人源性生物制品

人源性生物制品第一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五二、人源性生物制品的種類血液制品尿液制品胎盤制品人體液細胞中的活性物質第二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五血液制品的定義：由健康人血漿或特異免疫人血漿分離、提純或由重組DNA技術制成的血漿蛋白組份或血細胞組份制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子、紅細胞濃縮物等，用于診斷、治療或被動免疫預防。原料：血漿現(xiàn)有種類：人血白蛋白，人胎盤血白蛋白，靜脈注射用的免疫球蛋白等十幾種制品。第二節(jié)血液制品P102,NP123第三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五血液的組成第四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五水HCO3-

、Cl-

、HPO42–等Na+

、K+、Ca2+

、Mg2+等電解質溶質小分子物質血漿血漿蛋白血細胞紅細胞白細胞血小板氣體：O2和CO2血液白蛋白球蛋白纖維蛋白原營養(yǎng)物質代謝產(chǎn)物激素50%~60%40%~50%91%~92%8%~9%第五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五白細胞數(shù)量：(4-10)x109個/L粒細胞淋巴細胞單核-巨噬細胞第六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五一、血液制品的種類全血血液成分制品：紅細胞制劑，白細胞制劑，血小板制劑，血漿制劑血漿蛋白制品國際上大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應用的血液制品主要有三類：白蛋白各種免疫球蛋白（包括肌注、靜注和各種特異性免疫球蛋白）凝血因子制劑（主要為FⅧ和FⅨ濃制劑）。第七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五就我國目前的血液制品而言，還是以血漿中提純的血漿蛋白制劑為主。血漿蛋白制品獲得途徑從健康人血漿或從特異免疫人血漿分離、提純用重組DNA技術制備重組血漿蛋白制劑。第八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五廣義的血液成份制品指由全血分離制備而成的各種血液成分制品和血液衍生物制品?，F(xiàn)在血液成分制品主要是指以一單位全血為原料，用簡單的物理方法，分離制備而成的制品，可直接用于臨床輸注而不需要作進一步處理。屬于“單供者制品”這類制品主要有：紅細胞、血小板、血漿和冷沉淀等。血液成份制品第九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五血液衍生物主要指血漿蛋白的衍生物。用復雜的物理和化學方法將由許多獻血員采集的混合血漿分離制備而成的血漿蛋白制品。主要有：白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子制品等。第十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五懸浮紅細胞(packedRBC)洗滌紅細胞(washedRBC)去甘油冷凍紅細胞(FrozenDeglycerideRBC)新鮮冰凍血漿(FreshFrozenPlasmceFFP)冰凍血漿(FrozenPlasmceFP)去病毒血漿冷沉淀(cryoprecipitate)單采血小板(plateletpheresis)濃縮白細胞(WBCconcertrate)輻照血血液成份制品的種類第十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五懸浮紅細胞24669.5U全血3050U血漿29355.4U冷沉淀3242U單采血小板4667人份洗滌紅細胞435U解凍紅細胞100.5U注：血漿以100ml為1單位某院2009年用血一覽表第十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五是全血通過離心的方法將大部分血漿移去后，加入適量添加劑的紅細胞成分主要成份：紅細胞、添加劑、穩(wěn)定的凝血因子，也含有白血球和血小板但無功能。懸浮紅細胞由于移去了大部分血漿，可減少血漿引起的副作用。由于加入保存液，不僅能更好地保存紅細胞，還具有稀釋作用，使輸注更流暢。功能：每單位MAP可提升Hb5g/L，可提高血液攜氧能力。適應癥：1、慢性貧血2、急性失血

添加劑紅細胞（懸浮紅細胞、紅細胞懸液）第十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五優(yōu)點：除去血液中95%的白細胞,可避免因白細胞凝集所致的發(fā)熱反應及避免受血者產(chǎn)生白細胞抗體,有效防止非溶血性發(fā)熱性輸血反應的發(fā)生。適用疾病:臨床應用于多次輸血或妊娠,體內(nèi)產(chǎn)生抗白細胞或血小板抗體的患者預計需要長期或反復輸血的患者反復出現(xiàn)原因不明的輸血發(fā)熱反應準備做骨髓或器官移植的患者;有免疫缺陷或免疫抑制的貧血患者去白細胞的紅細胞懸液第十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五主要成份：保留了70%以上紅細胞,去除98%以上的血漿,90%以上的白細胞、血小板,同時也去除了保存過程中產(chǎn)生的鉀、氨、乳酸等代謝產(chǎn)物,功能：每單位可提升Hb4g/L。適應證：臨床用于因多次輸血而產(chǎn)生白細胞抗體的貧血病人，以及器官移植后病人，減少排斥反應。洗滌紅細胞第十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五單采血小板主要成份：單一供血者血小板濃縮液，含高純度、高濃度的血小板，少量白細胞功能：提升血小板計數(shù)適應癥：防止和糾正血小板功能異常和血小板計數(shù)減少所造成的嚴重出血或具有出血傾向的疾病

1.血小板＜10-20×109/L，白血病、癌癥、AA2.血小板＜50×109/L，具出血傾向的病人

3.血小板＜70×109/L，接受外科手術的病人

4.血小板＜100×109/L，需要腦部開刀的病人

5.先天性血小板機能無力癥第十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五新鮮冰凍血漿FFP主要成份：血漿，含所有凝血因子，無白細胞和血小板。功能：補充凝血因子適應癥：心臟手術后有出血現(xiàn)象或大手術后有出血現(xiàn)象；大量輸血造成的凝血因子稀釋；溶血性尿毒癥

第十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五冰凍血漿FP主要成份：血漿，含穩(wěn)定的凝血因子；缺乏因子Ⅴ、Ⅷ；無白細胞和血小板功能：除因子Ⅴ、Ⅷ，其余皆可補充適應癥：

1.燙傷病人

2.Ig缺乏第十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五新鮮冷凍血漿在1-6℃復融后留下冰渣狀不溶性成分，高速離心后獲得的白色沉淀物主要成份：凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原適應癥：輕型甲型血友病、血管性血友病、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥及因子ＸⅢ缺乏癥病人。冷沉淀第十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五(三）血漿蛋白制品P105，NP126血漿水分

92%蛋白質

6--7%白蛋白（Alb）+免疫球蛋白（IgG）=65%免疫球蛋白（IgM）+纖維蛋白原（Fg）+補體（C3）+轉鐵蛋白（Tr）+巨球蛋白（a2M）+觸珠蛋白（Hp）+a1抗胰蛋白酶（a1AT）+血色素結合蛋白（Hpx）+a1-酸性糖蛋白G（a1AG）=25%其它百余種微量蛋白質和多肽成份=10%組成人體血漿的成份：第二十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五

1.白蛋白類2.免疫球蛋白類3.凝血系統(tǒng)蛋白4.補體系統(tǒng)蛋白5.蛋白酶抑制物類6.血漿運載蛋白類7.其他血漿蛋白制品血漿蛋白制品種類：第二十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（一）白蛋白類制劑P105，NP127

1、白蛋白的作用（1）維持和調(diào)節(jié)血液滲透壓白蛋白是血漿中含量最高的蛋白質，約占血漿總蛋白的一半多，易大量、高純度地提取。白蛋白產(chǎn)生的滲透壓大而粘度低，是最有效的血容擴張劑。（2）為組織提供營養(yǎng)白蛋白能結合陽離子，也能結合陰離子，故能輸送性質不同的物質，如脂肪酸、激素、金屬離子、酶和藥物（3）運輸和解毒結合有毒物質運送至解毒器官，然后排出體外；第二十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五白蛋白在肝臟內(nèi)產(chǎn)生。每個肝細胞每秒鐘能合成約7000個白蛋白分子，正常人每天可合成白蛋白15g，而在失血的情況下，合成速率可提高2-3倍。故在肝功能正常，營養(yǎng)充足的情況下，白蛋白損失后補充很快，一般喪失400ml血漿，1-2天即可恢復。2、白蛋白制劑的種類目前白蛋白類制劑主要有兩種：人血白蛋白和血漿蛋白成分，兩者的區(qū)別主要在于含白蛋白的純度不同，前者為96%以上，后者為83%以上。第二十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（1）人血白蛋白人血白蛋白是目前國際上使用最多的血液制品，是經(jīng)低溫乙醇法或經(jīng)批準的其他分離方法，從健康人靜脈血漿中提純，并經(jīng)60℃10小時加溫滅活病毒后制成。有液體和凍干兩種劑型。（2）血漿蛋白成分

是經(jīng)低溫乙醇或其它適當?shù)姆椒ㄌ崛〉难獫{蛋白制劑，一般蛋白質濃度為4%或5%，其中白蛋白占83%以上。第二十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五2：免疫球蛋白類制品P106，NP127免疫球蛋白構成機體防御感染的體液免疫系統(tǒng)。免疫球蛋白種類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。第二十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五正常人免疫球蛋白（肌注免疫球蛋白）靜脈注射免疫球蛋白特異性球蛋白（1）正常人免疫球蛋白又稱丙種球蛋白或多價免疫球蛋白(簡稱丙球)，僅供肌肉注射用，所以又稱肌注免疫球蛋白制劑。是采用低溫乙醇法從大量混合血漿（藥典要求1000人份以上）中分離制得的免疫球蛋白濃縮劑。有液體劑型和凍干劑型兩種。1、免疫球蛋白制劑的種類第二十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五主要作用：主要用來預防一些病毒性感染，如甲肝、丙肝、麻疹等疾病的預防以及丙種球蛋白缺乏癥的治療。但是國內(nèi)濫用正常免疫球蛋白的現(xiàn)象比較嚴重。一些人認為經(jīng)常使用丙種球蛋白可以“增強抵抗力”或“有益無害”。事實上濫用丙球不但無益，而且可能產(chǎn)生免疫依賴等副作用。第二十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五是由對某些病原微生物具有高效價特異抗體的血漿制備的特異的高效價免疫球蛋白。與正常免疫球蛋白不同，此類制劑必須具有至少一種高效價特異抗體，用于臨床上特定疾病的預防和治療。目前用于臨床的特異性免疫球蛋白有十余種，較常用的如乙肝免疫球蛋白、甲肝免疫球蛋白、破傷風免疫球蛋白、狂犬免疫球蛋白、風疹免疫球蛋白、抗Rh免疫球蛋白、水痘免疫球蛋白等。

（2）靜脈注射免疫球蛋白（3）特異性免疫球蛋白第二十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五3.補體系統(tǒng)蛋白制品P107，NP128補體系統(tǒng)是機體的主要防御系統(tǒng)之一。（1）補體系統(tǒng)在細胞吞噬、調(diào)理、趨化性、細胞凋亡過程中起重要作用。（2）補體系統(tǒng)在自身性免疫疾病中，起著損傷機體的作用。第二十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五4.凝血系統(tǒng)蛋白制品P107凝血系統(tǒng)蛋白維持機體的正常凝血機制。分為：（1）凝血因子，凝血系統(tǒng)共有13種凝血因子（2）抗凝血因子。抗凝血因子有纖溶酶原（Pg），當它被尿激酶激活之后，就具有溶解血栓的作用。

第三十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五13種凝血因子因子1-----纖維蛋白原（Fg）

因子2-----凝血酶原（FII）

因子3-----組織因子（FIII）

因子4-----鈣離子

因子5-----前加速素，易變因子（FV）

因子6-----

因子7-----前轉化素，穩(wěn)定因子（FVII）

因子8-----抗血友病因子（AHF）

因子9-----血漿凝血激酶成份（PTC）

因子10----Stuart因子（FX）

因子11----血漿凝血激酶前質

因子12----接觸因子（FXII）

因子13----纖維蛋白穩(wěn)定因子（FSF）、激肽酶原（pK）、高分子量激肽酶原（HMW）、纖溶酶原（Pg）、蛋白C（PC）。第三十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五由于先天性遺傳缺陷，可發(fā)生各種凝血因子缺乏癥（質和量的缺陷）。最常見的是甲型血友?。喝狈σ蜃英?；其次是乙型血友病：缺乏因子Ⅸ；發(fā)病率約為甲型血友病的1/4；丙型血友?。喝狈σ蜃英?；一些肝病疾患可引起繼發(fā)性凝血因子缺乏，導致凝血機能障礙。這些疾患可選用相應的凝血因子制劑來治療。第三十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五1、凝血因子Ⅷ類制劑P108（1）凝血因子Ⅷ的作用甲型血友病是χ染色體伴性隱性遺傳病，一般僅為男性患病，由于血漿內(nèi)缺乏FⅧ：C而發(fā)生出血癥狀，臨床表現(xiàn)分為重型、中型、輕型和亞臨床型，需輸用FⅧ制劑進行治療（2）生產(chǎn)方法目前我國生產(chǎn)的凝血因子Ⅷ是將健康人新鮮冰凍血漿，經(jīng)批準的生產(chǎn)工藝制得冷沉淀，然后分離、提純，并經(jīng)病毒滅活處理、凍干制成，稱為“人凝血因子Ⅷ”。第三十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五重組FⅧ制劑：是利用基因工程重組技術獲得的，在美國已通過臨床研究，現(xiàn)已投放于市場，用于甲型血友病的治療

2、凝血因子Ⅸ及凝血因子Ⅸ制劑（1）凝血因子Ⅸ的作用乙型血友病是先天性的FⅨ質量缺陷所引起，多為男性患病。乙型血友病可用FⅨ制劑進行治療。（2）生產(chǎn)方法我國目前生產(chǎn)的凝血因子Ⅸ制劑主要是人凝血酶原復合物，是將健康人血漿經(jīng)低溫乙醇蛋白分離法或批準的其它分離方法分離純化，并經(jīng)病毒滅活處理、凍干制成。第三十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五(2)凝血酶原復合物濃縮劑P108為一組維生素K依賴性凝血因子Ⅱ、因子Ⅶ、因子Ⅸ、因子Ⅹ

的混合物，主要為因子Ⅸ。應用：多種原因所致出血第三十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五(3)纖維蛋白原制劑一種糖蛋白，是血漿黏滯性的主要決定因素。存在于組分Ⅰ

中。用于低纖維蛋白原血癥治療，可有效糾正因纖維蛋白原缺乏所致的出血。第三十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（4）組織纖溶酶原激活劑是一種單鏈多肽。激活纖溶酶原轉變纖溶酶，纖溶酶水解纖維蛋白凝塊（纖維蛋白性血栓）成為纖維蛋白降解產(chǎn)物，從而溶解血栓。第三十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（5）蛋白酶抑制劑類制品α1-抗胰蛋白酶：一種糖蛋白。它是血清中最主要的蛋白酶抑制劑，對凝血酶、尿激酶等其他酶也有抑制作用；也是一種急性時相反應蛋白，在炎癥性疾患時，α1抗胰蛋白酶可透過毛細血管進入組織液，在炎癥局部往往濃度很高，對急性炎性疾病有一定限制作用。

第三十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五抗凝血酶Ⅲ

：一種由肝臟產(chǎn)生的糖蛋白，是體內(nèi)的一種重要抗凝物質，屬于絲酶抑制蛋白。能不可逆地抑制凝血因子Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa、Ⅻa以及由Ⅶa與組織因子所形成的復合體，故具有防止血栓的作用。用于治療先天性抗凝血酶Ⅲ缺乏癥，獲得性抗凝血酶Ⅲ缺乏（如肝病引起的酶水平降低），或一些血栓性疾病。第三十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五α2-巨球蛋白：是血漿中分子量最大的蛋白質，由肝細胞與單核-巨噬細胞系統(tǒng)合成。具有酶抑制劑的作用。抑制炎癥組織釋放的各種蛋白酶，同時對不同的病原菌釋放的毒素也起到抑制作用。第四十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五6.血漿運載蛋白類血漿運載蛋白是指能夠對機體的營養(yǎng)物質、代謝產(chǎn)物、激素、藥物進行轉輸?shù)难獫{蛋白。具體有：（1）白蛋白-----轉輸脂肪酸、色素、陽離子、藥物、VC（2）前白蛋白---轉輸甲狀腺素結合蛋白、視黃醇結合蛋白（3）α-類脂蛋白-----轉輸脂質、膽固醇、激素（4）β-類脂蛋白-----轉輸脂質、膽固醇、激素（5）觸珠蛋白------轉輸游離血紅蛋白（6）血紅蛋白結合蛋白------轉輸游離血紅蛋白（7）轉鐵蛋白------將鐵轉輸給網(wǎng)織紅細胞和其它組織（8）銅藍蛋白-----轉輸銅，調(diào)節(jié)銅吸收形成酶（9）轉鈷胺蛋白-----轉輸VB12（10）GC球蛋白------轉輸維生素D第四十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五病毒名稱大?。╪m）病毒

包膜核酸傳播介質全血血液制品乙型肝炎病毒（HBV）42＋

DNA

＋＋丙型肝炎病毒（HCV）30-60＋

RNA

＋

＋人類免疫缺陷病毒（HIV）100＋RNA

＋

＋人嗜T淋巴細胞病毒（HTLV）90-140＋

RNA

＋

＋巨細胞病毒（CMV）200＋DNA＋－EB病毒（EBV）150-180＋DNA＋－甲型肝炎病毒（HAV）27-32－

RNA

＋－丁型肝炎病毒（HDV）28-39＋

RNA

＋＋人細小病毒（HPV）18-26－

DNA

＋

＋克－雅氏?。–JD）蛋白質源性的傳染因子（朊蛋白－PrionProtein)二、血液制品的安全性P111）1.可由血液制品傳播的病毒第四十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五◆國家藥監(jiān)局規(guī)定：血液制品生產(chǎn)工藝必須包括病毒滅活/去除步驟◆血漿蛋白制品的生產(chǎn)：包括一步或兩步病毒滅活/去除工藝步驟◆病毒滅活/去除方法：須經(jīng)國家藥品管理部門批準后方可使用2.血液制品的病毒滅活/去除工藝第四十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五病毒滅活方法：（1）加熱法巴氏消毒法（60℃/10h）即在60±0.5℃連續(xù)加熱10-11小時。白蛋白采用這個方法進行病毒滅活，通常是在除菌過濾、分裝到最終容器以后進行加熱處理。通常，為防止蛋白質變性，在除菌過濾前要加入低濃度的辛酸鈉或辛酸鈉與N-乙酰色氨酸作為保護劑。幾十年的臨床使用情況證明，采用低溫乙醇法和巴氏滅活方法生產(chǎn)的白蛋白對肝炎病毒和HIV是安全的。第四十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五干熱法(80℃/72h)

凍干品加熱法蛋白質凍干除去水分以后可以耐受60-80℃或更高溫度。在80℃以上加熱可以產(chǎn)生令人滿意的對HBV、HCV、HIV和HAV的病毒滅活效果。凍干品加熱法一般多用于凝血因子類產(chǎn)品。由于凍干后病毒也更穩(wěn)定，因此，必須進行在規(guī)定條件下的病毒滅活驗證。凍干品加熱法的病毒滅活效果受產(chǎn)品的水分殘留量、組成成分如蛋白質、糖、鹽和氨基酸的含量以及冰凍與凍干時間的影響。由于病毒滅活對水分殘留量特別敏感，因此要根據(jù)驗證結果設置允許的水分殘留限度，并保持瓶間殘留水分的差異處于限度內(nèi)。第四十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（2）有機溶劑/表面活性劑（S/D法）P112S/D法磷酸三丁脂（TNBP）(0.3%)+Cholate(0.2%)（30℃/6h）

TNBP(0.3%)/Tween-80(1%)（24℃/6h）

TNBP(0.3%)/Triton-100(1%)（24℃/4~6h）有機溶劑與去污劑的混合物（S/D）能夠破壞包膜病毒的脂膜結構，導致受到破壞的病毒無法與感染細胞結合。但該方法不能滅活非脂包膜病毒。第四十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（3）Β-丙內(nèi)酯法P113

β-丙內(nèi)酯自1984年作為狂犬疫苗的滅活劑以來，已被廣泛應用于多種人和動物疫苗的生產(chǎn)。但β-丙內(nèi)酯可能具有致癌性第四十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（5）低pH法

（pH：４.00±0.20;24℃,21天）低pH法在某些酸性條件下,脂包膜病毒可以被滅活。免疫球蛋白經(jīng)低pH如pH4）處理，可以有效滅活幾種脂包膜病毒。如在免疫球蛋白生產(chǎn)中，通常采用20-22℃，pH4.1培育21天。滅活條件如pH值、孵放時間和溫度、胃酶含量、蛋白質濃度、溶質含量等因素，可能影響滅活效果，應確定這些參數(shù)允許變化的幅度。第四十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（6）美藍/熒光照射法P114可殺滅大多數(shù)脂質包膜病毒對非脂質包膜病毒殺滅效果不佳第四十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五病毒去除方法層析（離子交換或親和層析）納米膜過濾(使用20nm或50nm的膜過濾。)第五十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五血液制品常用病毒滅活方法1.人血白蛋白：巴氏消毒法（60℃/10小時）2.IVIG/IMIG（包括特異性免疫球蛋白）：

-低pH孵放法（pH4）

-巴氏消毒法

-低pH孵放法加納米膜過濾

-巴氏消毒法加低pH孵放法

-S/D（有機溶劑/去污劑）法3.人凝血因子:-S/D法

-S/D法/100℃、30分鐘，干熱法：80℃、72小時。血液制品常用病毒滅活方法第五十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五第五節(jié)人源性生物制品制備實例P119NP156第五十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五白蛋白又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質。白蛋白對治療因失血、創(chuàng)傷、燒傷等引起的休克，腦水腫和大腦損傷性所致的腦壓增高，防止低蛋白血癥，肝硬化或者由腎病引起的水腫與腹水等嚴重疾病具有良好療效。一、人血漿白蛋白制劑的制備第五十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五白蛋白為單鏈分子，由584個氨基酸殘基組成，N端為天門冬氨酸，C端為亮氨酸，分子量為6.6×104，在離子強度為0.15時，pI為4.7，易溶于水，在60%硫酸銨飽和度以上沉淀。對酸較穩(wěn)定，受熱變性。從人體中分離的白蛋白有兩種：一種是從健康人血漿中分離制得的人血白蛋白，另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得的胎盤血白蛋白。第五十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五常用的血漿蛋白分離純化技術1、低溫乙醇沉淀法分離血漿蛋白（1）原理在介電常數(shù)大的溶液中，蛋白質的溶解度大，在介電常數(shù)小的溶液中蛋白質的溶解度就小。乙醇能顯著地降低蛋白質水溶液的介電常數(shù)，從而使蛋白質從溶液中沉淀析出。蛋白質分子量越大，越先析出；蛋白質分子量越小，越后析出第五十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五第五十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五乙醇為有機溶劑的優(yōu)點化學性質穩(wěn)定，毒性低可與水任意混合，使用方便易得，易回收，污染小冰點低，在生產(chǎn)條件下不產(chǎn)生具有爆炸性危險的氣體混合物抑制細菌生長，對病毒有較強的殺滅作用對蛋白活性影響小第五十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五1.pH2.乙醇濃度3.溫度4.蛋白質濃度5.離子強度在五變系統(tǒng)中，對蛋白分離最重要的變化因素是pH和乙醇濃度。（2）低溫乙醇法中影響蛋白質沉淀反應的因素第五十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五A、pH當pH位于等電點時，蛋白質的溶解度最小，所以最易沉淀以根據(jù)蛋白質的等電點不同順序沉淀出不同的血漿蛋白。通常低溫乙醇法是在pH4.4-7.4之間進行分離.第五十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五B、溫度溫度低，蛋白質的溶解度低。溶液中加入乙醇，因乙醇的水合作用，會產(chǎn)生放熱現(xiàn)象，而溫度升高可能造成蛋白質的變性，所以在低溫乙醇工藝中，整個過程均應控制在0～-8℃。如溫度控制不當，輕則會影響蛋白質的得率，重則引起蛋白質變性。第六十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五C、蛋白質濃度如果溶液的蛋白質濃度較大，容易引起多種蛋白共同沉淀，所以在分離過程中，可將蛋白質溶液作適當?shù)南♂?，以減少蛋白質之間的相互作用，避免多種蛋白共同沉淀，但過分稀釋，蛋白質易變性，同時增大分離的容量，也不可取。所以應選擇適宜的濃度。在低溫乙醇工藝中，蛋白質濃度范圍為：0.2-6.6%第六十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五D、離子強度鹽類與蛋白質的互相影響隨離子強度而變化。在低鹽溶液中，鹽濃度的很小改變即可引起蛋白質溶解度的極大變化。離子強度用r/2表示。低溫乙醇法工藝中離子強度的變化范圍在0.01-0.16。正常人血清的離子強度接近于0.15。第六十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五E、乙醇濃度乙醇能降低蛋白質溶液的介電常數(shù)，隨著乙醇濃度的增加，蛋白質溶液的介電常數(shù)逐漸降低，而其溶解度急劇下降。在低溫乙醇工藝中，乙醇的濃度范圍在0-40%。第六十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五低溫乙醇法優(yōu)點相對簡單的操作，產(chǎn)量高，適宜工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。保持蛋白質的天然特性。抑菌作用。同時分離多種血漿成分，適于血漿綜合利用。乙醇作為主要原材料，價格低廉，易于獲得。第六十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五血漿EOH：8%，PH：7.2，T：-3℃，PC：5.1%上清Ⅰ沉淀ⅠEOH：25%，PH：6.9，T：-5℃，PC：3.0%上清Ⅱ+Ⅲ沉淀Ⅱ+Ⅲ（供分離Ig用）EOH：18%，PH：5.2，T：-5℃，PC：1.6%上清Ⅳ-1沉淀Ⅳ-1Cohn6法工藝流程第六十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五上清Ⅳ-4沉淀Ⅳ-4EOH：40%，PH：4.8，T：-5℃，PC：0.8%上清液Ⅴ沉淀ⅤEOH：40%，PH：4.5，T：-3℃，PC：3%上清液不純物質EOH：40%，PH：5.0，T：-5℃，PC：10%Cohn6法工藝流程第六十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五EOH：40%，PH：5.2，T：-5℃，PC：2.5%上清液白蛋白Cohn6法工藝流程第六十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五第六十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（1）離子交換層析（2）凝膠過濾層析（3）親和層析法

層析法第六十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五常用層析載體纖維素（cellulose）葡聚糖凝膠（Sephadex）瓊脂糖凝膠（Sepharose）聚丙烯酰胺凝膠（Bio-gel）多孔玻璃珠（Bio-Glass）第七十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五重組人血白蛋白（補）人血清白蛋白(humanserumalbumin，HSA）是迄今為止產(chǎn)量最大、用量最多的血漿蛋白藥物，在臨床和生物產(chǎn)品中的廣泛應用使其在國內(nèi)外均具有很大市場。由于rHSA批次之間的產(chǎn)品均一度好、純度高、生產(chǎn)規(guī)模不受限制、無病毒傳播風險，從而賦予其巨大的市場前景。第七十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五重組人血白蛋白的種類輸注用rHSA輔料級rHSA重組白蛋白融合蛋白藥物第七十二頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五天然尿激酶（UK）是由兩條肽鏈通過二硫鍵連接而成。是絲氨酸蛋白酶，絲氨酸、組氨酸是活性中心必需的氨基酸。血纖維蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白質底物，使纖溶酶原轉為纖溶酶。尿激酶用于治療各種新血栓形成或血栓梗塞疾病。

二、尿激酶（urokinase）的制備第七十三頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（3）工藝流程（圖3-2）男性尿

沉淀10℃下，pH8.5上清尿液酸化pH5.0-5.5酸化尿吸附硅藻土，5℃硅藻土吸附物洗滌5℃，水硅藻土柱洗脫0.02%氨水，0.1mol/LNaCl洗脫液去熱源、色素DEAE-SephadexA50柱，pH8.0,（二乙氨乙基葡聚糖）流出液（活性部分）濃縮羧甲基纖維素（CMC柱，pH4.2)CMC柱洗脫（HAC-NaAC)NH3+NaCl,pH11.5-11.8洗脫液透析H2O,4℃透析液凍干成品圖3-2尿激酶生產(chǎn)工藝路線第七十四頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（4）工藝要點①收尿：男性尿，8h內(nèi)處理。調(diào)尿液pH6.5以下。②硅藻土吸附：加入1%的硅藻土，5℃下攪拌吸附1h③洗脫：硅藻土吸附物用5℃冷水洗滌后裝柱，當洗脫液由清變渾時開始收集。④除熱原、色素：收集液用飽和NaH2PO4，調(diào)pH8.0，加NaCl調(diào)電導至22ms，過DEAE-SephadexA50層析柱，收集流出活性部分。第七十五頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五⑤CMC濃縮：流出液用1mol/LHAc調(diào)至pH4.2，用蒸餾水調(diào)電導至16-17M/Ω，通過CM-C層析柱。用10倍體積的pH4.2的HAC-NaAc緩沖液洗滌柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/LNaCl溶液洗脫尿激酶。收集活性組分，雜質被吸附。⑥產(chǎn)品質量：無色澄清液或白色凍干粉末。酶活力>15000IU/mg蛋白質。第七十六頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（1）HCG的性質HCG是一種糖蛋白，由α、β兩亞基組成，易溶于水，pI為3.2-3.3。HCG由胎盤滋養(yǎng)層合體細胞所分泌。婦女妊娠45-70天，尿中HCG含量可達30.000-50.000IU/24h。治療女性不育癥，神經(jīng)性皮炎。男性性功能過低癥和隱睪癥，子宮出血和習慣性流產(chǎn)。三、人絨毛膜促性腺激素（HCG）的制備第七十七頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五

圖3-3HCG生產(chǎn)工藝路線孕婦尿[粗制]尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5）用HCl調(diào)pH4-5HCG(粗品）提取NaACpH4.8提取液透析水，5℃以下透析內(nèi)液吸附（CMSepharoseCI-6B）羧甲基瓊脂糖凝膠吸附后交換劑洗滌Ⅰ，Ⅱ峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗滌后交換劑洗脫NaAC,pH8.5洗脫液冷凍干燥

—30℃HCG精品溶解蒸餾水，10℃以下HCG溶液透析pH6.8,5℃以下透析內(nèi)液吸附羥基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS),pH6.8解吸液干燥—30℃HCG純品（2）HCG生產(chǎn)工藝路線第七十八頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（3）工藝要點①吸附粗品：HCl調(diào)孕婦尿至pH4-5，加苯甲酸—乙醇飽和液（孕婦尿：苯甲酸乙醇飽和液：乙醇=1:0.075:5）攪拌1h靜置2-3h，過濾，棄濾液，得吸附物。在攪拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮狀沉淀產(chǎn)生，靜置過夜，離心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗滌，干燥得粗制品。第七十九頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五②提取：加10倍量的4℃1/15mol/L、pH4.8醋酸鹽緩沖液，攪拌4h，離心，取上清液。沉淀再提取2h。合并兩次提取液，棄去沉淀。③離子交換層析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液平衡后樣品上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和pH5.9、0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液洗滌出兩個峰（雜質）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸鹽緩沖液洗脫，得到的第3峰即為HCG。第八十頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五④羥基磷灰石柱層析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸鹽緩沖液平衡。樣品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸鹽緩沖液進行層析上柱。洗脫先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.81.0mmol/L的磷酸鹽緩沖液。得到I、II活性峰。然后冷凍干燥。HCG純品的比活性為10,000-12,000IU/mg蛋白質。

第八十一頁，共八十九頁，編輯于2023年，星期五（1）性質：由活化的淋巴細胞所產(chǎn)生的，糖蛋白有一個鏈內(nèi)二硫橋（58位，105位）。等電點為pH6.5。（2）工藝路線（圖3-4）

誘生白細胞培養(yǎng)液0.4mol/LNaCl,PBS,pH6.5UltrogelACA44柱，pH7.6圖3-4為IL-2生產(chǎn)工藝路線人血白細胞誘生雞瘟病毒，絲裂原培養(yǎng)液，37℃，CO2,孵育[滅活病毒]HCl,pH2.0-2.5；NaOH,pH7.2-7.4上清液硫酸胺分級（0.35飽和度）離心[去變性雜蛋白]上清液硫酸胺沉淀（0.85飽和度）離心沉淀除鹽10mmol/L磷酸鈉緩沖液，PBS透