動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)三魚類血液涂片制作與血細(xì)胞計(jì)數(shù)

動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)三魚類血液涂片制作與血細(xì)胞計(jì)數(shù)第一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

血液具有維持生物體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的作用，正常情況下血液中的的各項(xiàng)生理指標(biāo)處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，同時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)也能夠反映一個(gè)生物個(gè)體的健康程度，因而血液檢測(cè)已成為疾病檢測(cè)最基本的技術(shù)。多種多樣的血液檢測(cè)儀第二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五血液檢測(cè)能夠輔助疾病診斷第三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，也是生物顯微制片的基本方法之一，臨床上應(yīng)用極為廣泛，特別是對(duì)于各種血液病的診斷具有重要的價(jià)值。制備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要基本技術(shù)。人體血液涂片第四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五血液涂片技術(shù)在水產(chǎn)動(dòng)物疾病檢測(cè)過程中也有非常重要的作用，比如細(xì)菌感染、病毒感染以及血液寄生蟲疾病的檢測(cè)。目前該技術(shù)已成為水產(chǎn)技術(shù)從業(yè)人員的必備技能，也是執(zhí)業(yè)資格考試的重點(diǎn)內(nèi)容。第五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

涂片經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色液染色后，相應(yīng)各類細(xì)胞呈現(xiàn)不同的著色，從而達(dá)到辨別其形態(tài)特征的目的。一般細(xì)胞的細(xì)胞核嗜堿性，能被堿性燃料染成藍(lán)色，而細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)嗜酸性，能被酸性燃料染成紅色。第八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

血細(xì)胞計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品血液的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上（又稱細(xì)胞計(jì)數(shù)板），于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，根據(jù)血液稀釋的倍數(shù)，進(jìn)一步推算出血液中血細(xì)胞數(shù)的一種方法。第九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五魚類麻醉前后對(duì)比示意圖第十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五2、血液的采集將準(zhǔn)備好的2mL注射器，抽動(dòng)活塞用肝素鈉溶液將注射器內(nèi)濕潤(rùn)，為血液的采集做好準(zhǔn)備工作。血液的采集按實(shí)驗(yàn)2的采血方法進(jìn)行，采好的血液保存于1.5mL離心管中待用。第十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五3、推片取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端刮取血滴，迅速使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈30°～40°，向另一端平穩(wěn)地推出，涂片推好后，放置于空氣中使之自然干燥。（1）將采出的血液滴在載片上第十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

（2）另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。第十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

（3）兩玻片的角度以30-45°為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。第十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五（4）血涂片第十八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五不良血涂片第十九頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五4、血涂片染色先將干燥血片用甲醇固定3-5分鐘，將固定的血片置于被pH6.4-6.8磷酸鹽緩沖液稀釋10-20倍的吉姆薩染液中，浸染5分鐘（標(biāo)本較少可用滴染法），取出用蒸餾水沖洗，再用伊紅復(fù)染1分鐘，用蒸餾水沖洗，待干后鏡檢。第二十頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五沖洗后滴加少量伊紅，染色1分鐘直接流水沖洗1分鐘（切勿先倒掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后鏡檢涂片干燥后加吉姆薩染液染色5分鐘第二十一頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)XB-K-25為計(jì)數(shù)板的型號(hào)和規(guī)格，表示此計(jì)數(shù)板分25個(gè)中格。0.1mm為蓋上蓋玻片后計(jì)數(shù)室的高；1/400mm2表示計(jì)數(shù)室面積是1mm2，分為400個(gè)小格，每小格面積是1/400mm2。

第二十二頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第二十三頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

1、血液稀釋用10微升移液槍取10微升血液于一新的1.5mL離心管中，再用1000微升移液槍吸990微升生理鹽水于離心管中（稀釋100倍），輕輕顛倒混勻。2、計(jì)數(shù)板處理用無水乙醇或95%乙醇溶液擦拭計(jì)數(shù)板后，用綢布擦凈，另擦凈蓋玻片一張，把蓋片覆在計(jì)數(shù)板上面。3、充液取干凈的計(jì)數(shù)板平放于實(shí)驗(yàn)桌上，將蓋玻片置入計(jì)數(shù)板正中央。用毛細(xì)血管吸取已稀釋混勻后的血細(xì)胞懸浮液，并將管尖輕輕斜置于蓋玻片邊緣，讓血細(xì)胞懸液緩慢流出，借毛細(xì)管現(xiàn)象而自動(dòng)流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。第二十四頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五第二十五頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

4、靜置血細(xì)胞懸液充入計(jì)數(shù)室后，靜置2～3分鐘，待細(xì)胞不再浮動(dòng)后，于低倍鏡下觀察計(jì)數(shù)室內(nèi)待計(jì)數(shù)的血細(xì)胞分布是否均勻，分布均勻者，方可計(jì)數(shù)。第二十六頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五

5、按圖計(jì)算計(jì)數(shù)板的四角大方格（每個(gè)大方格又分16個(gè)小方格）內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞，若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。在一個(gè)大方格中，如果有細(xì)胞位于線上，一般計(jì)下線細(xì)胞不計(jì)上線細(xì)胞，計(jì)左線細(xì)胞不計(jì)右線細(xì)胞。第二十七頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五6、計(jì)算計(jì)完數(shù)后，需換算出每ml懸液中的細(xì)胞數(shù)。由于計(jì)數(shù)板中每一方格的面積為0.01cm2，高為0.01cm，這樣它的體積為0.0001cm3，即0.1mm3。由于1ml＝1000mm3，所以每一大方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)×10000＝細(xì)胞數(shù)/ml，故可按下式計(jì)算：細(xì)胞懸液細(xì)胞數(shù)/ml＝4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000

如計(jì)數(shù)前已稀釋，可再乘稀釋倍數(shù)。第二十八頁(yè)，共三十頁(yè)，編輯于2023年，星期五血細(xì)胞計(jì)數(shù)換算公式：16×25：計(jì)數(shù)個(gè)數(shù)×400×1