第十一章動物細胞培養(yǎng)生物制藥演示文稿

第十一章動物細胞培養(yǎng)生物制藥演示文稿當前第1頁\共有52頁\編于星期五\23點優(yōu)選第十一章動物細胞培養(yǎng)生物制藥當前第2頁\共有52頁\編于星期五\23點1、成纖維細胞型細胞細胞大致呈梭形或不規(guī)則形。成群細胞呈現放射狀、旋渦狀等形式。多數細胞之間排列疏散，有較大的細胞間隙。成纖維細胞存在于肌肉、皮膚和骨骼中，代表有心肌細胞，血管內皮細胞等。當前第3頁\共有52頁\編于星期五\23點2、上皮型細胞細胞特點是：扁平狀，形態(tài)較為規(guī)則，細胞貼壁后呈三角形及不規(guī)則扁平的多角形，中央有扁圓形核，生長時彼此緊密連接成單層細胞。因為相互擁擠而呈現“鋪路石狀。代表有皮膚的表皮細胞、消化管與呼吸道的上皮細胞、肺泡上皮細胞、消化腺上皮細胞、血管內皮細胞等。當前第4頁\共有52頁\編于星期五\23點3、游走型細胞細胞特點是：呈散在生長，一般不連成片，胞質常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細胞相區(qū)別。代表有神經膠質細胞。當前第5頁\共有52頁\編于星期五\23點4、多形型細胞多形型細胞是一些形態(tài)上不規(guī)則的細胞。多形型細胞不常見，只有某些像神經組織細胞等難以確定其穩(wěn)定形態(tài)的，才可歸于多形細胞。體外培養(yǎng)呈現多形型細胞的細胞最常見的是神經原細胞。當前第6頁\共有52頁\編于星期五\23點接觸抑制與密度抑制接觸性抑制(Contactinhibition)是某些動物細胞體外培養(yǎng)的生長特性之一。是指由于細胞相互接觸而抑制細胞運動性的現象由于這個特性，正常細胞并不會相互重疊，而是呈單層細胞生長。密度抑制(Densityinhibition)細胞接觸匯合成片后，只要營養(yǎng)充分，細胞仍能進行增殖分裂。但是當細胞密度達到一定程度后，營養(yǎng)相對缺乏，代謝產物增多，發(fā)生密度抑制現象當前第7頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)的條件1、嚴格的無菌技術:細菌\真菌\支原體\病毒\交叉污染2、培養(yǎng)基對于營養(yǎng)要求非?？量蹋被?、維生素、碳水化合物、無機鹽、輔酶、激素、生長因子等。包括：天然、合成、無血清培養(yǎng)基三種。（1）天然培養(yǎng)基動物血清（胎牛血清、小牛血清）、組織提取液、雞胚胎汁等。優(yōu)點：營養(yǎng)價值高缺點：成分復雜、來源有限、成本較高當前第8頁\共有52頁\編于星期五\23點血清的生物功能1、提供基本營養(yǎng)：氨基酸、微生物、無機鹽、脂類、核酸等2、提供激素及各種生長因子：胰島素、腎上腺素、類固醇、成纖維細胞生長因子、表皮生長因子等3、提供結合蛋白：結合蛋白可以攜帶重要的低分子量物質，如白蛋白攜帶微生物、脂肪和激素，轉鐵蛋白攜帶鐵等4、提供保護作用：如通過促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷，如血清蛋白可以增加培養(yǎng)基的黏度，保護細胞免受機械損傷，此外血清還提供一些微量元素和離子，防止細胞代謝中毒，如銫和硒等。當前第9頁\共有52頁\編于星期五\23點（2）合成培養(yǎng)基優(yōu)點：成分已知，便于對實驗條件進行控制。缺點：無法替代一些未知成分。解決途徑：合成培養(yǎng)基中添加小牛血清，彼此互補。意味著合成培養(yǎng)基都是無血清培養(yǎng)基。目前常用的合成培養(yǎng)基：MEM、DMEM、RPMI1640、F12、M199等.MEM培養(yǎng)基：厄爾利（Earle）于1951年開發(fā)成功。含有少量氨基酸、維生素、谷氨酰胺以及必須的無機鹽，組成簡單。DMEM培養(yǎng)基：由杜爾貝科（Dulbecco）等在MEM培養(yǎng)基基礎上研制而成，增加了各已有成分的含量，同時又根據葡萄糖高低分為高糖型（4,500mg/L）和低糖型（1,000mg/L）。當前第10頁\共有52頁\編于星期五\23點（3）無血清培養(yǎng)基血清培養(yǎng)基的優(yōu)點：含有豐富的利于細胞生長的成分血清培養(yǎng)基缺點：（1）動物血清來源有限，價格高，不宜大量使用。（2）動物血清成分復雜且成分不穩(wěn)定，使生長過程不易檢測控制。（3）雖然血清對細胞生長有效，但會對后期培養(yǎng)產物的分離、提純以及檢測造成一定困難。無血清培養(yǎng)基(Serumfreemedium,SFM)是不含血清的動物細胞培養(yǎng)基，由基礎培養(yǎng)基和添加組分組成?；A培養(yǎng)基較常用的是DMEM、F12培養(yǎng)基。添加組分主要包括：細胞外基質、生長因子、結合蛋白與轉運蛋白、酶抑制劑等。當前第11頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)的條件3、其他溶液（1）平衡鹽溶液（Balancedsaltsolution，BSS）主要由無機鹽組成，具有維持細胞滲透壓、調控培養(yǎng)液酸、堿度平衡的功能。例如：Hanks液，注：酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。（2）培養(yǎng)基pH調整液大部分合成培養(yǎng)液都呈微酸性。常用pH調整液有：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES液等。HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH7.2-7.4范圍內具有較好的緩沖能力。中文名：4-羥乙基哌嗪乙硫磺酸。當前第12頁\共有52頁\編于星期五\23點（3）細胞消化液從組織塊消化分散得到單個細胞傳代培養(yǎng)時分散細胞代表：胰蛋白酶溶液，水解細胞間的蛋白質，加血清終止反應。乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）消化液：解離細胞,兩者常結合使用，增加效果。（4）抗生素溶液防止微生物污染。常用抗生素有青霉素、鏈霉素、卡那霉素、制霉菌素等。當前第13頁\共有52頁\編于星期五\23點當前第14頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)的條件4、培養(yǎng)條件影響動物細胞體外生長的因素包括生物因素、化學因素、物理因素。生長條件的控制主要包括溫度、pH、滲透壓、氣體等。溫度：人類和哺乳類動物細胞培養(yǎng)適宜溫度為36.5±5℃。pH：哺乳動物細胞的培養(yǎng)pH值范圍為。滲透壓：細胞在高滲透壓或低滲透壓溶液中會發(fā)生皺縮或腫脹，甚至破裂。BSS溶液。氣體：細胞的生長代謝離不開氣體，主要包括O2和CO2，二氧化碳培養(yǎng)箱很重要。當前第15頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)的條件5、培養(yǎng)工具1923年卡雷爾（Carrel）（法國醫(yī)學家、生物學家，1912年諾貝爾生理醫(yī)學獎）設計了用于動物細胞培養(yǎng)的卡式培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)雞胚心肌組織獲得成功。培養(yǎng)瓶的形狀主要是適合細胞貼壁生長和顯微鏡觀察的扁平形狀。培養(yǎng)瓶主要有高硼硅玻璃培養(yǎng)瓶與聚苯乙烯塑料培養(yǎng)瓶。當前第16頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)方式動物細胞培養(yǎng)可以分為貼壁培養(yǎng)、固定化培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)三大類。1、貼壁培養(yǎng)：細胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng)。優(yōu)點：容易更換培養(yǎng)液；容易采用灌注式培養(yǎng)、不需過濾系統(tǒng)；同一設備可采用不同的培養(yǎng)液、適用于所有類型細胞。缺點：擴大培養(yǎng)比較困難、投資大；占地面積大；不能有效監(jiān)測細胞的生長。（1）貼壁材料要求：具有親水性、正電荷。常用材料：硅硼酸玻璃（卡氏培養(yǎng)瓶等）、聚苯乙烯（96孔培養(yǎng)板等）對微載體而言還要求具一定三維結構。當前第17頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)方式（2）貼附生長過程游離期：接種的細胞在培養(yǎng)液中呈懸浮態(tài)。吸附期：不同類型的細胞的貼壁時間有所差異，多數細胞都可在24小時內貼壁。繁殖期：懸浮細胞貼壁后經過一段停滯后開始分裂。隨著細胞數量的增多，細胞間開始接觸并連接成片。出現接觸性抑制。退化期：細胞長滿培養(yǎng)瓶壁，隨著營養(yǎng)物的消耗和代謝物的積累，密度抑制現象出現，細胞開始退化。如不及時傳代培養(yǎng)，細胞會從瓶壁上脫落死亡。當前第18頁\共有52頁\編于星期五\23點細胞貼壁過程當前第19頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)方式2、固定化培養(yǎng)可以采用類似植物細胞固定化培養(yǎng)的方法對動物細胞進行固定化培養(yǎng)。具有細胞生長密度高、抗剪切力和抗污染能力強等優(yōu)點，細胞易于產物分開，有利于產物分離純化。固定化方法與植物細胞類似。3、懸浮培養(yǎng)細胞在反應器中自由懸浮生長。主要用于非貼壁依賴型細胞培養(yǎng)，雜交瘤細胞、血液白細胞、淋巴細胞，某些腫瘤細胞等屬于此類細胞。貼壁型細胞貼附在微載體上或者包裹在微囊中后可以接種在適當生物反應器中實現懸浮培養(yǎng)。當前第20頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞小規(guī)模培養(yǎng)1、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法1923年，卡雷爾（Carrel）設計成功卡氏瓶，可以保證動物細胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境和生長空間。培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法是目前動物細胞小規(guī)模培養(yǎng)的主要方法之一。當前第21頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞小規(guī)模培養(yǎng)2、培養(yǎng)板培養(yǎng)法（微量培養(yǎng)法）現代體外培養(yǎng)技術最為常用的方法之一。基本要點：將培養(yǎng)細胞接種在培養(yǎng)板的孔內，然后在CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。常用的培養(yǎng)板有6孔、24孔、96孔培養(yǎng)板。當前第22頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞小規(guī)模培養(yǎng)3、灌注小室培養(yǎng)法1912年由伯羅設計了一種簡單的灌注小室培養(yǎng)模型。基本要點：將細胞接種于一個由上下兩個蓋玻片（分別構成上壁與下壁）與一金屬圈（構成側壁）密封圍成的小室內，保持在一定條件下培養(yǎng)。在小室的側面分別有液體流入和流出的開口，供新鮮培養(yǎng)液流入和舊培養(yǎng)液排出。顯著特點：營養(yǎng)液可以循環(huán)供應當前第23頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞小規(guī)模培養(yǎng)4、轉管培養(yǎng)法1933-1934年，蓋爾（Gey）和劉易斯（Lewis）建立了旋轉管培養(yǎng)方法，將培養(yǎng)物接種于一管狀培養(yǎng)器皿中，再將其固定在一可以旋轉的裝置上旋轉培養(yǎng)。旋轉管培養(yǎng)方法克服了靜置培養(yǎng)的不足，例如：細胞生長環(huán)境不均勻、不利于營養(yǎng)的吸收等，培養(yǎng)物可以交替地接觸培養(yǎng)液和氣體環(huán)境，利于細胞或組織生長。當前第24頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞原代培養(yǎng)接種組織塊直接長出單層細胞或將組織分散成單個細胞再進行培養(yǎng)，在首次傳代前的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)（Primaryculture）。一般持續(xù)1-4周。在這個階段，細胞有分裂但不旺盛。細胞多呈二倍體核型，這樣的細胞稱為原代細胞（Primarycell）。優(yōu)點：1、組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大變化，在一定程度上能反映體內的形態(tài)學特征。2、在供體來源充分、生物學條件穩(wěn)定的情況下，原代細胞是很好的實驗材料，例如藥物測試、研究細胞分化等。當前第25頁\共有52頁\編于星期五\23點1、組織塊原代培養(yǎng)組織塊原代培養(yǎng)是比較常用的簡易的原代培養(yǎng)方法，也是早期動物細胞培養(yǎng)方法。以培養(yǎng)瓶培養(yǎng)為例：（1）剪刀剪碎組織形成1mm2的組織塊，用吸管吸出組織塊一一放入培養(yǎng)瓶內，一般每小塊間隔為厘米，使其均勻貼在培養(yǎng)瓶的壁上。（2）然后將貼有組織塊的瓶壁朝上，加入培養(yǎng)液，塞上瓶塞，傾斜置于37℃的CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)2-4小時后，將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉平放，靜置培養(yǎng)。24小時后補充培養(yǎng)液，一般3-5天更換培養(yǎng)液。（3）一般情況下，組織塊貼壁后24小時細胞就從組織塊四周長出，5-7天組織塊中央的組織細胞逐漸壞死脫落，組織塊四周的貼壁細胞也逐漸形成層片。當前第26頁\共有52頁\編于星期五\23點2、細胞原代培養(yǎng)酶解制備單細胞：根據不同的組織對象采用適當的酶消化液獲得動物細胞進行培養(yǎng)。胚胎等組織細胞潛伏期短，第二天既可見生長，一周便可接連成片；成體組織來源的細胞潛伏期長，一般要一周左右。最常用的酶解液有胰蛋白酶和膠原酶，鏈霉蛋白酶、粘蛋白酶、蝸牛酶等也可用于動物細胞的消化。EDTA適合消化傳代細胞，常與胰蛋白酶一起使用。當前第27頁\共有52頁\編于星期五\23點熱消化冷消化當前第28頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)（Passageculture/Subculturing）是指將原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉接培養(yǎng)的過程。細胞的體外大量增殖以及細胞系的建立是通過傳代培養(yǎng)實現的。注意：每進行一次分離再培養(yǎng)稱為傳一代。這里的傳代代數與細胞代數或倍增不同，“一代”是指從細胞接種培養(yǎng)到分離再培養(yǎng)期間的一段時間。在細胞一代中，細胞約能倍增3～6次。懸浮生長的細胞可以采用加入新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散傳代，或者采用離心或沉降法加入新鮮培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。貼壁生長的細胞需要進行細胞分離重新接種培養(yǎng)。一般采用酶消化法進行傳代培養(yǎng)。當前第29頁\共有52頁\編于星期五\23點傳代培養(yǎng)方法1、吸出或者倒掉培養(yǎng)瓶內的舊培養(yǎng)液。2、加入胰蛋白酶和EDTA混合液蓋滿瓶底，輕輕搖動培養(yǎng)瓶。3、2-5分鐘后檢查，有細胞間隙變大、細胞質回縮現象時添加培養(yǎng)液終止消化。4、吸出消化液，加入Hanks液輕輕轉動，洗去殘留消化液。5、加入培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打瓶壁，使細胞脫落制成懸液。6、計數，接種進行傳代培養(yǎng)。酶消化法當前第30頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞培養(yǎng)的一般過程動物細胞體外培養(yǎng)一般經過：1、組織獲得與消化2、接種3、原代培養(yǎng)4、傳代培養(yǎng)當前第31頁\共有52頁\編于星期五\23點當前第32頁\共有52頁\編于星期五\23點細胞培養(yǎng)過程分析與監(jiān)測1、細胞形態(tài)檢查及活力分析：倒置顯微鏡下觀察；四唑鹽（MTT）法可以對細胞活力進行分析（活細胞的線粒體脫氫酶能將四唑鹽還原成不溶于水的藍紫色產物甲暨[jì]并沉淀在細胞中）。2、pH及污染檢查：含血清的新鮮培養(yǎng)液呈桃紅色，pH在7.2～7.4之間。CO2的積累使培養(yǎng)液pH下降。當超出緩沖范圍時，培養(yǎng)液變黃，需3～4天更換一次培養(yǎng)液。CO2培養(yǎng)箱能自動控制5%的CO2含量。細菌污染時培養(yǎng)液變渾濁；支原體易透過濾器，污染不易被發(fā)現。當前第33頁\共有52頁\編于星期五\23點細胞系與細胞株1.細胞系(Cellline)是由原代培養(yǎng)經傳代培養(yǎng)純化，獲得的以一種細胞為主的、能在體外長期生存的不均一的細胞群體。第一次傳代培養(yǎng)后的細胞即稱之為細胞系。不能連續(xù)培養(yǎng)的為有限細胞系(Finitecellline)，能連續(xù)培養(yǎng)下去的為連續(xù)細胞系(Infinitecellline)。2.細胞株(Cellstrain)是指從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。細胞株的建立需要從細胞系群體中分離出一個細胞，并使其在體外繁殖成為新細胞群體。當前第34頁\共有52頁\編于星期五\23點靶細胞的分離純化靶細胞的分離純化方法分為自然純化和人工純化。1、自然純化是多次傳代過程中，利用混合系中某一種細胞的增殖優(yōu)勢不斷排擠其他類型細胞而最終被純化的方法。此方法費時費力，選擇純化的細胞具有盲目性。2、人工純化根據某一類型的細胞生長條件，抑制其他細胞生長，從而達到純化的目的。（1）細胞因子依賴法：利用靶細胞對特殊細胞因子的需求與其他細胞分離。（2）反復貼壁法：利用不同細胞貼壁速度快慢的差異進行分離。（3）酶消化法：利用不同細胞對消化酶的耐受性差異進行分離。（4）機械法：硅膠軟刷刮除非靶細胞。當前第35頁\共有52頁\編于星期五\23點細胞株的純化細胞株的建立需要從細胞系群體中分離出一個細胞，并進行體外繁殖成為新的細胞群體。1、毛細管法：通過無限稀釋法將細胞稀釋成1個細胞/ml，然后在顯微鏡下用毛細管將細胞分離出來單獨培養(yǎng)形成單克隆細胞群體。2、有限稀釋法：將細胞懸液梯度稀釋后接種到96孔板，進行一定時間的培養(yǎng)，理論上某一個孔中會有單克隆細胞群體。當前第36頁\共有52頁\編于星期五\23點適合工業(yè)化生產的細胞株原代細胞傳代細胞二倍體細胞異倍體細胞融合細胞轉化細胞基因工程細胞有限系細胞無限系細胞永生細胞正常細胞當前第37頁\共有52頁\編于星期五\23點轉化細胞轉化細胞是指細胞發(fā)生遺傳改變而產生永生化，即由有限性細胞系轉化為無限性細胞系，可以在體外進行無限傳代和生長繁殖。轉化細胞方法：1.細胞自轉化體外培養(yǎng)的細胞自發(fā)出現的轉化現象。這種現象在許多正常二倍體長期傳代過程中出現?？赡艿囊蛩匕ǎ貉遒|量、溫度或pH不穩(wěn)定、病毒污染等。2.人工誘發(fā)轉化采用誘導劑使正常細胞發(fā)生轉化。凡是可以改變DNA結構的因素都可以稱為誘導劑，包括化學、物理和病毒誘導劑。當前第38頁\共有52頁\編于星期五\23點常用細胞株CHO細胞(Chinesehamsterovarycell)：中國倉鼠卵巢細胞，亞二倍體(2n-1)，有多種突變株。貼壁生長，也可以懸浮培養(yǎng)，對剪切力和滲透壓改變有較高的忍受能力。CHO細胞能表達糖基化蛋白藥物：組織纖維蛋白溶酶原激活劑(tPA)、促紅細胞生成素（EPO）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、粒細胞集落刺激因子（GCSF）、DNA酶I、凝血因子VIII等。當前第39頁\共有52頁\編于星期五\23點常用細胞株Vero細胞（Verocell）:是1962年日本從非洲綠猴腎中分離的細胞。成上皮型，異倍體，貼壁型，是最常用的大規(guī)模培養(yǎng)的動物細胞之一。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、脊髓灰質炎、狂犬病毒。當前第40頁\共有52頁\編于星期五\23點常用細胞株293T細胞（293tcell）:

293細胞系是原代人胚腎細胞轉染5型腺病毒（Ad5）DNA的永生化細胞。此細胞室溫不貼壁，37℃幾日后重新貼壁。當前第41頁\共有52頁\編于星期五\23點動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)：在人工條件下（pH值、氧氣、二氧化碳、營養(yǎng)、溫度等）進行高密度大量增殖細胞的技術。培養(yǎng)流程：組織--》消化--》原代培養(yǎng)--》傳代培養(yǎng)（細胞系和細胞株）--》小規(guī)模培養(yǎng)（培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿）--》大規(guī)模培養(yǎng)（生物反應器）--》代謝產物（分離、純化）當前第42頁\共有52頁\編于星期五\23點1、轉管/瓶培養(yǎng)系統(tǒng)轉瓶培養(yǎng)是在轉管培養(yǎng)基礎上為擴大培養(yǎng)量而改進的。轉瓶或轉管固定在旋轉支架上，傾斜角度一般為5o-10o。細胞貼附在轉瓶或轉管的內表面，培養(yǎng)液隨旋轉而流動，細胞交替接觸營養(yǎng)和空氣，利于細胞吸收營養(yǎng)、進行氣體交換。當前第43頁\共有52頁\編于星期五\23點2、微載體培養(yǎng)系統(tǒng)微載體培養(yǎng)是將傳統(tǒng)的一維平面貼附擴展為三維立體貼附，增加了貼壁細胞的貼壁面積，有利于貼壁細胞的大規(guī)模工業(yè)化培養(yǎng)。微載體指直徑60-250μm，能適用于貼壁細胞生長的微珠。微載體一般是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成。顯微鏡下的高密度微載體當前第44頁\共有52頁\編于星期五\23點優(yōu)良的微載體應具有的特性不含能毒害細胞的成分；微載體須與細胞有良好的相容性，一般帶正電荷；密度應略大于培養(yǎng)基；粒徑在40～120μm范圍，生理鹽水溶脹后增大到60~250μm，粒度分布地均勻，徑差不大于20~25μm；良好的光學透明性；能在PBS中耐120~125℃、20~30min高溫滅菌；應是非剛性材料；不吸收培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分；收獲細胞或細胞制品容易，不影響蛋白質分離純化；價廉，能重復使用。當前第45頁\共有52頁\編于星期五\23點微載體的類型目前市售（國際）種類有十幾種以上：大孔明膠微載體、聚苯乙烯微載體、PHEMA微載體、甲殼質微載體、聚氨酯泡沫微載體、藻酸鹽凝膠微載體以及磁性微載體等。常用的微載體主要是固體微載體，包括實心微載體和多孔微載體。實心微載體：細胞能貼附在微載體表面生長。多孔微載體：微載體內部具有網狀結構的小孔，細胞在微載體的內部生長。當前第46頁\共有52頁\編于星期五\23點微載體培養(yǎng)原理將對細胞無害的顆粒（微載體）加入到培養(yǎng)容器的培養(yǎng)液中，作為載體，使細胞在微載體表面附著生長，同時通過持續(xù)攪動使微載體始終保持懸浮狀態(tài)。絲網微載體通氣的