第二章 基因工程習(xí)題 答案

基因工程課程習(xí)題選擇題

001基因工程操作三大基本元件是【Ａ】

I供體II受體III載體IV抗體V配體

ＡI+II+III

ＢI+III+IV

ＣII+III+IV

ＤII+IV+V

ＥIII+IV+V002依照當(dāng)今生命科學(xué)理論，基因工程用途是【E】

I分離純化基因II大量生產(chǎn)生物分子III構(gòu)建新型物種IV提升基因重組效率

ＡI+II+III

ＢI+II+IV

ＣI+III+IV

ＤII+III+IV

ＥI+II+III+IV003依照基因工程定義，以下各名詞中不能代替基因工程是【A】

Ａ基因誘變

Ｂ分子克隆

ＣDNA重組

Ｄ遺傳工程

Ｅ基因無性繁殖004基因工程單元操作次序是【B】

Ａ增，轉(zhuǎn)，檢，切，接

Ｂ切，接，轉(zhuǎn)，增，檢

Ｃ接，轉(zhuǎn)，增，檢，切

Ｄ檢，切，接，增，轉(zhuǎn)

Ｅ切，接，增，轉(zhuǎn)，檢005以下關(guān)于基因敘述，錯(cuò)誤是【A】

Ａ蛋白質(zhì)是基因表示唯一產(chǎn)物

Ｂ基因是DNA鏈上具備編碼功效片段

Ｃ基因也能夠是RNA

Ｄ基因突變不一定造成其表示產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)

Ｅ基因具備方向性006限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生，其生理意義是【D】

Ａ修復(fù)本身遺傳缺點(diǎn)

Ｂ促進(jìn)本身基因重組

Ｃ強(qiáng)化本身核酸代謝

Ｄ提升本身防御能力

Ｅ補(bǔ)充本身核苷酸消耗007天然PstI限制性內(nèi)切酶起源是【D】

ＡBacillusamyloliquefaciens

ＢEscherichiacoli

ＣHaemophilusinfluenzae

ＤProvidenciastuartii

ＥStreptomyceslividans008T4-DNA連接酶是經(jīng)過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物關(guān)鍵基團(tuán)是【D】

Ａ2'-OH和5'-P

Ｂ2'-OH和3'-P

Ｃ3'-OH和2'-P

Ｄ3'-OH和5'-P

Ｅ5'-OH和3'-P009若載體DNA用M酶切開，則以下五種帶有N酶粘性末端外源DNA片段中，能直接與載體拼接是【D】

M

N

ＡA/AGCTTT/TCGAA

ＢC/CATGGACATG/T

ＣCCC/GGGG/GGCCC

ＤG/GATCCA/GATCT

ＥGAGCT/CG/AGCTC010以下關(guān)于質(zhì)粒分子生物學(xué)敘述，錯(cuò)誤是【B】

Ａ質(zhì)粒是共價(jià)環(huán)狀雙鏈DNA分子

Ｂ天然質(zhì)粒通常不含有限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列

Ｃ質(zhì)粒在宿主細(xì)胞內(nèi)能獨(dú)立于染色體DNA自主復(fù)制

Ｄ松弛復(fù)制型質(zhì)?？捎寐让顾?cái)U(kuò)增

Ｅ質(zhì)粒并非其宿主細(xì)胞生長(zhǎng)所必需011帶有多個(gè)不一樣種復(fù)制起始區(qū)質(zhì)粒是【A】

Ａ穿梭質(zhì)粒

Ｂ表示質(zhì)粒

Ｃ探針質(zhì)粒

Ｄ整合質(zhì)粒

Ｅ多拷貝質(zhì)粒012以下各慣用載體裝載量排列次序，正確是【A】

ＡCosmid>λ-DNA>Plasmid

Ｂλ-DNA>Cosmid>Plasmid

ＣPlasmid>λ-DNA>Cosmid

ＤCosmid>Plasmid>λ-DNA

Ｅλ-DNA>Plasmid>Cosmid013現(xiàn)在在高等動(dòng)物基因工程中廣泛使用載體是【C】

Ａ質(zhì)粒DNA

Ｂ噬菌體DNA

Ｃ病毒DNA

Ｄ線粒體DNA

Ｅ葉綠體DNA014若某質(zhì)粒帶有l(wèi)acZ標(biāo)識(shí)基因，那么與之相匹配篩選方法是在篩選培養(yǎng)基中加入【D】

Ａ半乳糖

Ｂ葡萄糖

Ｃ蔗糖

Ｄ5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）

Ｅ異丙基巰基-b-半乳糖苷（IPTG）015質(zhì)粒是基因工程中最慣用運(yùn)載體，它主要特點(diǎn)是【C】

①能自主復(fù)制

②不能自主復(fù)制

③結(jié)構(gòu)很?、艿鞍踪|(zhì)

⑤環(huán)狀RNA

⑥環(huán)狀DNA

⑦能“友好”地“借居”A①③⑤⑦

B②④⑥C①③⑥⑦

D②③⑥⑦016雙脫氧末端終止法測(cè)定DNA序列是基于【A】

ＡDNA聚合反應(yīng)

ＢDNA連接反應(yīng)

ＣDNA降解反應(yīng)

Ｄ特殊DNA連接酶

Ｅ聚合單體2'和5'位脫氧017以下三種方法中，能有效區(qū)分重組子與非重組子是【E】

I限制性酶切IIPCR擴(kuò)增III抗藥性篩選

ＡI

ＢI+II

ＣI+III

ＤII+III

ＥI+II+III018鳥槍法克隆目標(biāo)基因戰(zhàn)略適適用于【A】

Ａ原核細(xì)菌

Ｂ酵母菌

Ｃ絲狀真菌

Ｄ植物

Ｅ人類019cDNA第一鏈合成所需引物是【D】

ＡPolyA

ＢPolyC

ＣPolyG

ＤPolyT

Ｅ發(fā)夾結(jié)構(gòu)020TaqDNA聚合酶發(fā)覺使得PCR技術(shù)廣泛利用成為可能，這是因?yàn)椤綝】

ＡTaqDNA聚合酶能有效地變性基因擴(kuò)增產(chǎn)物

ＢTaqDNA聚合酶催化聚和反應(yīng)不需要引物

ＣTaqDNA聚合酶具備極強(qiáng)聚和活性

ＤTaqDNA聚合酶能使多輪擴(kuò)增反應(yīng)連續(xù)化

ＥTaqDNA聚合酶能使擴(kuò)增反應(yīng)在DNA變性條件下進(jìn)行021為了利用PCR技術(shù)擴(kuò)增以下染色體DNA片段上虛線部分，應(yīng)選取引物次序是【D】ＡI+II

ＢI+III

ＣI+IV

ＤII+III

ＥII+IV022構(gòu)建基因文庫(kù)通常使用載體是【E】

I質(zhì)粒IIλ-DNAIIICosmid

ＡI

ＢII

ＣIII

ＤII+III

ＥI+II+III023強(qiáng)化基因轉(zhuǎn)錄元件是【C】

Ａ密碼子

Ｂ復(fù)制子

Ｃ開啟子

Ｄ內(nèi)含子

Ｅ外顯子024開啟子特征之一是【B】

ＡGC富積區(qū)

ＢTATABox

Ｃ轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)

Ｄ長(zhǎng)度平均1kb

Ｅ含有一些稀有堿基025以下基因調(diào)控元件中屬于反式調(diào)控元件是【A】

Ａ阻遏蛋白

Ｂ開啟子

Ｃ操作子

Ｄ終止子

Ｅ增強(qiáng)子026包涵體是一個(gè)【E】

Ａ受體細(xì)胞中難溶于水蛋白顆粒

Ｂ大腸桿菌亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)

Ｃ噬菌體或病毒DNA體外包裝顆粒

Ｄ用于轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞脂質(zhì)體

Ｅ外源基因表示產(chǎn)物混合物027外源基因在大腸桿菌中以融合蛋白形式表示優(yōu)點(diǎn)是【Ｅ】

I融合基因能穩(wěn)定擴(kuò)增II融合蛋白能抗蛋白酶降解III表示產(chǎn)物易于親和層析分離

ＡIII

ＢI+II

ＣI+III

ＤII+III

ＥI+II+III028第二代基因工程是指【C】

Ａ路徑工程

Ｂ代謝工程

Ｃ蛋白質(zhì)工程

ＤRNA基因工程

Ｅ細(xì)胞器基因工程029基因工程菌中重組質(zhì)粒丟失機(jī)制是【Ｃ】Ａ重組質(zhì)粒滲透至細(xì)胞外

Ｂ重組質(zhì)粒被細(xì)胞內(nèi)核酸酶降解

Ｃ重組質(zhì)粒在細(xì)胞分裂時(shí)不均勻分配

Ｄ重組質(zhì)粒殺死受體細(xì)胞

Ｅ重組質(zhì)粒刺激受體細(xì)胞提升其通透性030利用毛細(xì)管作用原理，將凝膠電泳分離后DNA片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上并依照核酸雜交原理進(jìn)行分析技術(shù)是【Ｄ】ＡWestern印跡轉(zhuǎn)移技術(shù)ＢNorthern印跡轉(zhuǎn)移技術(shù)Ｃ基因表現(xiàn)型分析法ＤSouthern印跡轉(zhuǎn)移技術(shù)031在翻譯過程中．mRNA必需首先與核糖體相結(jié)合才能進(jìn)行蛋白質(zhì)合成。在原核生物中，mRNA分子上有兩個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)，一個(gè)是起始密碼AUG，另一個(gè)是【Ｃ】Ａ開啟子Ｂ調(diào)整基因ＣSD序列Ｄ終止子二、填空題答案1、Ⅱ型限制性內(nèi)切酶可特異性地識(shí)別呈雙重螺旋對(duì)稱結(jié)構(gòu)特定雙鏈DNA序列并進(jìn)行切割。如BstBⅠ(TTCGAA）消化可產(chǎn)生含5′CG3′5′磷?；损ば阅┒四┒?，PstⅠ（CTGCAG）消化可產(chǎn)生5′TGCA3′3′－OH端黏性末端，而SmaⅠ（CCCGGG）消化產(chǎn)生平末端。2、識(shí)別次序相同但切割位點(diǎn)不一樣者稱同位酶，識(shí)別次序與切割方式均相同者稱同裂酶，起源與識(shí)別次序均不一樣，但切割后形成限制性片段有相同粘性末端，稱同尾酶。3、受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2等化學(xué)試劑法）處理后，細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，成為能允許有外源DNA載體分子經(jīng)過，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。4、在翻譯過程中，mRNA必需首先與核糖體相結(jié)合才能進(jìn)行蛋白質(zhì)合成。在原核生物中，mRNA分子上有兩個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)，一個(gè)是起始密碼AUG，另一個(gè)是SD序列。5、在提取分離DNA過程中，加入酚-氯仿、去垢劑或酶目標(biāo)是使蛋白質(zhì)變性或水解，除去蛋白質(zhì)，使用金屬離子螯合劑如EDTA等原因是細(xì)胞內(nèi)有金屬離子，如Mg2+，是酶活性輔助因子，會(huì)使DNA被DNase分解，故除去使DNase活性Mg2+以保護(hù)DNA不被變性或降解。在小批量堿變性提取質(zhì)粒過程中加入醇溶液目標(biāo)是是DNA變性沉淀，并除去蛋白質(zhì)、糖類等其余水溶性雜質(zhì)，使之分離，加入Rnase目標(biāo)是除去DNA沉淀中RNA，是凝膠電泳檢測(cè)時(shí)條帶更顯著。6、PCR全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，它是一個(gè)在體外模擬DNA復(fù)制方式選擇性地?cái)U(kuò)增DNA特殊區(qū)域技術(shù)。它是在四種脫氧核苷三磷酸存在下，以寡聚核苷酸為引物及單鏈DNA為模板，經(jīng)DNA聚合酶催化合成DNA互補(bǔ)鏈過程，其基本反應(yīng)步驟為高溫變性、低溫退火和適溫延伸，并循環(huán)n次，達(dá)成擴(kuò)增目標(biāo)。7、采取光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子或其余生物樣品有序地固化于支持物表面，然后與已標(biāo)識(shí)待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，經(jīng)過特定儀器對(duì)雜交信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子數(shù)量技術(shù)稱為生物芯片技術(shù)，依照固定探針不一樣，可分為基因芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片和組織芯片。該技術(shù)具備高通量、快速高效、高度靈敏等特點(diǎn)。8、依照Southernblot結(jié)果能夠說明被檢測(cè)樣品中DNA及其含量，了解基因狀態(tài),如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等，Northernblot則用于檢測(cè)樣品中是否含有基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量，而Westernblot結(jié)果能夠明被檢測(cè)基因在蛋白質(zhì)水平上表示情況。9、基因工程中用來取得有功效異源蛋白質(zhì)體系稱為表示系統(tǒng)。10、用火藥爆炸或者高壓氣體加速將包裹了DNA球狀金粉或者鎢粉顆粒直接送入完整植物組織或者細(xì)胞中，這一方法稱為基因槍法?；蚬こ陶n程習(xí)題問答題基因工程操作過程主要步驟包含哪些？切、接、轉(zhuǎn)、增、篩（檢）（1）切——取得DNA片段，取得目標(biāo)基因；載體選擇與制備。

方法：從生物基因組中分離得到——基因組DNA——>酶切產(chǎn)物從總RNA中分離得到mRNA，再逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA人工合成——化學(xué)合成；PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）接——DNA片段和載體DNA在體外連接，形成重組子。轉(zhuǎn)——將重組DNA引入宿主細(xì)胞方式：轉(zhuǎn)化——某一基因型細(xì)胞從周圍介質(zhì)中吸收另一基因型細(xì)胞DNA，而使其基因型和表型發(fā)生對(duì)應(yīng)改變現(xiàn)象；轉(zhuǎn)染——除去蛋白質(zhì)外殼病毒核酸感染細(xì)胞或原生質(zhì)體過程；轉(zhuǎn)導(dǎo)——用噬菌體做載體，將一個(gè)細(xì)胞基因傳遞給另一個(gè)細(xì)胞過程。還有顯微注射等。（4）增——培養(yǎng)已轉(zhuǎn)化細(xì)胞，使目標(biāo)基因在其中進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增，并將其整合到受體細(xì)胞基因組中。（5）篩、檢——重組子篩選與判定。篩選和判定轉(zhuǎn)化細(xì)胞，取得使外源基因高效表示基因工程菌或細(xì)胞。2、什么是限制性核酸內(nèi)切酶？第二型限制酶有何特點(diǎn)？限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶，restrictionendonuclease）是一類能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中一些特定核苷酸序列，并對(duì)DNA分子進(jìn)行切割核酸內(nèi)切酶。第二型限制酶特點(diǎn):2亞基，單輔因子;識(shí)別序列是由4、5、6或7個(gè)核苷酸組成特定核苷酸序列，識(shí)別位點(diǎn)雙重旋轉(zhuǎn)對(duì)稱結(jié)構(gòu)，切割與識(shí)別位點(diǎn)相同或相近。分子量較小，僅需Mg2+作為催化反應(yīng)輔助因子，不需ATP。3、分析影響限制性內(nèi)切酶酶切原因有哪些？（1）溫度：大部分限制性內(nèi)切酶最適反應(yīng)溫度為37℃，少數(shù)酶高于或低于這個(gè)溫度。（2）時(shí)間：適宜，大多為1h，可過夜反應(yīng)。（3）溶液體系：要求有穩(wěn)定pH環(huán)境。標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中含有氯化鈣、氯化鎂或氯化鉀、Tris-HCl、β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇（DTT）以及牛血清蛋白質(zhì)（BSA）和Mg2+，具備一定酸堿值即pH值。（4）鹽離子濃度：不一樣限制性內(nèi)切酶對(duì)鹽離子強(qiáng)度（Na+）有不一樣要求，通常按離子強(qiáng)度不一樣分為低（0mmol/L）、中（50mmol/L）、高鹽（100mmol/L）三類。Mg2+也是限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)所需。（5）反應(yīng)體積和甘油濃度：在進(jìn)行酶切反應(yīng)時(shí)，加酶體積通常不超出總反應(yīng)10%，若加酶體積太大，甘油濃度過高，則會(huì)影響酶切反應(yīng)。（6）DNA純度和結(jié)構(gòu)：DNA樣品中所含蛋白質(zhì)、有機(jī)溶劑及RNA等雜質(zhì)均會(huì)影響酶切反應(yīng)速度和酶切完全度，酶切底物通常是雙鏈DNA，DNA甲基化位置會(huì)影響酶切反應(yīng)。4、一個(gè)經(jīng)典原核表示質(zhì)粒主要元件有哪些？《基因工程》P53能在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制序列即復(fù)制子；控制轉(zhuǎn)錄開啟子如lac、trp等；選擇標(biāo)識(shí)編碼序列如各種抗生素抗性基因；多克隆位點(diǎn)（MCS）；轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，如一個(gè)適宜核糖體結(jié)合位點(diǎn)和起始密碼子ATG等。5、以人工構(gòu)建pBR322質(zhì)粒為例說明基因工程載體特點(diǎn)。有多個(gè)限制性內(nèi)切酶單一位點(diǎn)（EcoRⅠ，HindⅢ等）四環(huán)素抗性基因Tetr和氨芐青霉素抗性基因Ampr，且Tetr中有BamHI（G↓GATCC）切點(diǎn)，Ampr中有PstⅠ切點(diǎn)（CTGCA↓G）和SalI切點(diǎn)（GTCGAC）。能夠經(jīng)過AmprTets來篩選重組體?！迦胧Щ詈Y選原理。在細(xì)胞中是多拷貝，是松弛型復(fù)制子。具備復(fù)制起始點(diǎn)（ori)。分子量較小，安全。6、小批量堿變性提取質(zhì)粒DNA原理與基本過程怎樣？堿變性法是慣用質(zhì)粒抽提方法，其原理是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA變性與復(fù)性差異而達(dá)成分離目標(biāo)。在pH值高達(dá)12.6堿性條件下，染色體DNA氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)完全分離，當(dāng)以pH4.8NaAc高鹽緩沖液去調(diào)整其pH值至中性時(shí)，變性質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來構(gòu)型，保留在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，經(jīng)過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定大分子RNA、蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。小批量堿變性提取質(zhì)粒DNA基本過程為——（1）酶或機(jī)械法等方法破壞細(xì)胞，釋放出胞內(nèi)物質(zhì)；（2）加堿使DNA與蛋白質(zhì)變性，加中和液復(fù)性。因?yàn)橘|(zhì)粒DNA分子量小易復(fù)性，從而使得其與基因組DNA分離；（3）在上清液中經(jīng)過酚－氯仿抽提、去垢劑或酶使剩下蛋白質(zhì)變性或水解，除去蛋白質(zhì)；（4）再加入醇溶液使質(zhì)粒DNA變性沉淀而與其余水溶性物質(zhì)分離；（5）將沉淀溶解于有RNaseTE溶液中，溫育降解RNA后電泳檢測(cè)、-20℃7、什么是基因文庫(kù)？基因組文庫(kù)與cDNA文庫(kù)制備方法有何區(qū)分？經(jīng)過克隆技術(shù)將大分子DNA編碼全部或者絕大多數(shù)基因或基因組進(jìn)行擴(kuò)增后DNA片段混合物，稱為基因文庫(kù)或DNA文庫(kù)、克隆庫(kù)。分為基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)兩種?；蚪MDNA文庫(kù)制備：從生物組織細(xì)胞提取出全部DNA，用物理方法（超聲波、攪拌剪力等）或酶法（限制性核酸內(nèi)切酶不完全酶解）將DNA降解成預(yù)期大小片段，然后將這些片段與適當(dāng)載體（慣用噬菌體、粘?；験AC載體）連接，轉(zhuǎn)入受體細(xì)菌或細(xì)胞，這么每一個(gè)細(xì)胞接收了含有一個(gè)基因組DNA片段與載體連接重組DNA分子，而且能夠繁殖擴(kuò)增，許多細(xì)胞一起組成一個(gè)含有基因組各DNA片段克隆集合體，就是基因組文庫(kù)。cDNA文庫(kù)制備：提取出組織細(xì)胞全部mRNA，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)載體（慣用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，許多細(xì)胞一起組成包含著某細(xì)胞全部mRNA信息cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞cDNA文庫(kù)。8、PCR定義、原理、方法？在生命科學(xué)領(lǐng)域有何詳細(xì)用途？一個(gè)在體外模擬DNA復(fù)制方式選擇性擴(kuò)增DNA特殊區(qū)域技術(shù)，又稱為無細(xì)胞克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法。是在四種脫氧核苷三磷酸（dNTP）存在下，以寡聚核苷酸為引物及單鏈DNA為模板，經(jīng)DNA聚合酶催化合成DNA互補(bǔ)鏈過程。原理與方法:1.高溫變性雙鏈DNA在高溫下解鏈（變性）變成單鏈過程;2.低溫退火降溫后變性單鏈DNA可按照A=T,C三G特異性配正確標(biāo)準(zhǔn)重新結(jié)合恢復(fù)雙鏈結(jié)構(gòu);同模板DNA特異性互補(bǔ)結(jié)合引物結(jié)合3.適溫延伸DNA聚合酶酶促作用,即可沿引物DNA5’向末端合成、延長(zhǎng)與模板互補(bǔ)核苷酸鏈;4.循環(huán)n次。用途：1.特異性擴(kuò)增目標(biāo)（模板）DNA。2.特異性檢測(cè)目標(biāo)RNA（如表示水平）（經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)）3.用于基因重組（擴(kuò)增特定DNA片段）4.制備特異性探針5.用于DNA測(cè)序6.用于基因定位分析7.經(jīng)過誘變寡核苷酸引物產(chǎn)生各種突變體8.用于分析基因組DNA多態(tài)性(RandomAmplifiedPoly-morphicDNA=RAPD)9.構(gòu)建cDNA或基因組DNA文庫(kù)（從mRNA或基因組DNA中）10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR：DNA或RNA絕對(duì)定量分析9、瓊脂糖凝膠電泳分離DNA原理是什么？瓊脂糖是從瓊脂中提取一個(gè)多糖，具親水性，但不帶電荷，是一個(gè)很好電泳支持物。DNA分子在瓊脂糖凝膠中時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。在一定電場(chǎng)強(qiáng)度下,DNA分子遷移速度取決于分子篩效應(yīng)。具備不一樣相對(duì)分子質(zhì)量DNA片段泳動(dòng)速度不一樣，可進(jìn)行分離。相對(duì)分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不一樣DNA分子泳動(dòng)速度不一樣。10、什么是原位雜交技術(shù)？其基本過程怎樣？依照核酸雜交原理，利用基因探針檢出培養(yǎng)板上重組轉(zhuǎn)化體菌落位置技術(shù)。基本過程：（1）將硝酸纖維素濾膜鋪放在生長(zhǎng)著轉(zhuǎn)化菌落平板表面，使其中質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移到濾膜上。（2）取出濾膜，作溶菌、堿變性（0.5mol/LNaOH），酸中和（Tris.ClpH7.4）等處理后，轉(zhuǎn)移到一張干濾紙上，置于室溫20~30min，使濾膜干燥。將濾膜夾在兩張干濾紙之間，在真空烤箱中于80℃烘烤2h，固定DNA。（3）帶有DNA印跡濾膜同32P標(biāo)識(shí)適當(dāng)探針雜交、以檢測(cè)帶有重組質(zhì)粒（含有被研究DNA插入片段）陽性菌落。（4）將放射自顯影X光底片同保留下來原菌落平板對(duì)照，從中挑出陽性菌落供作深入分析研究。11、什么是開啟子?什么是SD序列？開啟子(promoter，P)：是指能被RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并開啟基因轉(zhuǎn)錄一段DNA序列(40bp-60bp)。富含A-T堿基對(duì)，具備保守序列：-10區(qū)（pribnowbox）：TATAAT；-35區(qū)：不一樣開啟子效率不一樣，強(qiáng)開啟子指導(dǎo)產(chǎn)生較多量mRNA，弱開啟子指導(dǎo)下轉(zhuǎn)錄合成mRNA極少。開啟子強(qiáng)度主要決定于開啟子結(jié)構(gòu)。原核生物RNA聚合酶不能識(shí)別真核細(xì)胞開啟子，所以真核基因在原核生物表示時(shí)，應(yīng)將真核基因置于原核生物強(qiáng)開啟子下，以實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)錄。在原核生物中，mRNA起始密碼子AUG上游3-11bp處一段能與16SrRNA3’mRNA分子上有兩個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)，一個(gè)是起始密碼AUG，另一個(gè)是起始密碼AUG上游處一段序列．后者稱為SD序列。12、什么是操縱子？請(qǐng)用簡(jiǎn)圖表示操縱子基本結(jié)構(gòu)并以乳糖操縱子負(fù)調(diào)控系統(tǒng)（阻遏蛋白調(diào)控作用）為例說明其功效。操縱子是原核生物轉(zhuǎn)錄單位。操縱子組成為結(jié)構(gòu)基因連同其上游調(diào)控序列(開啟子promotorP、操縱基因operatorO、其余調(diào)整序列)共同組成一個(gè)操縱子。

無誘導(dǎo)物（乳糖）時(shí)，阻遏物基因I產(chǎn)生阻遏蛋白與操縱基因結(jié)合，位點(diǎn)關(guān)閉，RNA多聚酶通不過，轉(zhuǎn)錄不進(jìn)行，基因關(guān)閉；有誘導(dǎo)物（乳糖）時(shí)，誘導(dǎo)物與阻遏蛋白結(jié)合，阻遏蛋白失活，從o點(diǎn)脫離，o位點(diǎn)打開，RNA多聚酶經(jīng)過，Z、Y、A轉(zhuǎn)錄。即基因表示。13、為何用原核表示系統(tǒng)表示真核生物蛋白質(zhì)時(shí)，克隆真核基因不能來自基因組文庫(kù)？真核基因應(yīng)怎樣取得？對(duì)真核細(xì)胞來說，從基因組DNA文庫(kù)取得基因與從cDNA文庫(kù)取得不一樣，基因組DNA文庫(kù)所含是帶有含子和外顯子基因組基因，而從cDNA文庫(kù)中取得是已經(jīng)過剪接、去除了內(nèi)含子cDNA。因?yàn)樵思?xì)胞不具備mRNA轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，不能進(jìn)行剪接、去除內(nèi)含子等操作，所以用原核表示系統(tǒng)表示真核生物蛋白質(zhì)時(shí)，克隆真核基因不能來自基因組文庫(kù)，應(yīng)從cDNA文庫(kù)中取得，或者經(jīng)過提取mRNA后RT-PCR方法取得。14、怎樣提升真核基因在原核宿主中表示效率？（1）選擇適宜載體，提升翻譯水平強(qiáng)開啟子——提升轉(zhuǎn)錄水平核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ATG-SD）距離適宜在基因重組過程中應(yīng)將結(jié)構(gòu)基因接于SD序列之后．方便為mRNA提供核糖體結(jié)合位點(diǎn)，提升真核基因表示效率。防止產(chǎn)物降解：分泌/融合表示；（融合蛋白表示后再去除原核肽段）（2）選擇適宜宿主(如Lac開啟子——LacI菌；PL/PR——CI857溶源菌)（3）調(diào)整宿主細(xì)胞代謝為保持宿主正常生長(zhǎng)速度及重組轉(zhuǎn)化體穩(wěn)定性，維持產(chǎn)物高效表示，必需采取適當(dāng)方法，調(diào)整細(xì)胞代謝?，F(xiàn)在，調(diào)整細(xì)胞代謝方法很多。如營(yíng)養(yǎng)物濃度控制、產(chǎn)物誘導(dǎo)表示、載體誘導(dǎo)復(fù)制及促進(jìn)產(chǎn)物分泌等。15、什么是基因診療？基因診療中慣用方法有哪些？試簡(jiǎn)述其中一個(gè)方法原理?；蛟\療是指用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)引發(fā)疾病原因——遺傳基因、致病微生物和寄生蟲,以及一些惡性腫瘤在基因水平上進(jìn)行病原學(xué)和細(xì)胞遺傳基因檢測(cè)和分析。基因診療中慣用方法有核酸分子雜交、PCR、DNA芯片技術(shù)、限制酶酶譜分析和DNA序列測(cè)定等。核酸分子雜交是基因診療最基本方法之一。它基本原理是：互補(bǔ)核酸單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈，即能夠進(jìn)行雜交。它不但能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。所以，當(dāng)用一段已知基因核酸序列作探針，與變性后單鏈基因組DNA接觸時(shí)，假如二者堿基完全配對(duì)，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測(cè)基因組DNA中含有已知基因序列。16、名詞解釋：基因探針基因芯片蛋白質(zhì)工程基因探針（probe）：就是一段與目標(biāo)基因DNA互補(bǔ)帶有能檢測(cè)標(biāo)識(shí)物特異核苷酸序列，它能夠包含整個(gè)基因，也能夠僅僅是基因一部分；能夠是DNA本身，也能夠是由之轉(zhuǎn)錄而來RNA?；蛐酒?genechip)：又稱DNA芯片，是指將許多特定寡核苷酸片段或基因片段有規(guī)律地排列固定于支持物上，樣品DNA/RNA經(jīng)過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)識(shí)分子，然后按堿基配對(duì)原理進(jìn)行雜交，再經(jīng)過熒光檢測(cè)系統(tǒng)等對(duì)芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)每一探針上熒光信號(hào)作出比較和檢測(cè)，從而快速得出所要信息。蛋白質(zhì)工程：是指在蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)與功效研究基礎(chǔ)上,借助計(jì)算機(jī)等輔助設(shè)計(jì)來確定某一蛋白質(zhì)分子改造方案。然后經(jīng)過基因改造和基因工程技術(shù)取得新蛋白質(zhì)分子。17、簡(jiǎn)述包含體形成原因和包含體蛋白復(fù)性主要步驟。重組蛋白在細(xì)菌中表示時(shí)，尤其當(dāng)表示目標(biāo)蛋白量超出細(xì)菌體總蛋白量10%時(shí)，會(huì)在細(xì)胞內(nèi)與細(xì)菌雜蛋白、核酸等成份聚集成沒有生物活性直徑0.1-0.3μm固體顆粒，這種不溶性聚合體即包含體（inclusionbody）。生成包含體原因可能有是蛋白質(zhì)合成速度太快，多肽鏈相互纏繞，影響了多肽鏈正確折疊，造成疏水基團(tuán)外露等。（包含體形成有利于預(yù)防蛋白酶對(duì)表示蛋白降解，而且非常有利于分離表示產(chǎn)物。但包含體形成后，表示蛋白不具備生物活性，所以必須溶解包含體并對(duì)表示蛋白進(jìn)行復(fù)性。）包含體復(fù)性即從伸展態(tài)－中間體－后期中間體－天然態(tài)過程，操作步驟通常為用超聲波、勻漿等使菌體破碎后，離心得到包含體－加入強(qiáng)蛋白質(zhì)變性劑如6～8mol／L鹽酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含體－用透析、稀釋和超濾復(fù)性法等等方法使之正確折疊。18、列表比較大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表示系統(tǒng)優(yōu)缺點(diǎn)。以下為某同學(xué)作業(yè)答案，供參考表示系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)大腸桿菌表示系統(tǒng)（1）對(duì)大腸桿菌背景知識(shí)，尤其是基因表示調(diào)控分子機(jī)理有深刻了解；（2）是一個(gè)安全基因工程試驗(yàn)體系，擁有各類適用寄主菌株和不一樣類型載體；（3）許多克隆真核基因都能夠在大腸桿菌細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)有效、高水平表示；（4）大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，易用于批量生產(chǎn)。（1）缺乏轉(zhuǎn)錄后加工機(jī)制，只能表示克隆cDNA,不宜表示真核基因組DNA；（2）缺乏翻譯后加工機(jī)制，許多真核基因蛋白質(zhì)產(chǎn)物，都要經(jīng)過轉(zhuǎn)譯后加工修飾（正確折疊和組裝），而大多數(shù)這類修飾作用在細(xì)菌細(xì)胞中并不存在；（3）表示蛋白質(zhì)常形成不溶性包含體，需作復(fù)性處理；（4）難于表示大量可溶性蛋白。酵母表示系統(tǒng)（1）基因背景了解清楚，上游操作簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)快速，非常適于大規(guī)模發(fā)酵。（2）具備一定加工及修飾能力：如二硫鍵正確形成，前體蛋白水解加工。表示產(chǎn)物與天然蛋白相同或類似。（3）可將異源蛋白基因與N-末端前導(dǎo)肽等信號(hào)肽融合，指導(dǎo)新生肽分泌，在分泌中可對(duì)表示蛋白進(jìn)行糖基化修飾，但其修飾糖鏈與高等真核細(xì)胞并不相同。（4）可移去起始甲硫氨酸，防止了作為藥品使用可能引發(fā)免疫反應(yīng)問題。（1）產(chǎn)糖量過多因而損壞蛋白質(zhì)生物活性、安全性等；（2）糖基化修飾與高等真核細(xì)胞并不相同。

昆蟲細(xì)胞表示系統(tǒng)（1）表示效率高。重組蛋白表示水平最高可達(dá)成細(xì)胞總蛋白50％。（2）屬于真核表示系統(tǒng)。有糖基化作用、脂肪酸?；饔谩被┒艘阴；饔靡约傲姿峄?，有利于表示產(chǎn)物形整天然高級(jí)結(jié)構(gòu)，保持原有生物活性與功效。（3）桿狀病毒能容納較大外源基因而不影響其本身增殖。（4）桿狀病毒屬于昆蟲病毒。具備高度特異宿主范圍，對(duì)脊椎動(dòng)物和植物均無致病性。病毒重組因失去多角體保護(hù)，在自然界生存能力很弱，所以比較安全。（5）應(yīng)用晚期多角體蛋白基因開啟子表示外源基因可表示毒性蛋白。（6）桿狀病毒表示載體通用性廣?？杀硎緛碜圆《?、細(xì)菌、真菌、植物和動(dòng)物幾乎全部蛋白，而且能表示帶有內(nèi)含子外源基因。（7）重組桿狀病毒除在體外昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞表示外源基因外，還能感染昆蟲活體，在體內(nèi)高效表示外源蛋白。（1）宿主細(xì)胞生長(zhǎng)慢、培養(yǎng)基昂貴、含有免疫宿主蛋白、桿狀病毒感染會(huì)造成宿主死亡、所以每一輪蛋白合成均需重新感染。（2）昆蟲細(xì)胞內(nèi)糖基化方式與脊椎動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)糖基化方式有一定差異，其糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)多為簡(jiǎn)單不分支結(jié)構(gòu)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表示系統(tǒng)（1）產(chǎn)物抗原性、免疫原性和功效與天然蛋白質(zhì)最靠近，糖基化等后加工最精準(zhǔn)。（2）通常會(huì)產(chǎn)生正確加工、有活性蛋白。該表示系統(tǒng)表示水平較低、培養(yǎng)基昂貴、生長(zhǎng)遲緩、含有過敏物質(zhì)等缺點(diǎn)在實(shí)際應(yīng)用過程中較難防止。19、利用基因工程菌生產(chǎn)有哪些特點(diǎn)？有什么優(yōu)勢(shì)？慣用宿主菌有哪些？基因工程菌帶有外源基因，這些基因可能不穩(wěn)定。丟失外源基因菌往往比未丟失菌生長(zhǎng)快得多，這么就會(huì)大大降低產(chǎn)物表示。為了抑制基因丟失菌生長(zhǎng)，通常在培養(yǎng)中加入選擇壓力，如抗生素。基因工程菌培養(yǎng)通常分兩段。前期是菌體生長(zhǎng)，生長(zhǎng)到某一階段，加入誘導(dǎo)因子，誘發(fā)產(chǎn)物表示。利用基因工程菌生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量高，表示調(diào)控性好，可依照目標(biāo)產(chǎn)物特點(diǎn)構(gòu)建各種表示系統(tǒng)，等等。慣用宿主菌有大腸桿菌（如BL21(DE3)plysS菌株）、酵母菌（如Pichiapastoris、Saccharomycescerevisiae等）、枯草芽孢桿菌等。20、在基因工程菌培養(yǎng)過程中為何質(zhì)粒會(huì)丟失？（1）分離不穩(wěn)定性：細(xì)胞分裂過程中，有一個(gè)子細(xì)胞