還原糖檢測(cè)方法

糖液質(zhì)量的檢測(cè)方法1、 糖漿OD值的檢測(cè)方法：1ml糖漿樣品(DS%^30%)+9ml無(wú)水乙醇，迅速混勻后，在650nm下測(cè)其OD值。2、 斐林滴定法測(cè)DE值淀粉酶將淀粉水解成短鏈的糊精及少量的葡萄糖。斐林試劑由甲乙液組成，甲液為硫酸銅溶液，乙液為氫氧化鈉與酒石酸鉀鈉溶液。平時(shí)甲、乙液分別儲(chǔ)存，測(cè)定時(shí)才等體積混合，混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)，生成氫氧化銅沉淀。NaOH+CuSO4-Cu(OH)2+N&SO4生成的氫氧化銅和酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成酒石酸鉀鈉與銅的絡(luò)合物，使氫氧化銅溶解。COOK(CHOH)2COONa+Cu(OH)2—COOK(CHO)2CuCOONa+2H2O酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物中的二價(jià)銅就是一個(gè)氧化劑，能使還原糖氧化，而二價(jià)銅被還原成一價(jià)的紅色氧化亞銅沉淀：2Cu(OH)2—COOK(CHO)2CuCOONa+CHO(CHOH)4CH2OH+2H2O—2COOK(CHOH)2COONa+COOH(CHOH)4CH2OH+Cu2O剩余的二價(jià)銅在酸性調(diào)價(jià)下與碘化鉀反應(yīng)，生成碘，用硫代硫酸鈉滴定，I2被還原成I-，隨著其緩緩加入，顏色由棕黃色逐漸變成黃色，當(dāng)呈現(xiàn)淡黃色時(shí)，2%的淀粉指示劑，緩慢滴加硫代硫酸鈉直至溶液中的藍(lán)色消失，為淺粉色，即為滴定終點(diǎn)。通過(guò)這個(gè)反應(yīng)，能夠測(cè)量存在于淀粉水解物中的還原糖含量。用純水代替樣品與斐林試劑反應(yīng)，所消耗硫代硫酸鈉的體積為空白值。定義：葡萄糖當(dāng)量濃度(DE)代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖計(jì)算的還原糖含量占十物質(zhì)的百分率，其數(shù)值的大小與淀粉水解的程度成正比?；瘜W(xué)試劑:NaCO2 3CHOKNa,4HO446 2CuSO4NaOH葡萄糖(Dextrose)；HPLC級(jí)KII2H2SO4Na2S2O35H2O蒸餾水試劑：試劑配置方法有效期斐林試劑：甲液69.3gCuSO45H2O溶解在大約600ml蒸餾水中，將其轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度線6個(gè)月斐林試劑：乙液346gC4H4O6KNa4H2O和100gNaOH溶解在大約800ml蒸餾水中，將其轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度線。6個(gè)月30%(w/v)KI溶液300gKI溶解到800ml蒸餾水中，加3ml1NNaOH，將其轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度線，放在棕色瓶中保存。6個(gè)月26%硫酸溶液放置大約750ml蒸餾水于一個(gè)1L的燒杯中，但上手套和防護(hù)眼鏡，在連續(xù)攪拌的狀態(tài)下，非常緩慢的加入145ml96%的硫酸，攪拌至溶液變涼，將其轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度線。6個(gè)月0.1N硫代硫酸鈉溶解25gNa2S2O35H2O和0.2gNa2CO3在500ml預(yù)先煮沸并冷卻的水中，將其轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，用此水定容至刻度線，儲(chǔ)存在棕色試劑瓶中。6個(gè)月葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制1、 調(diào)解電磁爐的加熱功率，使45ml,25°C的水在2.75~3.25min分鐘達(dá)到沸騰;2、 水空白值的滴定：加入25ml的蒸餾水，10ml斐林試劑甲液，10ml斐林乙液于250ml的三角瓶中。搖勻后，放在電爐上加熱，沸騰2min后，放在冰箱中將其冷卻到30^以下。加入10ml30%KI和10ml26%HSO搖勻后用1.0NNaSO滴定2 4 223滴定過(guò)程中不斷的搖勻，隨著硫代硫酸鈉的緩慢加入，顏色由棕黃色逐漸變?yōu)辄S色，當(dāng)呈現(xiàn)淺黃色時(shí)，加入2%的淀粉指示劑，緩慢滴加硫代硫酸鈉至溶液藍(lán)色消失，為淺紅色，即為滴定終點(diǎn)。記錄硫代硫酸鈉的體積，即為空白滴定值。3、 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液滴定加入20ml蒸餾水，5ml1%的葡萄糖溶液，10ml斐林甲液，10ml斐林乙液試劑于250ml三角瓶中。加入25ml蒸餾水，10ml斐林甲液，10ml斐林乙液試劑與50ml三角瓶中?；靹蚝?，放在電爐上加熱，沸騰2分鐘后，放在冰箱中迅速冷卻到30r以下。加入10ml30%KI和10ml26%H2SO4混勻后用0.1N硫代硫酸鈉滴定。滴定過(guò)程中不斷的搖勻，隨著硫代硫酸鈉的緩緩加入，顏色由棕黃色逐漸變?yōu)辄S色，但呈現(xiàn)黃色時(shí)，加入2%的淀粉指示劑，緩慢加入硫代硫酸鈉直至溶液藍(lán)色消失，為淺粉色，即為滴定終點(diǎn)。記錄硫代硫酸鈉的體積，即為葡萄糖的滴定值。4、 液化液、糖化液DE的測(cè)定稱0.2g的液化液（0.1g的糖化液）到250ml三角瓶中，用移液管加24.8ml（或24ml）的蒸餾水，記錄液化液的質(zhì)量。加入10ml斐林甲液，10ml斐林乙液到這個(gè)三角瓶中。搖勻后，放在電爐上加熱，沸騰2min后，放在冰箱中迅速冷卻到30r以下。加入10ml30%KI和10ml26%H2SO4搖勻后用0.1N硫代硫酸鈉滴定。滴定過(guò)程中不斷的搖勻，隨著硫代硫酸鈉的緩慢加入，顏色由棕黃色變?yōu)辄S色，當(dāng)呈現(xiàn)黃色時(shí)，加入2%的淀粉指示劑，緩慢加入硫代硫酸鈉直至溶液藍(lán)色消失，變?yōu)榉凵珪r(shí)，即為滴定終點(diǎn)。記錄硫代硫酸鈉的體積，即為樣品滴定值。(^-^)X500 =