒，將針頭迅速刺入肌肉內(nèi)，抽拔活塞無回血后緩慢注入藥液。注射時，不要將針頭全刺入肌肉內(nèi)，以免折斷時不易取出。目前三十三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

（四）腹腔注射用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.5～1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。目前三十四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

（五）靜脈注射

1．兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號針頭盡量從靜脈的遠端刺入，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。目前三十五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2．小白鼠和大白鼠一般采用尾靜脈注射，操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張，并可使表皮角質軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2～3厘米）處進針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側彎曲以止血。如需反復注射，應盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。目前三十六頁\總數(shù)六十三頁\編于二點3．狗狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動物側臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。目前三十七頁\總數(shù)六十三頁\編于二點（一）部位犬貓均可在頸靜脈溝上1/3與中1/3交界處進行靜脈注射。犬還可在腕關節(jié)以上的前內(nèi)側或腕關節(jié)以下掌中部前內(nèi)側的靜脈，或跗關節(jié)外側上方的靜脈、股內(nèi)側的靜脈等注射。目前三十八頁\總數(shù)六十三頁\編于二點注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）目前三十九頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

（六）經(jīng)口給藥多用灌胃法，此法劑量準確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動物。

1．小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃時將灌胃針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。動物應固定成垂直體位，針插入時應無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應立即停止進針或將針拔出，以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當灌胃針插入小鼠3～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2～

1ml，大鼠1～4ml，豚鼠為1～5ml。目前四十頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2．狗、兔、貓、猴

灌胃時，先將動物固定，再將特制的開口器放入動物口中，開口器之寬度可視動物口腔大小而定，

灌胃時將開口器放于上述動物上下門牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導管（如導尿管），經(jīng)開口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進入食道，此時應檢查導管是否正確插入食道，可將導管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認為此導管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入。目前四十一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

給狗、兔灌胃時，也可不用開口器：狗灌胃時，用12號灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一對臼齒后的天然空隙，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達胃內(nèi)，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進入胃，而沒誤入氣管內(nèi)，即可灌入。目前四十二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

兔灌胃時，將兔固定在木制固定盒內(nèi)左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號細導管，由右側唇裂避開門齒，將導管慢慢插入，如插管順利，動物不掙扎，插入約15cm時，即表示插入胃內(nèi)，將藥液注入。各種動物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5～1.0ml，大鼠4～7ml，豚鼠為4～7ml，家兔為80～150ml，狗為200～500ml。目前四十三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

麻醉方法

麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。一、常用的麻醉劑動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。

目前四十四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

1．揮發(fā)性麻醉劑包括乙醚、氯仿等，乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)以上情況。

目前四十五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2．非揮發(fā)性麻醉劑

這類麻醉劑種類較多，包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙脂和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平衡，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。

3．中藥麻醉劑

動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。目前四十六頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

二、動物的麻醉方法

1．全身麻醉（1）吸入法用一塊圓玻璃板和一個鐘罩或一個密閉的玻璃箱作為揮發(fā)性麻醉劑的容器，多選用乙醚作麻藥。麻醉時用幾個棉球，將乙醚倒入其中，迅速轉入鐘罩或箱內(nèi)，讓其揮發(fā)，然后把待麻醉動物投入，約隔4～6分鐘即可麻醉，麻醉后應立即取出，并準備一個蘸有乙醚的棉球小燒杯，在動物麻醚變淺時給套在鼻上使其補吸麻藥。本法最適于大、小鼠的短期操作性實驗的麻醉，也可用于較大的動物。由于乙醚燃點很低，遇火極易燃燒，所以在使用時，一定要遠離火源。目前四十七頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法非揮發(fā)性和中藥麻醉劑均可用作腹腔和靜脈注射麻醉，操作簡便，是實驗室最常采用的方法之一。腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。由于各麻醉劑的作用長短以及毒性的差別。所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定要控制藥物的濃度和注射量。目前四十八頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2．局部麻醉⑴貓的局部麻醉一般應用0.5～1.0%鹽酸普魯卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%鹽酸可卡因。

⑵兔在眼球手術時，可于結膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。⑶狗的局部麻醉用0.5～1%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。目前四十九頁\總數(shù)六十三頁\編于二點4．麻醉注意事項⑴靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應，當這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。配制的藥液濃度要適中，不可過高，以兔麻醉過急；但也不能過低，以減少注入溶液的體積。

目前五十頁\總數(shù)六十三頁\編于二點⑵麻醉時需注意保溫。麻醉期間，動物的體溫調(diào)節(jié)機能往往受到抑制，出現(xiàn)體溫下降，可影響實驗的準確性。此時常需采取保溫措施。保溫的方法有，實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等。無論用哪種方法加溫都應根據(jù)動物的肛門體溫而定。常用實驗動物正常體溫：貓為38.6℃±1.0℃，兔為38.4℃±1.0℃，大鼠為39.3℃±0.5℃。⑶作慢性實驗時，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應加熱至動物體溫水平。目前五十一頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

處死方法

當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。目前五十二頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

一、蛙類常用金屬探針插入枕骨大孔，破壞腦脊髓的方法處死。將蛙用濕布包住，露出頭部，左手執(zhí)蛙，并用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯；右手持探針由凹陷處垂直刺入，刺破皮膚即入枕骨大孔。這時將探針尖端轉向頭方，向前深入顱腔，然后向各方攪動，以搗毀腦組織。再把探針由枕骨大孔刺入并轉向尾方，刺入椎管，以破壞脊髓。腦和脊髓是否完全破壞，可檢查動物四肢肌肉的緊張性是否完全消失。拔出探針后，用一小干棉球將針孔堵住，以防止出血。操作過程中要防止毒腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)。如被射入時，則需立即用生理鹽水沖洗眼睛。目前五十三頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

二、大鼠和小鼠

1.頸椎脫臼法：右手抓住鼠尾用力向后拉，同時左手拇指與食指用力向下按住鼠頭。將脊髓與腦髓拉斷，鼠便立即死亡。

2.斷頭法：用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉，鼠立即死亡。

3.擊打法：右手抓住鼠尾提起，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死去。或用木錘用力擊打鼠頭部也可致死。

4.急性大出血法：可采用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血方法使鼠立即死亡。

5.藥物致死法：吸入一定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使動物致死。目前五十四頁\總數(shù)六十三頁\編于二點

三、狗、兔、豚鼠

1.空氣栓塞法：向動物靜脈內(nèi)注入一定量的空氣，使之發(fā)生栓塞而死。當空氣注入靜脈后，可在右心隨著心臟的跳動使空氣與血液成泡沫狀，隨血液循環(huán)到全身。如進到肺動脈，可阻塞其分支，進入心臟冠狀動脈，造成冠狀動脈阻塞，發(fā)生嚴重的血液循環(huán)障礙，動物很快致死。一般兔、貓等靜脈內(nèi)注入20～40ml空氣即可致死。每條狗由前肢或后肢皮下靜脈注入80～150ml空氣，可很快致死。目前五十五頁\總數(shù)六十三頁\編于二點2.急性失血法先使動物輕度麻醉，如狗可按每公斤體重靜脈注射硫噴妥納20～30mg，動物即很快入睡。暴露股三角區(qū)，用鋒利的殺狗刀在股三角