幾種顯微技術的應用

幾種顯微技術的應用第一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五第二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五第三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五2.把標本固定在載物臺上3.用10X物鏡對焦，將10X物鏡引入光路，先粗調，再微調達到最清晰。

4.雙目鏡筒間距和視度差的調節(jié)5.根據(jù)要求放大倍數(shù)，旋轉物鏡轉換器，使所選物鏡進入光程，再進行微調，使標本清晰。光亮不足，可增大電壓或取掉ND濾光片。第四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五聚光鏡的調節(jié)聚光鏡位置調節(jié)

①縮小視場光闌，視場中出現(xiàn)一個正多邊形，若邊緣不清楚，表明聚光鏡的位置不合適。②慢慢向上或向下調整聚光鏡，使多邊形邊緣逐漸達最清楚；這樣聚光鏡就處于正確位置。視場光闌處于最大狀態(tài)縮小視場光闌第五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五聚光鏡中心位置調節(jié)①將視場光闌縮至較小狀態(tài)。②旋轉兩個聚光鏡中心調節(jié)螺絲，把正多邊形的視場光闌像移到目鏡中心。③慢慢開啟視場光闌，直至目鏡視場與正多邊形的視場光闌像外切。

第六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五中心調節(jié)螺絲第七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五視場光闌的調節(jié)

調節(jié)照明范圍，按物鏡情況縮小視場光闌，遮斷多余的光線，從而獲得分辨率和反差好的像，且增大焦深。標本反差低時，在攝影時以視場光闌像占目鏡視場以70～80％為宜。

視場光闌像目鏡視場第八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五孔徑光闌的調節(jié)通過物鏡的數(shù)值孔徑與照明系的數(shù)值孔徑相對應，可得到分辨力和反差好的像，并可增大焦深。顯微標本一般反差較低，調節(jié)時可使孔徑光闌像占物鏡光瞳的70—80％較合適。物鏡光瞳孔徑光闌像第九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五浸油物鏡的使用①先用低倍物鏡對焦。②在標本上滴上浸漬油。③旋轉轉換器，把浸油物鏡引入光程，用微調旋鈕對焦。浸油聚光鏡的使用先把標本從鏡臺上取出，把油滴在聚光鏡的前透鏡上，再把標本放到載物臺上，慢慢升高聚光鏡，直到與載玻片接合為宜。使用完后用無水乙醇與乙醚(3：7)混合液擦去浸油。

第十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五觀察中濾色片的使用(1)防止耀眼和減輕眼睛疲勞。

防止耀眼：采用乳白色玻璃或毛玻璃濾光，也可用濾光鏡。

減輕眼睛疲勞：根據(jù)標本顏色選用綠色、黃色或蘭色濾光片，把刺激眼睛的紅光吸收掉，以減輕眼睛疲勞。(2)增進分辨力。將白光中波長較長的光波吸收掉，利用短波光照射，如綠色或蘭綠。第十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五各類濾色鏡第十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五（3）增大反差：選用與標本顏色互補的濾光片。

標本顏色波長（毫微米）濾光片顏色（標本的互補色）紫色380—430黃色藍色430—490青490—510橙色紅色綠510—570紫紅黃色570—600紫藍橙色600—620青色紅色620—750第十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五熒光顯微鏡的原理及操作技術

熒光的產生

被檢物體接受一定波長的激發(fā)光，吸收能量變成高能態(tài)，立即放出能量，發(fā)出長波光，發(fā)出的長波光稱為熒光。

一次熒光(固有熒光或自發(fā)熒光)一些物體經(jīng)過短波(紫外線)照射后，本身就能產生熒光.

第二次熒光很多被檢物必須事先用熒光物質進行處理，再經(jīng)紫外線等短波光照射，才能產生熒光。第十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五落射式熒光顯微鏡第十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五落射式熒光顯微鏡原理

第十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五分色鏡的作用分色鏡放在鏡筒中間與入射光線成45o，使入射光線反射并發(fā)生方向變化，照向被檢物體，它具有使短波光反射，長波光透過的作用。激發(fā)濾色鏡作用裝在激發(fā)光的光路中，阻止長波光的透過而使短波光通過。吸收濾色鏡的作用安裝在觀察長波光光路中，吸收短波光，讓長波光透過。

第十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五熒光顯微鏡的特點光源光源是短波光，一般采用100W或200W的超高壓汞燈。激發(fā)出的光譜是紫外、紫蘭及部分強可見光，所以所有的標本均可用高壓汞燈進行激發(fā)，通過激發(fā)濾光片，得到不同的激發(fā)效果。

第十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五使用超高壓汞燈注意事項：①由于超高壓汞燈激發(fā)產生紫外線等短波，伴隨會產生大量的熱量，所以應具有隔熱設備，但并不阻礙紫外線的通過。②工作環(huán)境不能太熱，否則影響燈泡的使用壽命及其它附件的工作性能。第十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

③紫外線對人體有損害作用，必須具有遮光板(棕紅色)，并且不能用眼睛在旁邊觀看，更不能在燈泡未裝入燈室而在外邊進行啟動，這樣易爆炸。④200W超高壓汞燈，在每次開啟超過兩個小時的情況下，平均壽命400小時，100W在相同條件下，平均使用壽命200小時。若剛啟動20分鐘到1小時之內關電源，會使使用壽命減半，堅決不能在15分鐘之內切斷電源。第二十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五濾色鏡類

激發(fā)濾光片①紫外光激發(fā)濾光片可使400nm以下的紫外光透過，而阻擋400nm以上的光。②紫蘭光激發(fā)濾光片可使350～490nm范圍的光透過，而阻擋其它范圍波長的光。③紫外紫光激發(fā)濾光片可使300～450nm范圍波長光通過。第二十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五吸收濾光鏡根據(jù)激發(fā)鏡的不同而確定。原則以完全吸收阻礙激發(fā)光(短波光)為宗旨，分為三類：①紫外光吸收濾光片②紫蘭光吸收濾光片③紫外紫光吸收濾光片第二十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五物鏡

由氟石磨制的半復消色差物鏡，物鏡上標有FL標記，40×物鏡一般就需要加油觀察，油必須是無熒光油。落射式熒光顯微鏡物鏡內設置聚光鏡，在高倍時帶有虹彩光闌，可以調節(jié)焦深，在標本熒光較弱時，盡量使用N.A.大的物鏡。

第二十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五落射式熒光顯微鏡的使用方法準備工作1、燈泡的安裝a.旋開燈室固定燈泡裝置的螺絲，取出燈座。b.按照要求正負極安裝高壓汞燈，同時注意燈泡抽真空咀痕跡不能正對光路，而應錯開，最好垂直方向。2、接通電源，打開電源開關，與此同時，電源指示綠燈點亮．第二十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五第二十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

a.打開電源開關時，有時燈不立即點燃，這是由于電極老化的原因，可進行幾次重復打開電源；若燈壽命已盡請更換新燈泡。b.點燃2—3分鐘后，光線將穩(wěn)定。c.點燃15分鐘內不能切斷電源。d.每次關掉電源開關，重新啟動間隙不得少于3分鐘。每次更換燈泡以后，請把計時器放在“0”位．第二十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五3、燈位調中

a．打通光路將光路中擋光板放在光完全通過的位置．b．視場光闌“F”和孔徑光闌“A”旋到最大位置．c．將物鏡旋出光路,并從物鏡轉換器上拆一個防塵帽蓋，裝上定心屏，就在定心屏上出現(xiàn)弧形圖角或其它圖像。d．用調焦柄(在燈室前)對弧形進行調節(jié)，使其達最清楚。e.通過燈泡調中螺絲對弧形調中。

第二十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五定心屏第二十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五視場光闌“F”孔徑光闌“A”調焦柄第二十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五熒光觀察

(1)將標本的觀察范圍放在視野內，進行調焦。(2)根據(jù)要求選擇分色鏡類型，并使激發(fā)濾光片和吸收濾光片同時進入光路．（3）縮小視場光闌“F”，使多邊形出現(xiàn)在視場內。如果多邊形不在視場中心，請用調節(jié)視場中心鈕調中。（4）變化孔徑光闌“A”，使觀察視場出現(xiàn)最理想的像。

第三十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五熒光顯微鏡標本制作要求載玻片載玻片厚度應在0.8～1.2mm之間，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標本上聚集。蓋玻片蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強激發(fā)光，也可用干涉蓋玻片，即表面鍍有氟化鎂的蓋玻片，它可以使熒光順利通過，而反射激發(fā)光，這種反射的激發(fā)光又可激發(fā)標本。

第三十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五標本組織切片或其他標本不能太厚。如太厚激發(fā)光大部分消耗在標本下部，而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外，細胞重迭或雜質掩蓋，影響判斷。封片劑封片劑常用甘油，必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5～9.5時較亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/LpH9.0～9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封片劑。鏡油

最好使用特制的無熒光鏡油。

第三十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五使用熒光顯微鏡的注意事項

1.嚴格按照熒光顯微鏡要求進行操作，不要隨意改變程序。

2.點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，再開始觀察標本，最好在暗室中進行。

3.在調整光源時應戴上防護眼鏡，防止紫外線對眼睛的損害。

第三十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

4.檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，另外，標本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱。5.熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。

6.標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。第三十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五體視顯微鏡的原理及操作技術用途：主要用于實體解剖、觀察。特點：1.像是正立的。

2.有兩個物鏡，其夾角為12-15°，使標本具立體效果。

3.工作距離長。

第三十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五第三十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

4.焦深大，放大倍數(shù)較小，最大放大倍數(shù)為240倍。5.物鏡鏡口率小，分辯率低。6.照明方式有兩種，一種是用側光源從一側或兩側斜照射；另一種是透射式照明，透射式照明有明暗視野之分。7.主體上具有連續(xù)放大旋鈕。第三十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五操作程序觀察

1．打開電源開關，向前推動提高電壓。2．轉換觀察光路，即明視場和暗視場轉換。3．將標本放于載物臺上，光線若太暗或不均勻，可在旁邊用側光照明。4．進行瞳距調節(jié)。5．進行左右眼曲光度校正。第三十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

6.將連續(xù)變倍旋鈕放在最低倍。7.調焦，觀察。8.增大連續(xù)變倍的倍數(shù)，重新調節(jié)焦距。9.調節(jié)孔徑光闌的大小，使像達到最清晰。10.進行標本觀察與解剖。

第三十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五倒置生物顯微鏡的使用XDS系列倒置生物顯微鏡特點和用途

特點

具有長工作距離的平場消色差物鏡、長工作距離的聚光鏡，具有相襯裝置。

用途

適合于附著在培養(yǎng)皿底或懸浮在培養(yǎng)基中的活體觀察，是細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)及微生物研究的必備儀器。第四十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五視場光闌濾光片孔徑光闌調中旋鈕攝影拉桿環(huán)板插孔第四十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五操作技術

1.將亮度調至最小，打開開關，再將亮度調至適中。2.將標本置于載物臺上，將低倍物鏡置入光路，通過目鏡觀察，使用粗、微調焦手輪使標本成像清晰。

第四十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

3.調整雙目瞳距與觀察者瞳距一致。4.聚光鏡位置和中心調節(jié)。

5.孔徑光闌調節(jié)。第四十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期五

6.調整并列的三個燈源調節(jié)手柄，使燈絲成像于孔徑光闌正中(可臨時放一白色紙片在聚光鏡保護玻璃上觀察)。7.濾色片選擇8.將高倍物鏡置入光路，用右目鏡觀察，調整微動手輪使成像清晰。用左目鏡觀察，調整