vero mdck細(xì)胞培養(yǎng)步驟2培養(yǎng)液D MEM需購買gibco成品高糖

(1)37℃(2)(2)細(xì)胞培養(yǎng)液D-MEM（ gibco成品高糖D-MEM培養(yǎng)液500ml裝，自行添加谷氨酰胺5ml、雙抗5ml和胎 50ml進(jìn)行配置）70%～75%的（2.細(xì)胞復(fù)蘇步驟1200r/min1.0ml緩慢二、MDCK細(xì)胞傳生長(zhǎng)成片的MDCKT-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶高糖D-MEM(gibco生產(chǎn)青、鏈霉素母液（10,000U/ml青霉素G；10,000μg/ml硫酸鏈霉素(5).(5).胎 （德國(guó)產(chǎn)，無需任何處理/56℃30min滅活補(bǔ)體(7PBS(7PBS緩沖液() ，(95ml、10ml(需配置放置移液槍的支架(10(10).70%～75%2、MDCK(1)(2)(2)加PBS緩沖液適 培養(yǎng)瓶?jī)纱危埩?孵育細(xì)胞瓶直至細(xì)胞從塑料表面分離（5～10分鐘。必要時(shí)可以搖動(dòng)或吹打9ml完全型D-MEMT-256ml（600,000細(xì)胞）懸液，剩余的細(xì)胞懸液可以加T-756ml細(xì)胞懸液數(shù)日可長(zhǎng)成片生長(zhǎng)的細(xì)胞。三、細(xì)胞染耗材：維持液：1%谷氨酰胺+1%雙抗+TPCK胰1將細(xì)胞1:6稀釋后，培養(yǎng)與六孔板上（每2ml，孵1天22取出六孔板，棄去上層培養(yǎng)液，加PBS（每孔1- 2遍。900ul樣品+100ul三抗混371-1.5h（或4度過夜加于六孔（每孔200ul）作用1-1.5H（37度棄去液2ML維持四、細(xì)胞的凍成片的MDCK細(xì)胞：細(xì)胞生長(zhǎng)良好存活率高，80%～90%二甲基亞砜(3(3)完全型D-MEM移液管：5ml，10ml(7)(7)程序降溫盒或者可裝凍存管的白 凍存液的配 方案一：胎方案一：胎 二甲基亞砜：0.6ml（兩者之比方案二：培養(yǎng)液4.2ml，胎 內(nèi)（每管約1ml。 細(xì)胞凍存濃度為1×106方案一：細(xì)胞置于程序降溫盒，放置-80℃方案二：細(xì)胞置方案二：細(xì)胞置 盒，放置-80℃過夜，而后放入液氮長(zhǎng)期保方案三：4℃2小時(shí)，-20℃2培養(yǎng)前準(zhǔn)備白大白大衣、手套（小號(hào)，不帶粉末最好、鞋細(xì)胞培養(yǎng)所需試1、生長(zhǎng)成片的MDCK細(xì)胞及vero（80%～90%2、高糖D-MEM(gibco生產(chǎn)，成品購置3、青、鏈霉素母液（10,000U/ml青霉素G；10,000μg/ml硫酸鏈霉素44、胎 （德國(guó)產(chǎn)，無需任何處理/56℃30min滅活補(bǔ)體5、L-6、6、PBS緩沖液() ，8、二甲基亞砜99、70%～75% （可噴灑 10、HEPES細(xì)胞培養(yǎng)所需耗1、T-25，T-75細(xì)胞培養(yǎng)瓶25ml、10ml3、15ml455、程序降溫