(9)-2.6 月季的花藥培養(yǎng)

月季的花藥培養(yǎng)掌握花藥培養(yǎng)的形成植株的途徑掌握花藥取材的要求掌握單核期鏡檢的方法掌握月季花藥培養(yǎng)的流程和技術(shù)要點學(xué)習(xí)目標(biāo)月季花被稱為花中皇后，又稱“月月紅”，是常綠、半常綠低矮灌木，四季開花，一般為紅色，或粉色、偶有白色和黃色，可作為觀賞植物，也可作為藥用植物，亦稱月季。植物組織培養(yǎng)1964年，印度科學(xué)家在培養(yǎng)毛葉曼陀羅的花藥時，首次獲得了由花藥中的花粉粒發(fā)育而來的單倍體植株。這個實驗說明生殖細(xì)胞和體細(xì)胞一樣，在離體條件下也具有發(fā)育成完整植株的潛能。據(jù)記載，世界上已有250多種高等植物的花藥培養(yǎng)獲得成功，其中小麥、玉米，大豆、甘蔗和橡膠等近50種植物的花粉再生植株已由我國科技人員首先培育成功。植物組織培養(yǎng)被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分。雄蕊由花絲和花藥組成。一、花藥培養(yǎng)花藥為囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉。花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞，經(jīng)歷四分體時期、單核期、雙核期三個時期。一、花藥培養(yǎng)花藥通過兩種途徑形成植株。一種途徑是愈傷組織途徑。花藥中的花粉通過脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成叢生芽，叢生芽通過誘導(dǎo)生根，馴化移栽獲得完整植株。一、花藥培養(yǎng)另一種途徑是胚狀體途徑。花藥中的花粉脫分化形成胚狀體，胚狀體再分化形成叢生芽，經(jīng)過誘導(dǎo)生根，馴化移栽后獲得完整植株。一、花藥培養(yǎng)1、取材花期早期時的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。選擇合適的花粉發(fā)育時期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高。為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。一、花藥培養(yǎng)單核期花藥一、花藥培養(yǎng)醋酸洋紅法。醋酸洋紅染色機(jī)理，將體積分?jǐn)?shù)45％的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50℃，過濾即可獲得醋酸洋紅染色液。醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色。一、花藥培養(yǎng)將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1％的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。一、花藥培養(yǎng)焙花青-鉻礬法。花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青—鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。一、花藥培養(yǎng)預(yù)處理。最常用的方法是低溫冷藏。具體做法是將花蕾用濕紗布包裹后再用塑料袋套起，放在冰箱中冷藏。用冷處理可以增加誘導(dǎo)頻率，其原因是：冷處理抑制紡錘體的形成，冷處理不能誘導(dǎo)花藥的發(fā)育，但它有助于培養(yǎng)花粉的存活。并且阻止配子體分化，導(dǎo)致較高頻率的花粉發(fā)育。冷處理的作用是間接的，因此不是離體花藥成功培養(yǎng)的先決條件。一、花藥培養(yǎng)2、材料的消毒?；ɡ儆肰/V為70%的酒精浸泡30秒，無菌水清洗，無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液），無菌水沖洗3～5次。一、花藥培養(yǎng)3、接種和培養(yǎng)。（1）剝?nèi)』ㄋ?。注意：勿損傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織；要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。一、花藥培養(yǎng)（2）接種。剝?nèi)セㄋ幒罅⒓磳⒒ㄋ幗臃N于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。接種完畢后進(jìn)行花藥的培養(yǎng)。一、花藥培養(yǎng)（3）培養(yǎng)。培養(yǎng)條件條件：溫度25℃左右，不需要光照?；ㄋ庨_裂，長出愈傷組織，及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基中?；ㄋ庨_裂，釋放出胚狀體，產(chǎn)生大量幼小植株，將幼小植株分開，分別轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中。經(jīng)過增殖和生根，即獲得完整植株。在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化，主要原因是由于花粉管核和生殖核融合，因此需要鑒定和篩選。一、花藥培養(yǎng)4、馴化移栽。當(dāng)試管苗長出3片以上真葉，并有發(fā)達(dá)根系時，將其從試管中移出，洗掉瓊脂，去老根黃葉，浸泡中清水中煉苗3～5天，當(dāng)有新生根葉長出時，即可移入土壤中，白天保持在25度，晚上不低于15度，相對濕度85%以上。一、花藥培養(yǎng)項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加倍。