王廣基中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究(哈爾濱)

報(bào)告內(nèi)容中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究意義研究思路關(guān)鍵技術(shù)的研究確有療效中藥制劑藥代動(dòng)力學(xué)研究目前一頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)體內(nèi)處置闡明中藥在生物體內(nèi)的物質(zhì)組處置過程、溝通體內(nèi)外物質(zhì)組關(guān)系，揭示中藥在生物體內(nèi)的藥效物質(zhì)組，在創(chuàng)新中藥、組分中藥及現(xiàn)代復(fù)方中藥研究中具有重要意義藥效學(xué)藥效指標(biāo)起效植物化學(xué)中藥效應(yīng)組分中藥復(fù)方中藥藥代動(dòng)力學(xué)一、中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究意義目前二頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)二、研究思路體外物質(zhì)組體內(nèi)物質(zhì)組有效物質(zhì)組PK/PD標(biāo)記物多成分整合PK臨床PPK/PPD臨床合理用藥中藥藥代動(dòng)力學(xué)的縱貫式研究目前三頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)三、關(guān)鍵技術(shù)的研究體外物質(zhì)組體內(nèi)物質(zhì)組有效物質(zhì)組PK/PD標(biāo)記物多成分整合PK臨床PPK/PPD臨床合理用藥定性定量分析及體內(nèi)外物質(zhì)組關(guān)聯(lián)技術(shù)PK/PD篩選整體藥效評價(jià)化學(xué)/生物信息多成分整合PK/PD模型系列成分構(gòu)動(dòng)關(guān)系中西藥相互作用2008年獲批籌建國家中醫(yī)藥管理局中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)方法學(xué)重點(diǎn)研究室，獲國家重大專項(xiàng)課題“中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)”資助。目前四頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)

核心分析思想：中藥成分通常以類群存在，具有相同母核結(jié)構(gòu)或共有結(jié)構(gòu)單元，形成相同碎片離子，根據(jù)共有離子進(jìn)行成分分類。利用LC-MS/IT-TOF的精確分子量功能，預(yù)測成分的化學(xué)式，在網(wǎng)絡(luò)/光盤成分庫中進(jìn)行查尋符合的結(jié)構(gòu)式（幾十個(gè)-幾百個(gè)不等）；基于所有碎片離子，應(yīng)用自編的（基于Matlab平臺）的共有離子搜尋軟件，根據(jù)共有離子信息對化合物進(jìn)行分類與橋接；確定共有離子化學(xué)結(jié)構(gòu)，根據(jù)亞結(jié)構(gòu)信息，對數(shù)據(jù)庫中所獲得的候選結(jié)構(gòu)進(jìn)行再篩選，進(jìn)而根據(jù)碎裂規(guī)律推測化合物結(jié)構(gòu)。1.中藥復(fù)雜未知成分快速鑒定技術(shù)目前五頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)1.中藥復(fù)雜未知成分快速鑒定技術(shù)人參皂苷五味子木脂素基于部分對照品確定各類成分診斷離子JMassSpectrom,2009,44:230-44目前六頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)AnalChem,2008;80:8187-94

1.中藥復(fù)雜未知成分快速鑒定技術(shù)脈絡(luò)寧注射液成分分類目前七頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)脈絡(luò)寧注射液的制劑成分分析成分類別個(gè)數(shù)有機(jī)酸類30糖苷類17環(huán)烯醚萜類10黃酮類10苯乙醇苷類7醌類4生物堿類3甾酮類3目前八頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)Peerreviewers:Theworkisimportant,originalandinteresting.Inmyopiniontheapproachisverycleverandoriginal.

DrugWeek以“StudyfromChinaPharmaceuticalUniversityprovidenovelinsightintoliquidchromatography”為題專文評價(jià)了該項(xiàng)策略目前九頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)2.中藥多成分同步定量分析技術(shù)化合物名稱方法最低定量限發(fā)表論文人參皂苷Rg1、Rh1、PPTLC-MS<1.0ng/mlJPharmBiomedAnalRg1,Re,Rd,Rb1,麥冬皂苷D

LC-MS<6.0ng/mlJChromatogrB丹參酮IIA，IIB,羥基IIA,紫丹參甲素LC-MS/MS<1.0ng/mlRapidCommunMassSpectrom隱丹參酮、丹參酮ⅡALC-MS/MS<1.0ng/mlJPharmBiomedAnal氧化苦參堿、苦參堿LC-MS<2.0ng/mlJChromatogrB人參皂苷Rg3、Rh2、ppdLC-MS<10ng/mLJChromatogrB綠原酸，咖啡酸,二咖啡酰奎寧酸（3種異構(gòu)體）LC-MS<50ng/mlBiomedChromatogr目前十頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)LC-MS-IT-TOF法同時(shí)測定28種木脂素，對其中有標(biāo)準(zhǔn)品的7種成分進(jìn)行了精確定量分析,另21種沒有標(biāo)準(zhǔn)品的成分進(jìn)行相對定量分析,

LLOQ<1ng/mL2.中藥多成分同步定量分析技術(shù)針對標(biāo)準(zhǔn)品不易獲得，建立粗提物“稀釋比標(biāo)準(zhǔn)曲線法”定量分析方法目前十一頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)3.中藥成分代謝產(chǎn)物快速分析技術(shù)Talanta,2009,80:572-80松果菊苷降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物的I/II相代謝產(chǎn)物I/II相代謝產(chǎn)物級聯(lián)代謝產(chǎn)物(Sequentialmetabolites)分析策略研究目前十二頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)藥后血漿指紋譜空白血漿指紋譜藥源性指紋譜制劑指紋譜原形成分組代謝產(chǎn)物組制劑成分組代謝物歸屬與確定代謝途徑不同時(shí)相藥效物質(zhì)組應(yīng)用自編的化學(xué)信息處理軟件，包括差示譜分析軟件及代謝物與原形成分關(guān)聯(lián)分析軟件3.中藥成分代謝產(chǎn)物快速分析技術(shù)目前十三頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)脈絡(luò)寧注射液體內(nèi)外物質(zhì)組關(guān)聯(lián)分析代謝物代謝物化學(xué)結(jié)構(gòu)代謝途徑M15-Hydroxymethyl-2-furancarboxylicacidY(5-Hydroxymethylfuraldehyde)+OM23-Methyl-1H-pyrrole-2,4-dicarboxylicacidY11_C2H4_CH2M3Oospolide?M42-(1-Hydroxypropan-2-yl)-4-oxocyclopentanecarboxylicacidY7_2HM5Glucuronicacid?M64-HydroxybenzamidoaceticacidY3_O+GlyM72-Hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)propanoicacidY4+2H+O+CH2M84-(Methoxycarbonyl)-3-(hydroxymethyl)-1H-pyrrole-2-carboxylicacidY11_C2H4+OM92-(1-Formylethyl)-2-hydroxy-4-oxocyclopentanecarboxylicacidY10_2HM102,4-Bis(hydroxymethyl)-6-methylenecyclohexanecarboxylicacidY13_H2OM1105-O-Glucuronopyranoside-3,4,7-trimethoxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-6-methylchroman-5-olY48+2H+2CH2+GAM1112-(1-Hydroxyethyl)-3-hydroxy-5,7-dimethoxy-1,4-naphthoquinone+2GAY67_-----+2GAM1124'-Methoxy-5-O-acetylscolymosideY81+CH2+O+ACM113Oleanolicacid+2GA???Y(Oleanolicacid)+2GAM114CandidosideY(Oleanolicacid)_O+2H+2Glc+Ara+XylM1153-O-Glucopyranosyl-glucopyranosyl-glucopyranosyl-glucopyranoside-12-oleanene-3,28-diolY(Oleanolicacid)_O+2H+4Glc對其中80%以上的代謝物成功地進(jìn)行了代謝途徑推斷及與原形成分的關(guān)聯(lián)分析目前十四頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)大鼠血漿中脈絡(luò)寧注射液代謝網(wǎng)絡(luò)分析目前十五頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)4.中藥有效物質(zhì)組分析技術(shù)脈絡(luò)寧注射液血漿動(dòng)態(tài)成分分析從血漿中共鑒定出175種成分，包括60種原形成分及115種代謝產(chǎn)物，其中一半以上成分具有明確的血漿移行消長規(guī)律目前十六頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)4.中藥有效物質(zhì)組分析技術(shù)ADP誘導(dǎo)血小板聚集PCA方法分析不同時(shí)相的血藥濃度與藥效強(qiáng)度，推測抗小血板聚集主要成分。目前十七頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)5.中藥同系物代謝規(guī)律研究糖基取代后不能被代謝糖基取代后代謝速率下降

通過分子對接、酶動(dòng)力學(xué)構(gòu)動(dòng)關(guān)系研究，建立了三醇型人參皂苷同系物代謝規(guī)律的研究方法。代謝速率取決于糖基取代的位置和數(shù)量，可以對它的代謝速率進(jìn)行預(yù)測。（BiochemicalPharmacology,Submitted）目前十八頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)6.中藥對藥物代謝酶的調(diào)控作用丹參成分CYPenzymeKi(μM)Modeofinhibition丹參素CYP2C935Competitive丹參酮ⅠCYP1A20.48Competitive丹參酮

ⅡACYP1A21.1Competitive隱丹參酮CYP1A2,CYP2C9,CYP2D60.45,8,68Competitive,mixed,mixedKivaluesandmodeofinhibition丹參成分IC50(μM)CYP1A2CYP2C9CYP2D6CYP3A4aCYP3A4b親水成分原兒茶酸>200>200>200>200>200原兒茶醛>200>200>200130160丹參素11050>200>200>200丹酚酸B105>200>200>200>200親脂成分丹參酮Ⅰ0.75>200120>200>200丹參酮ⅡA1.3>200>200>200>200隱丹參酮0.753375>200>200陽性對照

0.630.30.120.050.045IC50valuesoninhibitingCYPs

DrugMetabDispos,2008,36:1308-14

丹參素對CYP2C9有一定的抑制作用,丹參酮類成分對CYP1A2有很強(qiáng)的抑制作用目前十九頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)氨茶堿片0.1g氨茶堿片0.1g丹參片４片0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h×14天丹參片，４片／次，３次／天6.中藥對藥物代謝酶的調(diào)控作用PkparamaterBaselineDanshenT1/2(h)6.66±0.816.69±1.02Tmax(h)1.60±0.221.30±0.45Cmax(ng/ml)1882±1542134±405CL/F(ng/ml)4.37±0.284.47±0.85AUC(ng/ml)22970±147023031±4457口服丹參片對人CYP1A2無顯著影響B(tài)rJClinPharmacol2007,652:270-4目前二十頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)6.中藥對藥物代謝酶的調(diào)控作用DrugMetabDispos,2009Sep9,publishedonline

五味子木脂素提取物對腸CYP3A的調(diào)節(jié)作用大于肝（口服>注射）；短期給藥抑制作用，長期給藥誘導(dǎo)作用大于抑制作用。目前二十一頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)7.中藥對轉(zhuǎn)運(yùn)體的調(diào)節(jié)作用23-HBA可增加阿霉素在腫瘤耐藥細(xì)胞核內(nèi)的蓄積……紅色--阿霉素藍(lán)色--細(xì)胞核紫色--阿霉素入核顏色重合Nuc/CytoDOX（5μM）DOX（5μM）+Ver（20μM）DOX（5μM）+23-HBA（0.2μM）DOX（5μM）+23-HBA（2μM）DOX（5μM）+23-HBA（20μM）MCF-7/ADR（耐藥株）2.01±0.095.70±0.26***2.46±0.10***2.73±0.10***6.03±0.28***MCF-7（敏感株）16.3±0.916.4±0..913.2±0.417.6±2.416.6±1.123-HBA增加阿霉素在耐藥細(xì)胞中核與胞漿中的分布比例JEthnopharmacol,2009,accepted耐藥株敏感株上圖為高內(nèi)涵活細(xì)胞工作站分析結(jié)果

目前二十二頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)ATPADPPiP-glycoprotein23-HBA7.中藥對轉(zhuǎn)運(yùn)體的調(diào)節(jié)作用23-HBA可抑制細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜上P-gp的功能和表達(dá)，逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥。2009年國家自然科學(xué)基金(No.30801411)，“十一五”重大專項(xiàng)候選藥物(No.2009ZX09103)mRNA水平增加減少減少Apparentpermeabilitycoefficient(Papp)andnetefflux(RE)ofbi-directionaldigoxintransportacrosspolarizedCaco-2cellmonolayers

目前二十三頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)8.中藥多成分整合PK研究中國天然藥物,2008,6:377-382目前二十四頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)四、中藥PK標(biāo)記物群的指認(rèn)到臨床合理用藥DevelopingbioanalyticalmethodCombinedanalytical,PKandPDmethodsTCMIdentifyingMultiplemarkersStandards:abundantcontent,exactPDeffectsandsatisfiedplasmaconcentrationsPKandPDstudiesPKandPDpropertiesforeachmarkerClinicalPKstudiesanddosageregimendesignIntegratedModelsHolisticPKpropertiesforTCM目前二十五頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液臨床適應(yīng)癥:腦中風(fēng),

冠心病藥理活性:抗凝血，抗氧化，擴(kuò)張血管，增加腦血流量等；給藥方案:靜滴,200-400mg/天實(shí)際臨床給藥劑量200-1600mg/天不等，醫(yī)生多根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)判斷目前二十六頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液PK標(biāo)記物群（Markers）的指認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)與方法定性定量分析所含成分藥效活性篩選評價(jià)體內(nèi)外抗血小板聚集作用血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用目前二十七頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通主要活性成分的定量分析Biol.Pharm.Bull.30(5):847-51(2007)5種成分含量占總量的80%以上目前二十八頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)5種皂苷成分化學(xué)結(jié)構(gòu)目前二十九頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)基于藥效活性篩選MarkersGinsenosideRd,Rb1showgoodandconcentrationdependentinhibitoryeffectonplateletaggregation抗血小板聚集血管內(nèi)皮

細(xì)胞保護(hù)TPNSanditsmajorcomponentsexceptRepossessprotectingroleonrBMECsdamagedbyhydrogenperoxide目前三十頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)根據(jù)成分構(gòu)成與含量：人參皂苷Rb1,Rg1,Rd,Re和三七皂苷R1是血塞通所含的主要組份，5種成分的累計(jì)含量約為80%.5種主要成分具有與血塞通注射液相似的藥效活性人參皂苷Rb1,Rg1,Rd,Re和三七皂苷R1可作為血塞通注射液PK/PD標(biāo)記物。血塞通注射液PK標(biāo)記物群（Markers）目前三十一頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)Chromatogr.21(7):735-46(2007)定量下限:2.77-4.00ng/mLLC-MS法同時(shí)測定血漿中5種皂苷成分目前三十二頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液PK標(biāo)記物群藥代動(dòng)力學(xué)iv:10mg/kgig:300mg/kg目前三十三頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)各成分PK參數(shù)各異血塞通注射液PK標(biāo)記物群藥代動(dòng)力學(xué)目前三十四頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)基于AUC0-∞自定義權(quán)重系數(shù)的三七總皂苷多組份整合藥代動(dòng)力學(xué)研究原理與依據(jù)*評價(jià)藥物在吸收機(jī)體內(nèi)吸收的重要指標(biāo)*反映了藥物在機(jī)體內(nèi)的曝露程度*符合中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的“整體觀”思想*多數(shù)情況下與藥效作用呈正相關(guān)AUC0-∞目前三十五頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)權(quán)重系數(shù)的計(jì)算j分別代表三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1其中：整合濃度計(jì)算公式為：基于AUC0-∞自定義權(quán)重系數(shù)的三七總皂苷綜合濃度的計(jì)算方法目前三十六頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)基于AUC0-∞自定義的整合權(quán)重系數(shù)（ωj）

受試對象給藥方式項(xiàng)目R1Rg1RdReRb1大鼠口服AUC0-∞

(mg/L*h)6.0214.122.463.0737.66ωj0.0720.1690.2700.0370.452靜注AUC0-∞

(mg/L*h)2.167.7631.721.45106.44ωj0.0140.0520.2120.0100.712人靜滴AUC0-∞

(mg/L*h)3.355.4523.562.66102.77ωj0.0240.0400.1710.0190.746血塞通注射液在大鼠及健康志愿者體內(nèi)的AUC0-∞及相應(yīng)的權(quán)重系數(shù)(ωj)

目前三十七頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)整合前后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及藥-時(shí)曲線大鼠口服給予300mg/kg的三七總皂苷后整合前后藥時(shí)曲線圖藥動(dòng)學(xué)參數(shù)整合前整合后R1Rg1RdReRb1T1/2β(h)1.115.0118.151.8120.1518.88Tmax(h)0.710.750.880.790.830.79Cmax(μg/mL)2.9376.4242.3561.5145.0854.11AUC(0-∞)(μg/mL*h)6.01814.10422.4583.07437.66225.33大鼠口服給予300mg/kg三七總皂苷后各成份整合前后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)目前三十八頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)大鼠靜脈注射10mg/kg的血塞通注射液后整合前后藥時(shí)曲線圖藥動(dòng)學(xué)參數(shù)整合前整合后R1Rg1RdReRb1T1/2β(h)1.674.0319.250.7222.1622.40CL(L/h/kg)5.221.910.4610.720.120.14AUC(0-∞)(μg/mL*h)2.1617.76431.7261.449106.43684.83大鼠靜脈給予10mg/kg血塞通注射液后各成份整合前后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)整合前后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及藥-時(shí)曲線目前三十九頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)大鼠PK/PD相關(guān)性分析GoodPK/PDmatch目前四十頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究及給藥方案設(shè)計(jì)健康志愿者整合藥代動(dòng)力學(xué)研究腦中風(fēng)病人群體藥代/藥效研究目前四十一頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)健康志愿者靜脈注射400mg/kg的血塞通注射液整合前后藥時(shí)曲線圖藥動(dòng)學(xué)參數(shù)整合前整合后R1Rg1RdReRb1T1/2β(h)1.972.0625.491.3031.3728.1CL(L/h/kg)9.5724.641.368.031.690.068AUC(0-∞)(μg/mL*h)3.355.4523.562.66102.77100.81健康志愿者靜脈給予400mg血塞通注射液后三七總皂苷各成份整合前后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)健康志愿者整合藥代動(dòng)力學(xué)研究目前四十二頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)倫理委員會(huì)論證，57個(gè)腦中風(fēng)病人，收集流行病學(xué)數(shù)據(jù)800mg/天，連續(xù)給藥14天，于第7,14天藥后1h或3h取血5mL，測定血藥濃度，并于藥后第14天取全血測定凝血四項(xiàng)（PT,TT,APTTandFib）腦中風(fēng)病人群體藥代/藥效研究目前四十三頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)R1,Rg1,Rd,Re及Rb1血藥濃度數(shù)據(jù)目前四十四頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)腦中風(fēng)病人血塞通注射液整合血藥濃度數(shù)據(jù)目前四十五頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)腦中風(fēng)病人血塞通注射液群體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)目前四十六頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液藥動(dòng)/藥效相關(guān)性分析

Index1

PTprolongratio(PT%)TTprolongratio(TT%)APTTprolongratio(APTT%)Fibinhibitratio(Fib%)

Index2

Dosage(mg/kg)

Integratedconcentration

目前四十七頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)PT(%),Fib(%),TT(%),APTT(%)Withthervalueswereof0.598,0.551,0.590and0.505(p<0.01).Datatransformationtodeterminetheideal‘therapeuticwindows’15-40μg/mLcanmakegoodresults,25-35μg/mlarethebest整合濃度與藥效作用的相關(guān)性目前四十八頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)PT(%),Fib(%),TT(%),APTT(%)Withthervalueswereof0.560,0.438,0.593and0.351).12-17mg/kgcanmakegoodresultsDatatransformationtodeterminetheidealdosage給藥劑量與藥效作用的相關(guān)性目前四十九頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液時(shí)效關(guān)系模建與預(yù)測

PK濃度作為自變量的時(shí)間序列矩陣X(C1,······,Cn,T,othervariable)PD指標(biāo)作為因變量的時(shí)間序列矩陣Y(E1,······,Em)偏最小二乘（PLS)多元回歸Y-X回歸關(guān)系Response-T模擬結(jié)果analysissimulation目前五十頁\總數(shù)五十八頁\編于五點(diǎn)血塞通注射液時(shí)效關(guān)系模建與預(yù)測實(shí)測值與預(yù)測值擬合度好