地貧基因診斷

地貧基因診斷第一頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地中海貧血基因地中海貧血是一組單基因遺傳性溶血性疾病第二頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五我國(guó)和β地貧基因突變類(lèi)型頻率ZhangJ,etal.Hemoglobin.2012Sep3.第三頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地中海貧血基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧

廣東8.532.54

廣西11.196.78

云南

四川14.71.9222.62.18

臺(tái)灣4.201.10

香港5.023.41Xu,etal.JClinPathol2004,57:517-22.

Cai,etal.ChiJEpidemiol2002,23:281-5.Zhao,etal.ChiJEpidemiol2011,32:352-6.第四頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五α地貧基因分子基礎(chǔ)缺失型：常見(jiàn)（約占60%）非缺失型：少見(jiàn)（約占40%）第五頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五α地貧基因分子基礎(chǔ)α1地貧（α

0地貧）：

16號(hào)染色體兩個(gè)α基因喪失;一個(gè)缺失，另一個(gè)點(diǎn)突變。

-α/-α或α

地α/α

地α

，--/αα。α2地貧（α+地貧）：

16號(hào)染色體一個(gè)α基因功能喪失。

-α/αα

或α地α/α

α。第六頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五血紅蛋白H病:由于α基因3個(gè)缺失/突變，使過(guò)量的β珠蛋白肽鏈形成β4多聚體（HbH）胎兒水腫：4個(gè)α基因全部缺失/突變非缺失型α地貧α地貧基因分子基礎(chǔ)第七頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五

我國(guó)非缺失型地貧常見(jiàn)基因類(lèi)型：

2CD30GAG(Glu)UnstableHb2CD31AGGAAG(ArgLys)Splicingmutation2CD59GGCGAC(GlyAsp)UnstableHbHbWestmead2CD122CACCAG(HisGln)UnstableHb

HbQS2CD125CTGCCG(LeuPro)UnstableHbHbCS2CD142TAACAA(Gln)Terminatormutationα地貧基因分子基礎(chǔ)第八頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五α

地貧臨床類(lèi)型與基因類(lèi)型的關(guān)系臨床基因靜止型-

α/αα輕型-

α

/-

α或--/αα中間型--/-

α

重型--/--第九頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五β地貧基因分子基礎(chǔ)基因缺失：少見(jiàn)(僅見(jiàn)于:41-42)點(diǎn)突變：常見(jiàn)（約占99.5%）第十頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五β地貧基因分子基礎(chǔ)第十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五

β

地貧臨床類(lèi)型與基因類(lèi)型的關(guān)系臨床基因輕型β地/β（β雜合子）中間型β地/β地（β變異型純合子或雙重雜合子）重型β地/β地（β純合子或雙重雜合子）第十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地中海貧血基因診斷技術(shù)PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）反向點(diǎn)雜交（RDB）Southernblot限制性切酶譜分析多重連接酶依賴探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因測(cè)序第十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五Genotypingofthe--SEAallelesbyGap-PCR

地貧基因診斷技術(shù)（Gap-PCR）第十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷技術(shù)（ASO）第十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷技術(shù)（ASO）第十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷技術(shù)（RDB）第十七頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五GenotypeFatherCDs41-42(CTTT)/NMotherIVS-2-654(CT)/NFetusCDs41-42/IVS-2-654NormalcontrolN/N地貧基因診斷技術(shù)（RDB）第十八頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷技術(shù)（MLPA）第十九頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷技術(shù)（DHPLC)第二十頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五

α地貧(缺失型)的基因診斷

Southern印跡結(jié)合多重PCR結(jié)合缺口PCR(Gap-PCR)

多重連接酶依賴探針實(shí)時(shí)熒光定量限制性切酶譜分析溶解曲線分析結(jié)合片段大小分析擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)PCR(RQ-PCR)

優(yōu)點(diǎn)可用于分析基因的簡(jiǎn)潔，快速，污對(duì)儀器要求低，易推重復(fù)性好，特異性高確定cDNA拷貝大片段缺失與重復(fù)染降低，檢測(cè)單廣，檢測(cè)大片段缺失。，可同時(shí)檢測(cè)已知與數(shù)，可同時(shí)檢突變，結(jié)果可靠，個(gè)堿基突變及小未知大片段缺失或重測(cè)已知和未知穩(wěn)定性高。片段缺失。復(fù)突變。大片段缺失缺點(diǎn)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、需用不能檢測(cè)未知缺失及成本高限制了其推廣放射性同位素。非缺失突變。應(yīng)用

PCR診斷方法的可鑒定各種缺失廣泛用于地貧檢測(cè)，作為常見(jiàn)地貧基因篩作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充或佐證。類(lèi)型?？蓞^(qū)分雜合子及純陰性但高度懷疑地貧或產(chǎn)前篩查合子的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。各種α地貧基因診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用第二十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五α地貧(非缺失型)的基因診斷PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶酶譜分析：簡(jiǎn)便、快捷，但只限于涉及限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變的突變和小片段缺失的檢測(cè)多重?cái)U(kuò)增不應(yīng)突變系統(tǒng)：簡(jiǎn)便、快速，同Gap-PCR一樣，廣泛用于α地貧基因檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合寡核苷酸探針的反向斑點(diǎn)雜交:診斷效率高，廣泛用于常見(jiàn)非缺失型基因檢測(cè)

基因芯片：并行性、多樣性及自動(dòng)化，同時(shí)診斷α及β地貧基因測(cè)序：可用于檢測(cè)未知的非缺失型地貧基因第二十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五β地貧基因診斷

點(diǎn)突變PCR-RDB基因測(cè)序第二十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五植入前基因診斷（羊膜穿刺取樣）

母體外周血分離胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷

母體血漿或血清中胎兒DNA分析

地貧基因產(chǎn)前診斷新技術(shù)第二十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五地貧基因診斷臨床應(yīng)用第二十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問(wèn)題不同種族/地區(qū)地貧基因突變點(diǎn)有差別臨床貧血的嚴(yán)重程度（即臨床分型）與基因診斷的嚴(yán)重程度一致：確診第二十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問(wèn)題臨床貧血嚴(yán)重程度與基因診斷不一致（1）臨床“重”，基因“輕”：①應(yīng)作家系調(diào)查，找診斷證據(jù)(舉例:新