繪制吸收光譜及測(cè)定摩爾吸光系數(shù)

實(shí)驗(yàn)一繪制吸收光譜及測(cè)定摩爾吸光系數(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)紫外吸收光譜的繪制和摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定，掌握Agilent8453UV-Vis的使用方法。學(xué)習(xí)導(dǎo)數(shù)光譜計(jì)算方法及特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)用Agilent8453型分光光度計(jì)繪制氨基酸（苯丙氨酸，色氨酸）的紫外吸收光譜，找出它的吸收峰波長(zhǎng)并計(jì)算摩爾吸光系數(shù)。,'COOHCH?一'NH2NHCH2色氨酸CH[OOH,'COOHCH?一'NH2NHCH2色氨酸CH[OOHNH2苯丙氨酸紫外分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法，波長(zhǎng)范圍為200-400nm的紫外光譜。各種分子都有其特征的吸收光譜，即吸光度與摩爾吸光系數(shù)隨波長(zhǎng)的變化而變化的規(guī)律。吸收光譜的形狀與物質(zhì)的特征有關(guān)，以此進(jìn)行定性分析。為了清楚地描述各種物質(zhì)對(duì)紫外區(qū)域電磁輻射的選擇性吸收的情況，往往需繪制吸收光譜曲線，即吸光度對(duì)波長(zhǎng)的曲線。在吸收光譜曲線上可以找到最大吸收峰波長(zhǎng)。根據(jù)比爾定律：A=sbc式中A—吸光度s—摩爾吸光系數(shù)b—液槽厚度，單位：cmc一摩爾濃度，單位：mol/lA摩爾吸光系數(shù)可按下式計(jì)算：￡=—bcdsA導(dǎo)數(shù)分光光度法：利用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)軟件系統(tǒng)帶有的數(shù)學(xué)處理功能，對(duì)吸收光譜進(jìn)行處理，可以獲得導(dǎo)數(shù)光譜。利用導(dǎo)數(shù)光譜進(jìn)行分光光度測(cè)定，稱為導(dǎo)數(shù)分光光度法。通?？梢垣@得1-4階導(dǎo)數(shù)光譜。在各階導(dǎo)數(shù)光譜中，吸光度對(duì)波長(zhǎng)的微分值與溶液中組分的濃度c保持線性關(guān)系：苻*c。其中s為導(dǎo)數(shù)的階數(shù)。因此，可以利用導(dǎo)數(shù)光譜進(jìn)行定量測(cè)定。dsA導(dǎo)數(shù)光譜可用于放大圖譜間差別，定性分析中分辨重疊譜帶，而且還可以減少定量分析中來(lái)自散射、基體、及其它吸收物的干擾影響。由于導(dǎo)數(shù)光譜靈敏度高，因此對(duì)于試樣純度檢驗(yàn)，多組分混合物的測(cè)定，消除共存雜質(zhì)的干擾和背景吸收，測(cè)定混合式樣都具有特殊的優(yōu)越性。實(shí)驗(yàn)儀器和試劑Agilent8453UV-Vis分光光度計(jì)；移液槍（德國(guó)BRAND公司生產(chǎn)）；50ml容量瓶2支；廢液池（燒杯）一只；氨基酸儲(chǔ)備液：色氨酸0.400g/l，苯丙氨酸2.00g/l;去離子水實(shí)驗(yàn)步驟吸收光譜的測(cè)定（1） 用氨基酸儲(chǔ)備液及去離子水在50ml容量瓶中配置氨基酸溶液，色氨酸濃度為40mg/l,苯丙氨酸800mg/l；（2） 分別取上述溶液，用1cm石英比色皿，以水作參比溶液，在波長(zhǎng)范圍為190nm—400nm間測(cè)定他們的吸收光譜。導(dǎo)數(shù)光譜：應(yīng)用軟件中的Math下的Derivate功能，設(shè)置參數(shù)，分別計(jì)算出兩種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的1階導(dǎo)數(shù)光譜圖。數(shù)據(jù)處理以久為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)作出吸收光譜根據(jù)e=A，先在吸收光譜上找出峰值波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸光度，然后計(jì)算試液的摩爾濃bc度，注意濃度換算。一階導(dǎo)數(shù)光譜的繪制：對(duì)于測(cè)量到的一組波長(zhǎng)等間隔的吸光度值Y，可用窗口移動(dòng)多項(xiàng)式最小二乘擬合求導(dǎo)法獲得對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的導(dǎo)數(shù)值Y*:歐CYij+iY*=仕Nx （1）式中j為數(shù)據(jù)序列中的次序（第j個(gè)點(diǎn)）；C為卷積系數(shù)，為一矢量；N為歸一化因子；2m+1為窗口寬度；^x為變量的間隔(這里為波長(zhǎng))，其上標(biāo)s為導(dǎo)數(shù)的階數(shù)。計(jì)算一階導(dǎo)數(shù)時(shí)(s=1),常用二次多項(xiàng)式進(jìn)行擬合。則卷積系數(shù)C中第i個(gè)元素為：Cj=i,(i=-m,-m+1,…,m-1,m)。而歸一化系數(shù)為N=''2。i--m例如取m=3窗口寬度為7)時(shí)，C=(-3,-2,-1,0,1,2,3),N=2&這樣的參數(shù)代入式(1)計(jì)算所得Y*，即為一階導(dǎo)數(shù)光譜。要求對(duì)測(cè)得光譜計(jì)算一階導(dǎo)數(shù)光譜，并作圖。A/nm圖1.色氨酸和苯丙氨酸的紫外吸收光譜圖如圖1,色氨酸在276nm處有最大吸收峰,A=1.23;苯丙氨酸在258nm處有最大吸收峰,A=0.72。A/nm圖2.色氨酸和苯丙氨酸的一階導(dǎo)數(shù)光譜圖討論與思考比較導(dǎo)數(shù)光譜和吸光度光譜的區(qū)別，說(shuō)明導(dǎo)數(shù)光譜的作用。一階導(dǎo)數(shù)光譜的峰值，對(duì)應(yīng)于原光譜的什么位置？原光譜的峰值所得的一階導(dǎo)數(shù)值為多少？為什么色氨酸的最大吸收波長(zhǎng)比丙氨酸大，且摩爾吸光系數(shù)也大得多？補(bǔ)充實(shí)驗(yàn):測(cè)定苯蒸氣的紫外吸收光譜實(shí)驗(yàn)步驟：取一干燥的1cm石英比色皿，以空氣作參比，在波長(zhǎng)范圍為190nm——300nm間掃空白。加一滴苯在上述比色皿中，快速蓋上蓋子，待1?2min后再測(cè)定它的吸收光譜。討論與思考：請(qǐng)查閱文獻(xiàn)，并指出文獻(xiàn)上所提到的苯的吸收峰的波長(zhǎng)。為什么苯在這個(gè)波長(zhǎng)處有吸收峰的出現(xiàn)，即發(fā)生了什么躍遷?為什么用紫外分光光度計(jì)無(wú)法測(cè)得苯的精細(xì)結(jié)構(gòu)？實(shí)驗(yàn)二.氨基酸的熒光激發(fā)、發(fā)射及同步熒光光譜的測(cè)量實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)熒光分析法的基本原理和LS-55B發(fā)光分析儀的操作。實(shí)驗(yàn)原理熒光是分子從激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)回到原來(lái)基態(tài)時(shí)發(fā)射的光。利用物質(zhì)被光照射后產(chǎn)生的熒光輻射對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性分析和定量分析的方法，稱為熒光分析。在一定光源強(qiáng)度下，若保持激發(fā)波長(zhǎng)W不變，掃描得到的熒光強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)gm的關(guān)系曲線，稱為熒光發(fā)射光譜；反之，保持^em不變，掃描得到的熒光強(qiáng)度與"x的關(guān)系曲線，則稱為熒光激發(fā)光譜。在一定條件下，熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度成正比，這是熒光定量分析的基礎(chǔ)。熒光分析的靈敏度不僅與溶液的濃度有關(guān)，而且與紫外光照射強(qiáng)度及所選測(cè)量波長(zhǎng)等因素有關(guān)。酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Try）、苯丙氨酸（Phe）是天然氨基酸中僅有的能發(fā)射熒光的組分，可以用熒光分析法測(cè)定。它們的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜有互相重疊的現(xiàn)象。同步掃描熒光光譜技術(shù)可以簡(jiǎn)化、窄化光譜，提高選擇性。實(shí)驗(yàn)儀器和試劑LS-55型發(fā)光譜儀；移液槍（德國(guó)BRAND公司生產(chǎn)）；50ml容量瓶2支；廢液池（燒杯）一只；氨基酸儲(chǔ)備液：色氨酸4mg/l，苯丙氨酸100mg/l;去離子水；實(shí)驗(yàn)步驟打開(kāi)電腦和光譜儀主機(jī)，將儀器預(yù)熱20分鐘左右。設(shè)定儀器參數(shù)：全波長(zhǎng)預(yù)掃描參數(shù)，用儲(chǔ)備液在50ml容量瓶中配置溶液，加水定溶后，使得色氨酸濃度為0.1mg/l,苯丙氨酸10mg/l；對(duì)兩種溶液進(jìn)行預(yù)掃描，并記錄掃描結(jié)果。同時(shí)查看其拉曼波長(zhǎng)、瑞利散射波長(zhǎng)、以及雙倍頻峰波長(zhǎng)。從預(yù)掃描得到激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的初步結(jié)果（200-600nm），分別對(duì)兩種氨基酸溶液測(cè)量它們的熒光激發(fā)、發(fā)射和同步熒光光譜。激發(fā)光譜參數(shù)：掃描波長(zhǎng)范圍200-350nm。人em(Phe)=287nm，掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,記錄信息；人em(Try)=357nm,掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=7.5nm,記錄信息。發(fā)射光譜參數(shù)：掃描波長(zhǎng)范圍200-400nm；入ex（Phe）=206nm,掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,記錄信息；入ex（Try）=217nm,掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=7.5nm,記錄信息記住取文件名。同步熒光光譜：掃描波長(zhǎng)范圍200-350nm,△入（人em-、）（Phe）=81nm，掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=15nm，記錄信息；△入（人em-X宓）（Try）=140nm,掃描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=12.5nm。（注意：由于物質(zhì)的熒光性質(zhì)受許多條件的影響，以上實(shí)驗(yàn)參數(shù)僅供參考，具體參數(shù)的選擇視實(shí)際情況而定。）數(shù)據(jù)處理用實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)繪制兩種氨基酸的激發(fā)、發(fā)射、同步光譜圖（如圖3、4）。從激發(fā)和發(fā)射光譜中找出最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)值，以及它們相對(duì)應(yīng)的峰高。在它們的同步熒光光譜中也確定最大波長(zhǎng)和對(duì)應(yīng)的峰高。A/nm圖3.苯丙氨酸熒光譜圖苯丙氨酸掃描激發(fā)波長(zhǎng)在206nm和260nm兩處出現(xiàn)最高峰，本實(shí)驗(yàn)選擇206nm為最大激發(fā)波長(zhǎng)。此外，激發(fā)波長(zhǎng)曲線在280—300nm處出現(xiàn)了一個(gè)十分完美的峰，請(qǐng)注意，此峰為倍頻峰，非激發(fā)波長(zhǎng)峰（由于發(fā)射波長(zhǎng)固定為287nm，因此激發(fā)波長(zhǎng)曲線實(shí)際在200—286nm之間。）A/nm圖4.色氨酸的熒光光譜圖色氨酸掃描激發(fā)波長(zhǎng)在217nm和277nm處有兩個(gè)最大峰，本實(shí)驗(yàn)選擇217nm固定為最大激發(fā)波長(zhǎng)。討論與思考1.對(duì)待測(cè)溶液進(jìn)行預(yù)掃描的有何作用？觀察激發(fā)波長(zhǎng)的整數(shù)倍處熒光發(fā)射光譜在有何特點(diǎn)？該波長(zhǎng)是否適合于進(jìn)行定量分析？同步熒光技術(shù)有哪些優(yōu)點(diǎn)？比較激發(fā)、發(fā)射和同步熒光光譜中的峰值及對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)，比較他們的不同，并解釋原因。通過(guò)兩種氨基酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)，是否可以不經(jīng)試驗(yàn)判斷其熒光強(qiáng)度的大小次序。苯丙氨酸 色氨酸比較紫外分光光度法和熒光分析法的區(qū)別和各自的優(yōu)缺點(diǎn)。注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告以電子版的形式在交作業(yè)專區(qū)跟帖子上傳。也可書面提交。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)放置在網(wǎng)上可自己下載。實(shí)驗(yàn)三紅外吸收光譜的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)紅外吸收光譜的測(cè)定，掌握NicoletFT-IR的使用方法。實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)用NicoletFT-IR測(cè)定有機(jī)物以及高分子的紅外吸收光譜。紅外光譜作為“分子的指紋”廣泛用于分子結(jié)構(gòu)和物質(zhì)化學(xué)組成的研究。根據(jù)分子對(duì)紅外光吸收后得到譜帶頻率的位置、強(qiáng)度、形狀以及吸收譜帶和溫度、聚集狀態(tài)等的關(guān)系便可確定分子的空間構(gòu)型，求出化學(xué)鍵的力常數(shù)、鍵長(zhǎng)和鍵角。從光譜分析的角度看主要是利用特征吸收譜帶的頻率推斷分子中存在某一基團(tuán)或鍵，由特征吸收譜帶頻率的變化推測(cè)臨近的基團(tuán)或鍵，進(jìn)而確定分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)，當(dāng)然也可由特征吸收譜帶強(qiáng)度的改變對(duì)混合物及化合物進(jìn)行定量分析。對(duì)苯二酚的紅外吸收譜圖1如上，可以看到在3500cm-i處有個(gè)大的吸收峰，這是羥基的吸收峰，3000cm-1左右是C-H的吸收峰，1500cm-i是C=C的吸收峰。400035003000150010005002500 2000400035003000150010005002500 2000Wavenumbers（cm-1）圖1對(duì)苯二酚的紅外吸收光譜實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1.NicoletFT-IR傅立葉紅外光譜儀（美國(guó)熱點(diǎn)公司）；壓片機(jī)（美國(guó)熱點(diǎn)公司）；

多功能反射頭（美國(guó)熱點(diǎn)公司）對(duì)苯二酚聚苯乙烯薄膜；自備樣品（塑料）；KBr固體四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容四.空氣中CO2的測(cè)定（1） 實(shí)驗(yàn)步驟：不放樣品的情況下測(cè)試空氣中的紅外吸收譜圖，在不扣除背景的情況下在nm下可以看到CO2的紅外吸收譜圖，在分辨率為4cm-i和1cm-i兩種情況下分別測(cè)試。（2） 分析兩種分辨率下的譜圖的異同。觀察CO2的紅外吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)。圖1圖1一6CO2分子的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)（分辨率=1和4cm-i）鄰苯二酚的測(cè)定（1） 壓片：將少量鄰苯二酚固體加入到KBr粉末中，碾碎并拌勻，用壓片機(jī)壓成薄片。（2） 測(cè)試：將壓好的樣品薄片放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。（3） 譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看是不是自己測(cè)得的物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。聚苯乙烯薄膜的測(cè)定（1）測(cè)試：將聚苯乙烯薄膜放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。（3）譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看是不是自己測(cè)得的物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。自備樣品（塑料）的測(cè)定（1） 紅外吸收譜圖的測(cè)定：測(cè)試：將自備塑料樣品放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看自己測(cè)得的是何種物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。（2） 反射紅外譜圖的測(cè)定：測(cè)試：將自備塑料樣品放置在多功能反射頭上，仔細(xì)小心的旋轉(zhuǎn)壓力，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看自己測(cè)得的是何種物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告以電子版的形式在BBS上跟帖上交。也可書面提交。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)放置在網(wǎng)上可自己下載。實(shí)驗(yàn)二紅外吸收光譜的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)紅外吸收光譜的測(cè)定，掌握NicoletFT-IR的使用方法。實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)用NicoletFT-IR測(cè)定有機(jī)物以及高分子的紅外吸收光譜。紅外光譜作為“分子的指紋”廣泛用于分子結(jié)構(gòu)和物質(zhì)化學(xué)組成的研究。根據(jù)分子對(duì)紅外光吸收后得到譜帶頻率的位置、強(qiáng)度、形狀以及吸收譜帶和溫度、聚集狀態(tài)等的關(guān)系便可確定分子的空間構(gòu)型，求出化學(xué)鍵的力常數(shù)、鍵長(zhǎng)和鍵角。從光譜分析的角度看主要是利用特征吸收譜帶的頻率推斷分子中存在某一基團(tuán)或鍵，由特征吸收譜帶頻率的變化推測(cè)臨近的基團(tuán)或鍵，進(jìn)而確定分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)，當(dāng)然也可由特征吸收譜帶強(qiáng)度的改變對(duì)混合物及化合物進(jìn)行定量分析。對(duì)苯二酚的紅外吸收譜圖1如上，可以看到在3500cm-i處有個(gè)大的吸收峰，這是羥基的吸收峰，3000cm-1左右是C-H的吸收峰，1500cm-i是C=C的吸收峰。400035003000150010005002500 2000400035003000150010005002500 2000Wavenumbers(cm-1)圖1對(duì)苯二酚的紅外吸收光譜實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1.NicoletFT-IR傅立葉紅外光譜儀(美國(guó)熱點(diǎn)公司);2.主意附件：壓片機(jī)；多功能反射頭測(cè)試樣品：對(duì)苯二酚(A.R.)；聚苯乙烯薄膜；自備樣品(塑料)；紅外專用KBr固體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容空氣中CO2的測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟：不放樣品的情況下測(cè)試空氣中的紅外吸收譜圖，在不扣除背景的情況下在nm下可以看到CO2的紅外吸收譜圖，在分辨率為4cm-i和1cm-i兩種情況下分別測(cè)試。分析兩種分辨率下的譜圖的異同。觀察CO2的紅外吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)。圖1一6CO2分子的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)(分辨率=1和4cm-i)鄰苯二酚的測(cè)定壓片：將少量鄰苯二酚固體加入到KBr粉末中，碾碎并拌勻，用壓片機(jī)壓成薄片。測(cè)試：將壓好的樣品薄片放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看是不是自己測(cè)得的物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。聚苯乙烯薄膜的測(cè)定測(cè)試：將聚苯乙烯薄膜放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看是不是自己測(cè)得的物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。自備樣品(塑料)的測(cè)定(1)紅外吸收譜圖的測(cè)定：將自備塑料樣品放置在紅外光譜儀中，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看自己測(cè)得的是何種物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。（2）反射紅外譜圖的測(cè)定：測(cè)試：將自備塑料樣品放置在多功能反射頭上，仔細(xì)小心的旋轉(zhuǎn)壓力，測(cè)定樣品的紅外吸收光譜，需要扣除背景。譜圖解析：將測(cè)得的譜圖在譜圖庫(kù)中查詢比對(duì)，看看自己測(cè)得的是何種物質(zhì)，并記錄匹配度；分析譜圖，將各種官能團(tuán)指出來(lái)。注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告以電子版的形式在BBS上跟帖上交。也可書面提交。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)放置在網(wǎng)上可自己下載。實(shí)驗(yàn)四反相HPLC分析抗生素一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的基本操作方法。2、 了解高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用。二、實(shí)驗(yàn)原理高效液相色譜法是以液體作為流動(dòng)相，借助于高壓輸液泵獲得相對(duì)較高流速的液流以提高分離速度、并采用顆粒極細(xì)的高效固定相制成的色譜柱進(jìn)行分離和分析的一種色譜方法。在高效液相色譜中，若采用非極性固定相，如十八烷基鍵合相，極性流動(dòng)相，即構(gòu)成反相色譜分離系統(tǒng)。反之，則稱為正相色譜分離系統(tǒng)。反相色譜系統(tǒng)所使用的流動(dòng)相成本較低，應(yīng)用也更為廣泛。美羅培南(meropenem)是一種非腸道的注射用的抗生素，對(duì)陽(yáng)性和陰性革蘭氏病原體有抗菌作用(化學(xué)式見(jiàn)圖1)。100°C時(shí)加熱分解，得到開(kāi)環(huán)物。采用反相高效液相色譜法，通過(guò)設(shè)置適宜的色譜條件，可以將原藥與開(kāi)環(huán)物的混合物分離并分析。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有可能會(huì)帶入一些雜質(zhì)，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須清洗柱子。COOH圖1美羅培南的化學(xué)分子式三、儀器與試劑1、 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，50ul微量注射器，PH計(jì)。2、 試劑乙臘（色譜專用），三乙胺（A.R.）,濃磷酸（A.R.）,美羅培南純品。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、 色譜條件色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠（C8）柱溫：室溫流動(dòng)相：0.3%三乙胺（用磷酸調(diào)節(jié)pH=5.0）的水溶液和乙臘（體積比100:7）。也可以簡(jiǎn)化用純水和乙臘（體積比100:7）作流動(dòng)相。檢測(cè)器：DAD。檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm進(jìn)樣體積：20但定量環(huán)，實(shí)際注射每次可控制在50似。2、 流動(dòng)相的配制0.3%三乙胺溶液：取三乙胺3.0ml于2000ml的大燒杯中，加水900ml,加入1：20稀釋的磷酸水溶液約25ml,最后逐滴加入并用PH計(jì)調(diào)節(jié)pH值至5.0,加水稀釋至1000ml。在上述溶液中加入72ml乙臘溶液。用5號(hào)砂芯漏斗過(guò)濾流動(dòng)相，待用。3、 待測(cè)溶液的配制⑴0.5mg/ml美羅培南溶液用分析天平準(zhǔn)確稱取0.05g美羅培南于50ml小燒杯中，用流動(dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容。用針式濾器過(guò)濾后置于樣品瓶中待分析。（2） 開(kāi)環(huán)物溶液取上述美羅培南溶液5ml于試管中，置于沸水浴中加熱20分鐘，自然冷卻。用針式濾器過(guò)濾后置于樣品瓶中待分析。4、 色譜測(cè)定⑴按操作規(guī)程開(kāi)啟電腦，開(kāi)啟脫氣機(jī)、泵、檢測(cè)器等的電源，啟動(dòng)Agilent1100在線工作軟件，設(shè)定操作條件。流量為1.00ml/min。⑵待儀器穩(wěn)定后，開(kāi)始進(jìn)樣。將進(jìn)樣閥柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入儀器進(jìn)樣口，順時(shí)針?lè)较虬鈩?dòng)進(jìn)樣閥至“INJECT”位置，此時(shí)顯示屏顯