植物脫毒和快速繁殖技術(shù)

植物脫毒和快速繁殖技術(shù)第一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第一節(jié)植物脫毒的原理一熱處理脫毒1.高溫短時(shí)處理法

這種方法是利用病毒與植物耐熱能力的不同，將木苗、接穗或種子等繁殖材料在一定的高溫下處理一段時(shí)間，將其體內(nèi)的病原殺死或鈍化，失去侵染能力，而保持其本身的生活力，從而達(dá)到脫毒的目的。該法尤其適用于類菌原體、類細(xì)菌的脫毒，而對(duì)于類病毒的脫毒效果較差，因?yàn)轭惒《就ǔＳ休^強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。這種處理方法與1921年首先用于甘蔗的脫毒，國(guó)內(nèi)用這種方法處理柑橘，可脫除柑橘材料內(nèi)的黃龍病類細(xì)菌。第四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

2低熱長(zhǎng)時(shí)處理法

低熱長(zhǎng)時(shí)處理一般不能使整株植株脫毒，而只能使個(gè)別器官脫毒，大多是使在熱處理過(guò)程中長(zhǎng)出的莖尖無(wú)病毒。因此，處理的最后步驟是要取新產(chǎn)生的莖尖嫁接到無(wú)毒實(shí)生碊木上或?qū)⑿庐a(chǎn)生的莖尖進(jìn)行扦插繁殖，以獲得脫病毒植株。但對(duì)不同病毒及不同植物種類的脫毒率差異很大。

第五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

二、組織培養(yǎng)脫毒

1.莖尖培養(yǎng)脫毒

Morel等（1952）首先從感染有花葉病毒的大麗花上分離出莖尖分生組織（0.25mm）培養(yǎng)得到植株，嫁接在大麗花實(shí)生砧木上檢驗(yàn)未無(wú)病毒植株。從此，莖尖培養(yǎng)就成為脫去病毒的一個(gè)有效途徑，并相繼在馬鈴薯、菊花、蘭花等莖尖培養(yǎng)脫毒的研究中獲得成功。莖尖培養(yǎng)脫毒可脫除多種病毒、類病毒、類菌原體和類立克次體，很多不能通過(guò)熱處理脫除的病毒可以通過(guò)莖尖培養(yǎng)而脫掉。莖尖培養(yǎng)脫毒直接從莖尖生長(zhǎng)獲得植株，很少有變異，能很好地保持品種的特性。莖尖培養(yǎng)之所以能脫除病毒，是因?yàn)楦腥静《镜闹仓甑挠啄奂拔闯墒斓慕M織和器官中病毒含量較低，生長(zhǎng)點(diǎn)（約0.1~1.5mm區(qū)域）則幾乎不含病毒或含病毒很少。第六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日植物莖尖等分生組織中不含或很少含有病毒的原因：

（1）植物莖尖分生組織中胞間連絲發(fā)育不完全或太細(xì)，使病毒在細(xì)胞之間的擴(kuò)散作用受到抑制。

（2）病毒復(fù)制、運(yùn)輸速度與莖尖細(xì)胞生長(zhǎng)速度不同，病毒向上運(yùn)輸速度慢，而而分生組織細(xì)胞繁殖快，結(jié)果使莖尖區(qū)域部分的細(xì)胞沒(méi)有病毒。

（3）植物生長(zhǎng)點(diǎn)細(xì)胞中缺少病毒增值的感受點(diǎn)，因而復(fù)制過(guò)程不能進(jìn)行。

（4）莖尖等分生組織中存在抑制、鈍化病毒的物質(zhì)

（5）莖尖或其他組織在培養(yǎng)過(guò)程中病毒被鈍化或抑制第十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.莖尖微芽嫁接脫毒

莖尖微芽嫁接脫毒是組織培養(yǎng)與嫁接相結(jié)合，用以獲得無(wú)病毒苗木的一種新技術(shù)。他將0.1~0.3mm的莖尖作為接穗，嫁接到由試管中培養(yǎng)出來(lái)的無(wú)毒實(shí)生砧木上，繼而進(jìn)行試管培養(yǎng)，愈合成為完整植株的脫毒方法。它可消除用熱處理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木質(zhì)陷孔病毒、黃脈病毒等。莖尖微芽嫁接脫毒可以解決一些果樹(shù)莖尖培養(yǎng)成苗難，特別是生根困難的問(wèn)題。有些果樹(shù)種類或品種，如格瑞弗斯蘋果通過(guò)莖尖組織培養(yǎng)，可以獲得無(wú)病毒新梢，但不能生根，只有通過(guò)莖尖微芽嫁接脫毒才能獲得完整植株。第十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.其他外植體的組織培養(yǎng)方法脫毒

除莖尖培養(yǎng)外，還可從花粉、花藥、胚、胚珠及珠心等組織培養(yǎng)獲得無(wú)病毒的植株。這些器官或組織也是植株中含病毒較少的部位，但不同病毒或不同寄主植物使他們帶毒或不帶毒的情況各不相同，采用這些器官脫毒時(shí)，首先應(yīng)弄清楚其帶毒情況。關(guān)于一些植物種胚中不攜帶病毒的原因有兩種觀點(diǎn)：一種觀點(diǎn)認(rèn)為病毒不能進(jìn)入胚中，植物子房中胚與其他母體細(xì)胞之間缺少維管束組織和胞間連絲的關(guān)系；另一種是認(rèn)為病毒能進(jìn)入胚，但進(jìn)入后為寄主所消滅。有這樣一種現(xiàn)象，種子在未成熟時(shí)帶有病毒，到成熟時(shí)，病毒就消失了，這就說(shuō)明，即使沒(méi)有胞間連絲，病毒還可以通過(guò)其他途徑進(jìn)入胚中，但是有些植物的種子中存在著一種抑制病毒的物質(zhì)。此外，還有人認(rèn)為是有些種胚中缺少病毒增值所需要的重要物質(zhì)。而使病毒不能復(fù)制第十三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

對(duì)于一些果樹(shù)植物要獲得與親本一致的無(wú)性系無(wú)病材料，可以從胚囊敗育的子房中在胚囊敗育之前獲取胚珠或珠心組織進(jìn)行培養(yǎng)。

花藥或花粉培養(yǎng)也可以作為一種脫毒方法，這種方法可結(jié)合單倍體育種進(jìn)行，用花藥培養(yǎng)進(jìn)行草莓脫毒，脫毒率可達(dá)100%?；ㄋ幣囵B(yǎng)獲得的無(wú)毒材料多為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的類型。

植物的感染病組織中不是所有細(xì)胞都含有病毒。因此，也有人從感病植株分離原生質(zhì)體、愈傷細(xì)胞或其他細(xì)胞，繼而培養(yǎng)獲得植株，然后通過(guò)鑒定病毒從中選擇無(wú)病的材料第十四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日三、其他脫毒方法1.合并使用熱處理、莖尖培養(yǎng)或微芽嫁接脫毒這種脫毒方法是從經(jīng)熱處理后的新梢頂端切取一段嫩梢，再嫁接到事先準(zhǔn)備好的實(shí)生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的長(zhǎng)度至少要達(dá)到1.0~1.5cm方可。若要使這樣長(zhǎng)的嫩梢無(wú)病毒，對(duì)于蘋果至少須熱處理3~4周，而一些耐熱性弱的品種，在熱處理期間，因高溫傷害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。用莖尖培養(yǎng)脫毒，需要用很小的莖尖才能脫除病毒，通常采用的莖尖大小為0.1~0.2mm，因莖尖太小往往成活率很低。對(duì)于莖尖嫁接也有類似情況，莖尖太小往往不能成活。因此，莖尖培養(yǎng)、莖尖嫁接不僅很難操作，而且一些病毒不能脫去，如單純的莖尖嫁接不能脫除柑橘碎葉病毒。合并使用熱處理、莖尖培養(yǎng)或莖尖嫁接能克服兩種方法各自的缺點(diǎn)。不僅可完全脫除病毒，同時(shí)莖尖成活率也得到提高，由此可大幅度延長(zhǎng)熱處理時(shí)間，增大用于培養(yǎng)的莖尖長(zhǎng)度。目前國(guó)內(nèi)外葡萄、蘋果的脫毒多采用熱處理莖尖培養(yǎng)方法；柑橘則都采用熱處理與莖尖嫁接相結(jié)合的辦法。兩種組合均提高了獲得無(wú)病毒苗木的可能性第十五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.冷處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)

有些作物對(duì)高溫非常敏感，可用冷處理代替熱處理并結(jié)合莖尖培養(yǎng)來(lái)脫毒。如三葉草的脫毒，將準(zhǔn)備切去莖尖的母株在取莖尖之前，放在10℃中經(jīng)過(guò)2~4個(gè)月，以代替熱處理，可以部分去除病毒。這種方法也有人用于從馬鈴薯上消除梭狀塊莖類病毒。第十六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3、化學(xué)處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)

目前尚無(wú)一種抗病毒藥劑能從整株植株消毒病毒，但某些病毒抑制劑或鈍化劑加到組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中卻能消除培養(yǎng)組織中的病毒。Ribavirin（抗病毒醚）是一種對(duì)DNA病毒或RNA病毒具有廣譜作用的人工合成物質(zhì)。Hansen等將其噴布在昆諾阿藜上，然后接種CLSV、SGV等８種病毒，結(jié)果對(duì)CLSV的增值有很強(qiáng)的抑制效果，但對(duì)SGV、桃壞死環(huán)斑病毒、葡萄扇葉病毒、李矮化病毒無(wú)效。在一年生蘋果生長(zhǎng)期間，每隔7天噴布1次5*10-4抗病毒醚溶液，第二年春仍從蘋果苗中檢出了CLSV。若在培養(yǎng)基中加入抗病毒醚進(jìn)行蘋果莖尖培養(yǎng)，可脫除ＣＬＳＶ。山家弘土用含抗病毒醚１２．５、25.0的培養(yǎng)基培養(yǎng)用熱處理、莖尖培養(yǎng)未能脫除SGV的試管苗莖尖，處理時(shí)間為４０、８０、１２０天。在各處理區(qū)增殖的新梢中任選一株，切取頂端部分長(zhǎng)１.５，每隔４０天更換１次新的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，最后繼代到無(wú)藥劑的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，２４０天后檢測(cè)病毒。４０天處理的部分脫除了SGV，而８０、第十七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日１２０天兩個(gè)濃度的處理均全部脫除病毒，對(duì)照則仍１００％帶毒。２５.０對(duì)蘋果莖尖有一定的要害，而１２.５處理無(wú)明顯藥害。據(jù)分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作用于寄主的代謝，從而阻止病毒的增殖，使新梢逐漸脫除病毒。因此，認(rèn)為在果樹(shù)植株生長(zhǎng)期間定期噴布抗病毒醚，有可能在苗木頂端部分?jǐn)U大無(wú)病毒區(qū)域，進(jìn)而可增加莖尖培養(yǎng)的脫毒效率。除抗病毒醚以外，還有報(bào)道證明一些其他藥劑也具有同樣的作用。4、合并使用藥劑

合并使用化學(xué)藥劑和熱處理有助于提高熱處理脫除病毒類病原的效果。

第十八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日５、培育株心苗

大多數(shù)植物病毒不通過(guò)種子傳播，由此可通過(guò)培育株心來(lái)獲得無(wú)病毒母株。例如大多數(shù)柑橘品種產(chǎn)生兩種完全不同的胚，即合子胚和株心胚。合子胚由受精卵細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，常稱有性胚；株心胚由母本株心體細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，常稱無(wú)性胚，株心胚在胚囊中發(fā)育，并與合子胚共存。由于株心胚是由母本體細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，未經(jīng)減數(shù)分裂，因此除個(gè)別體細(xì)胞突變外，株心胚長(zhǎng)出的實(shí)生苗遺傳上與母株完全相同。因此由株心胚獲得的株心苗大多數(shù)病毒被脫除而遺傳特征與母株完全相同。選擇這種類型的株心苗，可應(yīng)用標(biāo)記花粉控制授粉，然后選出典型的實(shí)生苗。例如，枳的花粉可用作標(biāo)記花粉，因?yàn)樗需椎碾s種實(shí)生苗都具有三葉特征，很容易辨認(rèn)和排除。培育株心系以獲得無(wú)病毒苗有以下優(yōu)點(diǎn)：（１）可以肯定植株不帶毒；（２）花時(shí)間少：（３）成本低：（４）方法便于掌握：（５）株心苗長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)。但株心系童期長(zhǎng)，且易出現(xiàn)一些返祖性狀。第十九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第二節(jié)植物脫毒操作技術(shù)一、通過(guò)熱處理消除病毒的操作技術(shù)再莖尖培養(yǎng)法建立以前，熱療法一直是從各種植物的受侵染的個(gè)體得到無(wú)病毒植株的有效方法。熱處理可通過(guò)熱水或熱空氣進(jìn)行。熱水處理對(duì)休眠芽效果較好，熱空氣處理對(duì)活躍生長(zhǎng)的莖尖效果較好，既能消除病毒，又能使寄主植物有較高的存活機(jī)會(huì)。熱空氣處理比較容易進(jìn)行：把旺盛生長(zhǎng)的植物移入到一個(gè)熱療室中，在35~40下處理一定時(shí)間即可，處理時(shí)間的長(zhǎng)短，可由幾分鐘到數(shù)周不等。然而，馬鈴薯病毒X（PVX）則要求在35下處理幾個(gè)月才能得到一些無(wú)病毒莖尖，熱處理之后要立即把莖尖切下來(lái)嫁接到無(wú)病毒的砧木上去。熱處理時(shí)，最初幾天空氣溫度應(yīng)逐步增高，直至達(dá)到要求的溫度為止。若鈍化病毒所需的連續(xù)高溫處理會(huì)傷害寄主組織，則應(yīng)當(dāng)試驗(yàn)高低溫交替的效果。在熱處理期間應(yīng)當(dāng)保持適當(dāng)?shù)臐穸群凸庹?。根?jù)Baker和Kinnaman（1973）的試驗(yàn)，在對(duì)香石竹進(jìn)行脫毒熱處理時(shí)，相對(duì)濕度必須保持在85%~95%之間，準(zhǔn)備接受熱處理的植株必須具有豐富的碳水化合物儲(chǔ)備。為達(dá)到這個(gè)目的，事先應(yīng)對(duì)植物進(jìn)行回縮。Holings(1965)報(bào)道，回縮能夠增加植物忍受熱處理的能力。

第二十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

應(yīng)用熱療法消除病毒的一個(gè)主要限制在于，并非所有的病毒都對(duì)熱處理敏感，例如，在馬鈴薯應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)只能消除卷葉病毒。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于病毒等徑的和線狀的病毒，以及對(duì)于已知是由類菌原體引起的病害，熱處理是有效的。延長(zhǎng)寄主植物的熱處理時(shí)間，也可能會(huì)鈍化植物組織中的抗性因子，因而和對(duì)照相比會(huì)降低處理效果。此外，在熱處理之后只有一小部分植株能夠存活。

與單獨(dú)采用熱療法相比，莖尖培養(yǎng)具有更廣泛的適應(yīng)性。很多不能由單獨(dú)的熱處理消除病毒，可以通過(guò)莖尖培養(yǎng)和熱處理相結(jié)合，或單獨(dú)的莖尖培養(yǎng)而將其消除。

第二十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、通過(guò)莖尖培養(yǎng)消除病毒1、莖尖培養(yǎng)術(shù)語(yǔ)

國(guó)內(nèi)外用來(lái)描述莖尖培養(yǎng)這一技術(shù)的術(shù)語(yǔ)很多，在使用上也比較混亂，其中有尖芽培養(yǎng)、副芽培養(yǎng)、苗端培養(yǎng)、苗尖培養(yǎng)、分生組織培養(yǎng)、頂端培養(yǎng)等。但嚴(yán)格地講，上述這些術(shù)語(yǔ)均不能確切地反映出用于組織培養(yǎng)的外植體的性質(zhì)，因?yàn)閮H僅依靠分生組織的生長(zhǎng)錐、完整的頂芽或副芽，通常是不能培育出植株的。有人曾做過(guò)試驗(yàn)，從菊花上切取的1500個(gè)生長(zhǎng)錐經(jīng)培養(yǎng)，僅有3個(gè)長(zhǎng)成完整的植株，而作者認(rèn)為這3個(gè)生長(zhǎng)錐在切取時(shí)可能帶有一枚葉原基而未被發(fā)現(xiàn)。多數(shù)試驗(yàn)表明，要想獲得成功，外植體就必須包括分生組織的生長(zhǎng)錐及1至數(shù)枚葉原基，因此建議使用一個(gè)折衷的詞即莖尖（或頂端）分生組織培養(yǎng)。在應(yīng)用組織培養(yǎng)方法以獲得無(wú)病原菌植株時(shí)，所用的外植體可以是莖尖，也可以是莖的頂端分生組織。在這里，頂端分生組織是指最幼齡葉原基上方的一部分，最大直徑約為100，最長(zhǎng)長(zhǎng)度為250.莖尖則是由頂端分生組織及下方的1~3個(gè)幼葉原基一起構(gòu)成的。雖然通過(guò)頂端分生培養(yǎng)基消除病毒的機(jī)會(huì)較高，但在大多數(shù)研究中，無(wú)病毒植物都是通過(guò)培養(yǎng)100~1000長(zhǎng)的外植體得到的，即通過(guò)莖尖培養(yǎng)得到。第二十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2、方法

進(jìn)行脫毒時(shí)，大小合乎脫毒需要的理想的外植體實(shí)際上是太小了，很難靠肉眼進(jìn)行制備，因而需要一臺(tái)帶有適當(dāng)光源的解剖鏡（8~40*）。解剖時(shí)必須注意防止由于超凈臺(tái)的氣流和解剖鏡上碘鎢燈散發(fā)的熱而使莖尖變干，因此莖尖暴露的時(shí)間應(yīng)當(dāng)越短越好。使用冷光源燈（熒光燈）或玻璃纖維燈則更為理想，若在一個(gè)襯有無(wú)菌濕濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行解剖，也有助于防止這類小外植體變干。

與其他類型的組織培養(yǎng)一樣，在進(jìn)行莖尖培養(yǎng)時(shí)，首先的一步是獲得表面不帶病原菌的外植體。一般來(lái)說(shuō)，莖尖分生組織由于有彼此重疊的葉原基的嚴(yán)密保護(hù)，只要仔細(xì)解剖，無(wú)須表面消毒就應(yīng)當(dāng)?shù)玫綗o(wú)菌的外植體。如有可能，應(yīng)把供試植株種在無(wú)菌的盆土中，并放在溫室中進(jìn)行栽培。在澆水時(shí)，水要直接澆在土壤上，而不要澆在葉片上。此外，還要給植株定期噴施內(nèi)吸性殺菌劑。Wang和Hu（1980）所用的殺菌劑混合液含有殺真菌藥劑苯菌靈（0.1%）和抗生素鏈霉素（0.1%）。使用這種殺菌劑混合液，對(duì)于田間種植的材料是格外重要的。對(duì)于某些田間植株上直接取來(lái)的枝條污染問(wèn)題小得多。第二十三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

盡管莖尖區(qū)域是高度無(wú)菌的，在切取外植體之前一般仍須對(duì)莖尖進(jìn)行表面消毒。根據(jù)Wang和Hu（1980）的做法，葉片包被緊實(shí)的芽，如菊花、菠蘿、姜和蘭花等，只需在75%乙醇中浸蘸一下，而葉片包被松散的芽，如蒜、麝香石竹和馬鈴薯等，則要用0.1%次氯酸鈉溶液表面消毒10分鐘。這些消毒方法在工作中應(yīng)靈活運(yùn)用，以便適應(yīng)具體的實(shí)驗(yàn)體系。在剖取莖尖時(shí)，要把莖芽置于解剖鏡下，一只手用一把細(xì)鑷子將其按住，另一只手用解剖針將葉原基剝掉。解剖針要常常蘸入90%乙醇，并用火焰灼燒以進(jìn)行消毒。當(dāng)形似一個(gè)閃亮半圓球的頂端分生組織充分暴露出來(lái)之后，用一個(gè)鋒利的長(zhǎng)柄刀片將分生組織切下來(lái)，上面可以帶有葉原基，也可不帶，然后再用同一工具將其接到培養(yǎng)基上。應(yīng)特別注意的是，必須確保所切下來(lái)的莖尖外植體不與芽的較老部分或解剖鏡臺(tái)或持芽的鑷子接觸，尤其是當(dāng)芽未曾進(jìn)行過(guò)表面消毒時(shí)更需如此。第二十四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

莖尖長(zhǎng)出來(lái)的新莖，常常會(huì)在原來(lái)的培養(yǎng)基上生根，如若不能生根，則需另外采取措施。偶然情況下，在培養(yǎng)基中長(zhǎng)出的莖無(wú)論經(jīng)過(guò)怎樣的處理都不生根，如Morel和Martin（1952）在大麗花中就遇到這種情況。在這種情況下，只有把脫毒的莖嫁接到健康的砧木上，就能得到完整的無(wú)毒植株。第二十五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3、在莖尖培養(yǎng)中影響脫毒效果的因素

培養(yǎng)基、外植體大小和培養(yǎng)條件等因子，會(huì)影響離體莖尖再生植株的能力。此外，在培養(yǎng)前或培養(yǎng)期間進(jìn)行的熱處理或化學(xué)處理，也會(huì)顯著影響這一方法的效率。外植體的生理發(fā)育時(shí)期也與莖尖培養(yǎng)的脫毒效果有關(guān)。（1）培養(yǎng)基：通過(guò)正確選擇培養(yǎng)基，可以顯著提高獲得完整植株的成功率。影響培養(yǎng)基主要性質(zhì)的是其營(yíng)養(yǎng)成分、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和物理狀態(tài)（液態(tài)、固態(tài)）。莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒所需的培養(yǎng)基包括多種大量元素和微量元素，現(xiàn)在一般使用的是改進(jìn)的MS培養(yǎng)基。裴榮倍對(duì)傳統(tǒng)的培養(yǎng)基做了大膽的改進(jìn)，減少了微量元素及有機(jī)成分等十幾種試劑，其繁殖的脫毒苗效果與MS完全培養(yǎng)基基本相同。簡(jiǎn)化培養(yǎng)基不僅降低了成本，而且節(jié)省了時(shí)間。第二十六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（2）外植體大?。涸谧钸m合的培養(yǎng)基條件下，外植體的大小可以決定莖尖的存活率。外植體越大，產(chǎn)生的再生植株的概率也就越高。在木薯中，只有200m長(zhǎng)的外植體能夠形成完整的植株，在小的莖尖或是形成愈傷組織，或是只能長(zhǎng)根。小外植體對(duì)莖的生根也不太有利。當(dāng)然，在考慮外植體的存活率時(shí)，應(yīng)該與脫病毒聯(lián)系起來(lái)。理想的外植體應(yīng)小到足以能根除病毒，大到能發(fā)育成一個(gè)完整的植株。

除了外植體的大小之外，葉原基的存在與否也影響分生組織形成植株的能力。大黃離體頂端分生組織必須帶有2—3個(gè)葉原基才能再生成完整植株。Shabde以及smith和Murashign在若干種植物中，雖然證實(shí)了不帶葉原基的離體頂端分生組織有可能進(jìn)行無(wú)限生長(zhǎng)，并發(fā)育成完整的植株，但他們認(rèn)為，葉原基能向分生組織提供生長(zhǎng)和分化所必需的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。在含有必要的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，離體頂端分生組織能在組織重建過(guò)程中迅速形成雙極性軸。根的形成出現(xiàn)于葉原基分化之前，根的發(fā)育是軸向的，而不是縱向的。一旦根莖之間軸建立起來(lái)以后，進(jìn)一步的發(fā)育將于種子苗發(fā)育的方式相同。雖然在理論上講，不帶葉原基的頂端分生組織是可能的外植體，但對(duì)于脫毒實(shí)踐來(lái)說(shuō)，并不可行。正如Murashign所說(shuō)：如果培養(yǎng)基方法得當(dāng)，用較大的莖尖做外植體，其消除病毒的效果不一定比只用分生組織差。第二十七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日(3)培養(yǎng)條件：在莖尖培養(yǎng)中，光照培養(yǎng)的效果通常都比暗培養(yǎng)好。Dale在一年生黑麥草中發(fā)現(xiàn)，光照度6000lx培養(yǎng)的莖尖有59%能再生植株，而暗培養(yǎng)的再生率只有34%。在馬鈴薯中莖尖培養(yǎng)的最適光照度是1000lx，4周后應(yīng)增加到2000lx，當(dāng)莖已長(zhǎng)到1cm高時(shí)，光照度還應(yīng)進(jìn)一步增加到4000lx。在進(jìn)行天竺葵莖尖培養(yǎng)的時(shí)候，需要有一個(gè)完全黑暗的時(shí)期，這可能有助于充分減少多酚物質(zhì)的抑制作用。

關(guān)于在離體莖尖培養(yǎng)中溫度對(duì)植株再生的效應(yīng)，截至目前還未見(jiàn)報(bào)道，培養(yǎng)通常都市在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)室溫度下進(jìn)行。第二十八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（4）外植體的生理狀態(tài)：莖尖最好從活躍生長(zhǎng)的芽上切去。在麝香石竹和菊花中，培養(yǎng)頂芽莖尖比培養(yǎng)腋芽莖尖效果好。但在草莓中沒(méi)有看到這種差別。即使在腋芽比頂芽表現(xiàn)較差的情況下，為了增加脫毒植株的總數(shù)也還是要采用腋芽，這是因?yàn)橐簤簲?shù)目比頂芽多。

取牙的時(shí)間也是一個(gè)影響因子，這對(duì)于表現(xiàn)周期性生長(zhǎng)習(xí)性的樹(shù)木來(lái)說(shuō)更是如此。在溫帶樹(shù)種中，植物的生長(zhǎng)只限于短暫的春季，此后很長(zhǎng)的時(shí)間莖尖處于休眠狀態(tài)，直到低溫或光打破休眠為止。在這種情況下，莖尖培養(yǎng)應(yīng)在春季進(jìn)行，若要在休眠期進(jìn)行，則必須采用某種適當(dāng)?shù)奶幚怼?jù)Boxus和quoirin報(bào)道，李屬植物取芽之前必須把莖保存在4攝氏度下近6個(gè)月。

莖尖培養(yǎng)的效率除取決于外植體的存活率和莖的發(fā)育程度外，還取決于莖的生根能力及其脫毒程序。在麝香石竹中雖然冬季培養(yǎng)的莖尖馬鈴薯品種中，在春季和初夏采集的莖尖比在較晚季節(jié)采集的容易生根。第二十九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日三、通過(guò)愈傷組織培養(yǎng)消除病毒

在由受感染的組織形成的愈傷組織中，并非所有的細(xì)胞都有該種病原菌。受TMV侵染的煙草愈傷組織，用機(jī)械方法將其分離成單個(gè)細(xì)胞后，只有40%帶有這中病毒。由受侵染的愈傷組織能再生出很多不含有TMV的植株，這一事實(shí)也證明了愈傷組織中的某些細(xì)胞實(shí)際上是不含病毒的。在許多其他植物的莖尖愈傷組織中也已經(jīng)再生出無(wú)病毒植株。在受病毒全面侵染的愈傷組織中，某些細(xì)胞之所以不帶有病毒，可能是由于:1、病毒的繁殖速度趕不上細(xì)胞的增值速度；2、有些細(xì)胞通過(guò)突變獲得抗病毒的特性?？共《厩秩镜募?xì)胞甚至可能與敏感型細(xì)胞存在與母體組織中第三十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日四、脫毒效果的檢驗(yàn)

盡管我們?cè)谇腥∏o尖時(shí)十分小心，并且對(duì)他們進(jìn)行了各種有利于消除病毒的處理，也只有一部分外植體能夠產(chǎn)生無(wú)病毒植株。因此，對(duì)于每一個(gè)由莖尖或愈傷組織產(chǎn)生的植株，把他們用作母株以產(chǎn)生無(wú)病毒原種之前，必須針對(duì)特定的病毒進(jìn)行檢驗(yàn)。再通過(guò)培養(yǎng)產(chǎn)生的植物中，很多病毒具有一個(gè)滯后的復(fù)蘇期。因此在頭18個(gè)月必須對(duì)植株進(jìn)行若干次檢驗(yàn)。只有那些始終表現(xiàn)陰性結(jié)果的個(gè)體，才能說(shuō)是已經(jīng)通過(guò)了對(duì)某種或某些特定病毒的檢驗(yàn)，可以在生產(chǎn)上推廣使用。由于經(jīng)過(guò)病毒檢驗(yàn)的植株有可能重新感染，因而在繁殖過(guò)程的各個(gè)階段還必須進(jìn)行重復(fù)檢驗(yàn)。確定在植物組織中是否有病毒存在最簡(jiǎn)單的方法，是檢驗(yàn)葉和莖是否有該種病毒所特有的可見(jiàn)癥狀。不過(guò)，由于可見(jiàn)癥狀可能要經(jīng)過(guò)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間才能在寄主植物上表現(xiàn)出來(lái)，因此需要有更敏感的檢驗(yàn)方法。植物的葉汁轉(zhuǎn)染發(fā)是用于檢驗(yàn)病毒的所有方法中最為敏感的方法。第三十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日進(jìn)行病毒檢驗(yàn)的接種方法具體如下：由受檢植株上取下葉片，置于等容積的緩沖液中，用研缽和研桿將葉片研碎，在指示植物的葉片上撒上少許600目金剛砂，然后用受檢植物的葉汁輕輕涂于其上。適當(dāng)用力摩擦。以使指示植物葉表面受到侵染，但又不要損傷葉片。大約5分鐘后，用水輕輕洗去葉片上的殘余汁液。把接過(guò)種的指示植物放在氣閉溫室或防蛀罩內(nèi)，株間以及與其他植物間都要隔開(kāi)一定距離。一般需要6-8天或幾周，指示植物即可表現(xiàn)癥狀。植物檢驗(yàn)是否存在病毒的其他方法，還有血清測(cè)驗(yàn)法和電鏡觀察法。應(yīng)用這兩種方法能很快獲得結(jié)果，但需要專門的技術(shù)和比較昂貴的設(shè)施。血清法和電鏡法通常都要與汁液感染發(fā)同時(shí)使用，而不是完全取代汁液感染法。但對(duì)不表現(xiàn)可見(jiàn)癥狀的潛伏病毒來(lái)說(shuō)，血清法和電鏡法時(shí)必須的選擇。

第三十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

近幾年來(lái)發(fā)展起來(lái)的PCR技術(shù)為快速可靠的檢測(cè)病毒提供了行之有效的手段。對(duì)那些已知其核苷酸序列的病毒，可以人為的合成特異引物，通過(guò)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)快速檢測(cè)病毒存在與否。有關(guān)PCR的具體做法詳見(jiàn)本書其他章節(jié)。但是，對(duì)那些尚未掌握其堿基序列的病毒還的采用前述的其他方法進(jìn)行檢測(cè)。五，無(wú)毒原種的保存與繁殖、利用無(wú)毒植株并不具有額外的抗病性，他們有可能很快又被重新感染。為了解決這個(gè)問(wèn)題，應(yīng)將無(wú)毒原種種在溫室或防蟲(chóng)罩內(nèi)滅過(guò)菌的土壤中。在大規(guī)模繁殖這些植物的時(shí)候，應(yīng)把他們種在田間隔離區(qū)內(nèi)，使植物在該區(qū)域很少或完全沒(méi)有感染的機(jī)會(huì)。另外一種更容易也是更經(jīng)濟(jì)的方法，是把由莖尖得到的并已經(jīng)過(guò)脫毒檢驗(yàn)的植物通過(guò)離體培養(yǎng)進(jìn)行繁殖和保存。第三十三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日

第三十四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第三十五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第三十六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第三十七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日六、通過(guò)莖尖培養(yǎng)消除病毒的注意事項(xiàng)要想得到和繁殖一個(gè)品種的脫毒植株，首先必須了解有關(guān)該種植株的一些背景知識(shí)，特別是可能周身侵染該種植物的病原菌以及這種植物的繁殖方法等。然后應(yīng)當(dāng)檢查實(shí)驗(yàn)植物是否攜帶所疑有的病原菌，并確定莖尖外植體的適當(dāng)大小，確定生長(zhǎng)最快并能最大限度消除病毒的培養(yǎng)條件。最后要反復(fù)檢查莖尖產(chǎn)生的植株是否還帶著疑有的病原，并在杜絕任何可能再侵染的條件下，繁殖那些確已脫毒的植株。第三十八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第三節(jié)植物離體快速繁殖一．離體快速繁殖的概念與研究進(jìn)展離體快速繁殖是指在無(wú)菌條件下，利用植物體的一部分在人工控制的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件下進(jìn)行植物繁殖的一種方法，由于其繁殖速率快，稱之為“快（速）繁（殖）”或“擴(kuò)繁”，又由于其所用材料細(xì)小，稱之為“微（型）繁（殖）”。實(shí)際上是一種特殊的營(yíng)養(yǎng)繁殖方法，是植物扦插繁殖方法的擴(kuò)展和延伸。所不同的是扦插繁殖系數(shù)低，只能得到1個(gè)從母體上發(fā)根的完整植株；而離體快繁只要建立起組織培養(yǎng)快速繁殖體系，材料將按幾何級(jí)數(shù)增殖，增殖系數(shù)因植物種類有差異，多在5-10之間，而且由于組織培養(yǎng)環(huán)境幾乎恒定，因此可進(jìn)行周年生產(chǎn)，一般1年內(nèi)由6個(gè)左右的增殖周期。加之組織培養(yǎng)環(huán)境，養(yǎng)分等繁殖條件差異較小，苗木生長(zhǎng)具有較好的一致性，繁殖苗木還具有較好的商品性。第三十九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日植物快繁的器官形成方式1、不定芽型2、器官型3、器官發(fā)生型4、類胚體發(fā)生型5、原球莖發(fā)生型第四十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日1、不定芽型不定芽型：誘導(dǎo)頂端分生組織產(chǎn)生不定芽，再生成植株的方式特點(diǎn)：以芽繁芽，繁殖速度快：后代遺傳性比較穩(wěn)定第四十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2、器官型器官型：從器官外植體誘導(dǎo)不定芽，再生出植株的方式。特點(diǎn)：直接從器官上誘導(dǎo)不定芽，遺傳性比較穩(wěn)定，但繁殖速度慢第四十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3、器官發(fā)生型器官發(fā)生型：從器官外植體誘導(dǎo)愈傷組織，經(jīng)愈傷組織細(xì)胞的分化再生成植株的方式。特點(diǎn)：繁殖速度快，由于經(jīng)過(guò)愈傷組織而再生成植株，遺傳性不穩(wěn)定第四十三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4、類胚體發(fā)生型類胚體發(fā)生型：由植物細(xì)胞，組織或器官直接誘導(dǎo)發(fā)生胚狀體結(jié)構(gòu)，最終發(fā)育成苗的方式特點(diǎn)：遺傳性穩(wěn)定，但繁殖數(shù)量不如不定芽和器官發(fā)生型多。第四十四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日5、原球莖型原球莖型：種子消毒后，在培養(yǎng)基上播種，經(jīng)一段時(shí)間培養(yǎng)而發(fā)生原球莖（帶芽），然后由原球莖直接長(zhǎng)成植株。蘭屬特有的器官發(fā)生方式。第四十五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日蘭花的萌發(fā)第四十六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日蘭花的啟動(dòng)第四十七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日蘭花的增殖第四十八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日蘭花的分化第四十九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日培養(yǎng)的蘭花第五十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第五十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第五十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、離體快速繁殖商業(yè)性生產(chǎn)的范圍及應(yīng)用通過(guò)離體快速繁殖能生產(chǎn)種苗的植物種類很多，但大部分植物因一些關(guān)鍵技術(shù)尚未突破，繁殖系數(shù)較低、成本過(guò)高以及市場(chǎng)需求不大等而未能進(jìn)行規(guī)模化和商業(yè)化生產(chǎn)。目前離體快速繁殖在生產(chǎn)中的應(yīng)用主要有以下幾個(gè)方面：（1）用于稀缺或急需良種植物的繁殖。一些新選育或新引進(jìn)的良種由于生產(chǎn)上需求的苗木多而急，用常規(guī)繁殖速度慢，短時(shí)間內(nèi)無(wú)法滿足，因此多嘗試用離體快速繁殖方法來(lái)解決。這方面已有火炬松、香蕉、桉樹(shù)、楊樹(shù)、棗樹(shù)、葡萄、山葡萄、杜鵑、櫻桃、除蟲(chóng)菊、非洲菊、月季、蘋果、甘蔗、馬鈴薯、枸杞、木薯、甘薯、香石竹、大丁草、苧麻及其他果樹(shù)及砧木等植物的相關(guān)報(bào)道。我國(guó)采用離體快速繁殖技術(shù)解決生產(chǎn)問(wèn)題取得了較大的成功。如廣西建立了我國(guó)第一個(gè)年產(chǎn)甘蔗試管苗300萬(wàn)株的工廠，使原需要10年才能擴(kuò)大繁殖用于生產(chǎn)的良種縮短為2年。第五十三頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（2）用于莖尖脫毒及無(wú)病毒苗木試管快速繁殖。利用莖尖培養(yǎng)或熱處理后再培養(yǎng)，經(jīng)檢測(cè)無(wú)病毒后再用試管加快繁殖，可獲得大量無(wú)病毒苗木。這是消除植物病毒病最有效的方法，也是試管繁殖用于生產(chǎn)最有成效的又一個(gè)方面。在國(guó)外，40%~80%草莓是通過(guò)試管脫毒后繁殖的。我國(guó)每年生產(chǎn)各類脫毒試管苗達(dá)1000萬(wàn)株，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益都十分顯著。

（3）用于自然界無(wú)法用種子繁殖或難以保持后代一致的三倍體、單倍體及基因工程植株的快速繁殖。如超雄性石刁柏是我試管繁殖。

（4）瀕臨植物的拯救。一些珍稀植物或?yàn)l臨、瀕危滅絕植物，數(shù)量極少，若不加以保護(hù)及擴(kuò)大繁殖，就有絕滅的可能。通過(guò)試管保存及擴(kuò)大繁殖，則可以避免滅絕。例如，成都生物研究所成功地運(yùn)用試管繁殖珍稀植物猀欏，現(xiàn)已在峨眉山建立起人工猀欏林；第五十四頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（5）用于種質(zhì)的試管保存及交換。利用試管保存植物種質(zhì)資源，具有體積小、保存數(shù)量多、條件可控制、避免病蟲(chóng)害再度污染、節(jié)省人力和土地以及便于國(guó)家和地區(qū)間的轉(zhuǎn)移和交換等特點(diǎn)。近10多年來(lái)，該項(xiàng)技術(shù)有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，可用低溫和超低溫方法保存種質(zhì)。這是一條經(jīng)濟(jì)而有效的途徑。特別是對(duì)于一些無(wú)性繁殖的植物和脫毒品種，市場(chǎng)一旦需要即可大量繁殖。德國(guó)許多植物組織培養(yǎng)室成為種質(zhì)保存和繁育中心。國(guó)際馬鈴薯中心專門負(fù)責(zé)馬鈴薯種質(zhì)的試管保持及國(guó)際交換。

第五十五頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日三、離體快速繁殖體系的建立1、無(wú)菌培養(yǎng)系的建立任何植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)體系的建立，都必須選用適宜的外植體。所謂外植體，就是第一次接種用的植物材料。雖然幾乎任何植物組織或器官均可作外植體，但具體采用何種組織或器官因培養(yǎng)體系的目的和接種的植物種類的不同而有所不同。通常木本植物、較大的草本植物以莖段比較適宜，能在培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下萌發(fā)出側(cè)芽，成為進(jìn)一步繁殖的材料。一些草本植物比較容易繁殖，或本身短小或缺乏顯著的莖，也可采用葉片、葉柄、花萼、花瓣等作為外植體。外植體選擇好后，到田間或盆栽植物中選取潔凈、無(wú)病蟲(chóng)害的植株，剪去比較幼嫩部分、生長(zhǎng)能力較強(qiáng)的部位。樣品采得后，保持其新鮮，迅速帶回，在流水中沖洗1—2個(gè)小時(shí)，然后在超凈操作臺(tái)上用0.5%的升汞或其他表面消毒劑消毒，用無(wú)菌水沖洗3—4遍后，接種于滅菌的培養(yǎng)基上。如果外植體污染率小或沒(méi)有污染，獲得了無(wú)菌材料，并繼代培養(yǎng)，能連續(xù)生長(zhǎng)繁殖下去，那么無(wú)菌培養(yǎng)系就已經(jīng)建立。第五十六頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2、誘導(dǎo)外植體生長(zhǎng)與分化

（1）頂芽和腋芽的發(fā)育：頂芽和腋芽在離體培養(yǎng)中都可被誘導(dǎo)而發(fā)育。單個(gè)芽可萌生出單一的小苗或多個(gè)小苗。在一些園藝品種中，有些獨(dú)特的性狀是由病毒硬氣的引起的，這些病毒對(duì)寄主植物的健康并無(wú)強(qiáng)烈的影響，但如果采取莖尖培養(yǎng)就可能脫除病毒或減低其濃度，使具有觀賞價(jià)值的性狀丟失。

第五十七頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（2）不定芽的發(fā)育：這一植株再生方式由White于1943年在培養(yǎng)煙草愈傷組織時(shí)發(fā)現(xiàn)。不定芽的發(fā)生有一個(gè)從外植體上產(chǎn)生愈傷組織的階段，這一階段的長(zhǎng)短和愈傷組織生長(zhǎng)的程度，在不同植物種類和培養(yǎng)條件而有極大地差異。有的愈傷組織生長(zhǎng)極為旺盛，使外植體失去原有輪廓，以后芽就從新形成的愈傷組織分化出來(lái)。而另一種情況，植物可能僅僅生長(zhǎng)一點(diǎn)愈傷組織或幾乎不生長(zhǎng)愈傷組織，不定芽就從外植體表面受傷的或沒(méi)有受傷的部位直接分化出來(lái)，如球根秋海棠、非洲紫羅蘭、百合、等。從觀賞園藝育苗的要求來(lái)說(shuō)，應(yīng)盡快出苗，減少愈傷組織發(fā)生，以免在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞分裂不正常，失去觀賞價(jià)值或失去再生成苗的能力等。

植物的許多器官都可以作為誘導(dǎo)不定芽產(chǎn)生的外植體，如莖段、葉、葉柄、根、花莖、萼片、花瓣等。第五十八頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（3）細(xì)胞胚胎狀體的發(fā)生與發(fā)育：體細(xì)胞的發(fā)育途徑類似，但不同于合子胚，它通過(guò)球形、心形、魚(yú)雷形和子葉形的胚胎時(shí)期，最后發(fā)育成完整的小植株。

通過(guò)體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生途徑，進(jìn)行無(wú)性系的大量繁殖具有極大地潛力，其特點(diǎn)是：成苗數(shù)量多、速度快、結(jié)構(gòu)完整。若干種高等植物的胚狀體成苗途徑已作了形態(tài)發(fā)生學(xué)上的證明，目前，包括裸子植、雙子葉、單子葉植物中的許多科的代表植物，如五針?biāo)伞⑻K鐵、胡蘿卜、金魚(yú)草、山茶、百合、一品紅、花葉芋等都有體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生。

第五十九頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日（4）原球莖的發(fā)育：在蘭科等植物的組織培養(yǎng)中，常從莖尖或側(cè)芽的培養(yǎng)中產(chǎn)生一些原球莖，原球莖本身可以增殖，以后能萌發(fā)出小植株。原球莖最初是蘭花的種子發(fā)芽過(guò)程中的一種形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。種子萌發(fā)初期并不出現(xiàn)胚根，只是胚逐漸膨大，以后種皮的一端破裂，膨大的胚呈小圓錐狀，稱作原球莖。因此，原球莖可理解為縮短的，呈珠粒狀的，由胚性細(xì)胞組成的類似嫩莖的器官。從頂芽和側(cè)芽的培養(yǎng)中產(chǎn)生的和種子萌發(fā)產(chǎn)生的都是這樣的原球莖。從一個(gè)芽的周圍能產(chǎn)生幾個(gè)到幾十個(gè)原球莖，培養(yǎng)一段時(shí)間以后，原球莖逐漸轉(zhuǎn)綠，長(zhǎng)出毛狀假根，葉原基發(fā)育成幼葉，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)生根，形成完整的再生植株。第六十頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.促進(jìn)中間繁殖體的增殖誘導(dǎo)外植體分化獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等，數(shù)量還不多，也難以直接種植到栽培介質(zhì)中去，這些培養(yǎng)材料可統(tǒng)稱中間繁殖體，需要對(duì)其進(jìn)一步培養(yǎng)增殖，才能發(fā)揮快速繁殖的優(yōu)勢(shì)。第六十一頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.壯苗與生根

材料增殖到一定數(shù)量后，就可使部分培養(yǎng)物進(jìn)入壯苗與生根階段。若不能及時(shí)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，小苗就會(huì)老化，或因過(guò)分擁擠而使無(wú)效苗增多。生根壯苗培養(yǎng)基多采用1/2或1/4的MS培養(yǎng)基，添加適量的生長(zhǎng)素，一般2~4周即可生根。第六十二頁(yè)，共八十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日5.試管苗移栽與管護(hù)