時間分辨熒光免疫分析

時間分辨熒光免疫分析第一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六發(fā)展歷程1979年，可標記抗體的Eu3+-β-二酮體-EDTA1983年，建立時間分辨熒光免疫技術，用于測定HCG和磷酸酯酶A“鑭系元素時間分辨熒光分析技術及儀器的配套研究”獲2003年度國家科技進步二等獎第二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六一、時間分辨熒光免疫分析特點第三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六1.熒光衰減時間長鑭系元素熒光衰變時間第四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六常見熒光物質熒光壽命熒光物質熒光壽命Eu3+714μs非特異性熒光背景1-10ns人血清白蛋白4.1ns人球蛋白、血紅蛋白3.0ns細胞色素C3.5nsFITC4.5ns丹磺酰氯14ns苯胺萘磺酸16ns稀土螯合物104-106ns第五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六2.Stokes位移大

熒光物質激發(fā)波長發(fā)射波長Stokes位移Eu-(β-NTA)3340nm613nm273nmSm-(β-NTA)3340nm600nm260nmTb-(PTA)3295nm490/543nm195/248nmDy-(PTA)3295nm573nm278nm第六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六鑭系元素發(fā)射峰窄第七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六優(yōu)點靈敏度高（10-18mol/孔）原子標記多標記技術第八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六二、時間分辨熒光免疫分析體系非均相時間分辨熒光免疫分析均相時間分辨熒光免疫分析第九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六（一）非均相時間分辨熒光免疫分析時間分辨固相免疫分析解離增強熒光免疫分析酶放大免疫分析第十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六1.時間分辨固相免疫分析靈敏度一般不高第十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六實例加拿大CyberFluor的FIAgen系統(tǒng)Eu3+-BCPDA為標記物第十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六2.解離增強分析原理示意圖第十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六（1）雙功能螯合劑EDTA衍生物、DTTA衍生物、DTPA衍生物一端與鑭系離子螯合，一端與抗原/抗體連接近中性時，螯合物足夠穩(wěn)定酸性條件下，鑭系離子迅速、徹底釋放Eu-DTTA應用最廣泛第十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六（2）增強液增強原理圖一般增強百萬倍第十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六β-NTA：Eu(β-NTA)3(TOPO)2復合物TOPO：熒光增強協(xié)同劑TritonX-100：表面活性劑，形成膠束醋酸：酸性介質第十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六（3）酶放大酶催化底物，生成的產物與溶液中鑭系離子、螯合劑生成熒光強、壽命長的三元復合物ALP第十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六酶放大免疫分析示意圖第十八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六雙標記測定AFP和β-hCGβ-NTA作為螯合劑340nm激發(fā)，Eu:615nm,820μs；Sm:643nm,88μs第十九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六（二）均相免疫分析基于時間分辨熒光共振能量轉移無需洗滌、分離、加增強液第二十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六TBP-Eu：Eu3+-二吡啶二胺，最大發(fā)射615nm，供體APC：別藻藍蛋白，最大發(fā)射665nm，受體能量轉移效率最高的供體/受體對第二十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六時間分辨熒光共振能量轉移免疫分析示意圖第二十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六三、時間分辨免疫分析方法夾心法競爭法間接法捕獲法生物素-親和素放大法第二十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六1.夾心法雙抗體夾心法第二十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六雙抗原夾心法第二十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六2.競爭法第二十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六3.間接法間接法測定HCV抗體第二十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六4.捕獲法捕獲法測定抗-CMVIgM第二十八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六5.生物素-親和素法生物素-親和素檢測PAPP-A第二十九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六四、應用1.腫瘤標志物檢測2.傳染病檢測3.糖尿病檢測4.激素檢測5.細胞活性檢測第三十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六1.腫瘤標志物AFP測定：雙抗體夾心法固相包被抗體加入樣品或標準品加入Eu標記抗體加入增強液測定熒光靈敏度：0.17U/ml第三十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期六2.傳染病檢測梅毒螺旋體抗體檢測：雙抗原夾心法強陽性血清和正常人血清分別作為陰陽對照陰性對照、陽性對照和樣品加入板上，孵育加入銪標記抗原，孵育加入增強液，檢測熒光符合中國藥品生物制品鑒定所結