第四章微生物生長與生活環(huán)境

第四章微生物生長與生活環(huán)境第一頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)微生物純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室條件下，由一個微生物細(xì)胞繁殖得到的后代。純培養(yǎng)基本步驟：稀釋平皿法劃線法單細(xì)胞挑取法純培養(yǎng)方法(2)培養(yǎng)

(1)分離一、微生物純培養(yǎng)的概念第二頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)1、稀釋平板分離法：傾注平板法和涂布平板法。基本過程：（1）梯度稀釋過程；（2）分離培養(yǎng)過程涂布傾注梯度稀釋過程10-110-210-310-410-510-6第三頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第四頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一2、單細(xì)胞挑取法：從待分離材料中挑取一個細(xì)胞來培養(yǎng)，從而獲得純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)第五頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一3、平皿劃線法用接種環(huán)沾少許待分離的材料，在培養(yǎng)基表面進(jìn)行多次平行劃線，使微生物細(xì)胞分開生長以獲得微生物純培養(yǎng)的過程。第一節(jié)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)第六頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一三、微生物無菌操作與接種技術(shù)培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個過程叫做無菌接種操作。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無菌操作。（1）培養(yǎng)基與接菌工具的滅菌（2）保證接菌過程的無菌操作第七頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一滅菌方法一、高溫滅菌濕熱滅菌干熱滅菌：干燥條件，160℃維持1-2h。高壓蒸汽滅菌法：密閉條件下，水加熱蒸發(fā)形成高壓的同時產(chǎn)生高溫。利用高溫殺死菌。巴斯德消毒法：采用60-70℃的溫度處理15-30min

的消毒方法。間歇滅菌法：100℃，30-60min

冷卻，37℃培養(yǎng)1d反復(fù)三次第八頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一1、紫外線：殺菌波長范圍：240—300nm殺菌力最強(qiáng)范圍：255—265nm

二、輻射紫外線殺菌特點(diǎn)：穿透力差，用作表面消毒或空氣滅菌，30min滅菌95%以上2、放射性同位素：Co60等，主要用于誘變產(chǎn)生新品種第九頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一（一）純培養(yǎng)的保存第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯保存過程的注意點(diǎn)：防止雜菌污染。1、傳代保存法2、液體石蠟覆蓋保存法3、載體保存法4、懸液保存法5、寄主保存法6、冷凍保存法第十頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一（二）純培養(yǎng)的衰退與復(fù)壯第一節(jié)微生物純培養(yǎng)四、純培養(yǎng)的保存與復(fù)壯衰退的原因：衰老、變異衰退的表現(xiàn)：生長緩慢優(yōu)良性狀的喪失抗逆性下降衰退的預(yù)防：控制傳代頻率創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件采取有效的保存方式復(fù)壯選優(yōu)汰劣第十一頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律微生物生長量的測定微生物數(shù)量的測定顯微鏡直接計數(shù)法平板計數(shù)法比濁法稱重法含N量測定法DNA含量測定法ATP含量測定法代謝活性法微生物重量的測定第十二頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一(一)微生物數(shù)量的測定

1、顯微鏡直接計數(shù)法使用細(xì)菌計數(shù)板或血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，計數(shù)直觀。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律第十三頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一2、平板計數(shù)法對樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成的菌落數(shù)計數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：傳統(tǒng)計數(shù)方法。對設(shè)備要求不高。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律10-310-510-410-6第十四頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一３、比濁計數(shù)法根據(jù)細(xì)菌懸浮液的吸光度測定其數(shù)量。優(yōu)點(diǎn)：簡便，直接。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律第十五頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一(二)微生物重量的測定

1、稱重法用離心或過濾的方法將菌體從培養(yǎng)基中分離、冼凈，稱濕重或干重。優(yōu)點(diǎn)：簡單可靠。一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律在活性污泥法中采用的指標(biāo)：（1）混合液懸浮固體(MLSS)（粗放測定）

污泥—干燥----稱重(W1)（2）揮發(fā)性懸浮固體(MLVSS)（相對準(zhǔn)確）

上述已稱重污泥-----馬福爐(500度2小時)----冷卻---稱重(W2)第十六頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一(二)微生物重量的測定

2、含氮量測定法

根據(jù)樣品中菌體蛋白質(zhì)含量計算微生物重量的方法。

一、微生物生長量的測定第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律原理：（1）微生物蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定（2）氮是蛋白質(zhì)的穩(wěn)定成分

(蛋白質(zhì)量=6.25×總含N量)優(yōu)點(diǎn)：測定準(zhǔn)確?！埃俊钡谑唔?，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律（1）分批培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)第十八頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律分批培養(yǎng)(batchculture)：將少量的菌體接種到一定體積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，最后一次性收獲的過程。第十九頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一生長曲線(growthcurve)代表細(xì)菌在新的適宜的環(huán)境中生長、繁殖、衰老、死亡的動態(tài)變化。生長曲線：以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)目的對數(shù)為縱坐標(biāo)繪制成的曲線圖。第二十頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一

根據(jù)細(xì)菌生長繁殖速率將生長曲線分四個階段：第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律緩慢期對數(shù)期穩(wěn)定期衰亡期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律第二十一頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律緩慢期（延遲期、滯留適應(yīng)期）滯留適應(yīng)期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律特點(diǎn)：分裂遲緩。產(chǎn)生及影響緩慢期長短的因素１、培養(yǎng)基成分２、菌株的遺傳性３、接種量４．接種時的機(jī)械損傷引第二十二頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)微生物純培養(yǎng)群體生長規(guī)律對數(shù)期（指數(shù)生長期）特點(diǎn)：（1）代謝活性強(qiáng)（2）世代時短而穩(wěn)定對數(shù)生長期二、細(xì)菌分批培養(yǎng)群體生長規(guī)律Nt=2nN0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0)

n——繁殖代數(shù)；G——世代時(每繁殖一代所需的時間)N0——對數(shù)生長期開始微生物數(shù)量

Nt——對數(shù)生長期經(jīng)過時間t后微生物數(shù)量第二十三頁，共二十五頁，編輯于2023年，星期一例題：利用250ml三角瓶培養(yǎng)菌體細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)初利用分光光度計在600nm

測得菌體濃度為OD=0.1,(設(shè)每個OD=100個/ml)，培養(yǎng)24小時后測